Notch1、VEGF在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及臨床意義

馬東華，時(shí)志民，鄭彥強(qiáng)

(1. 河北省大名縣婦幼保健院，河北 大名 056900；2. 河北工程大學(xué)，河北 邯鄲 056000，3. 河北省邯鄲市婦幼保健院，河北 邯鄲 056002)

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Notch1、VEGF在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及臨床意義

馬東華1，時(shí)志民2，鄭彥強(qiáng)3

(1. 河北省大名縣婦幼保健院，河北 大名 056900；2. 河北工程大學(xué)，河北 邯鄲 056000，3. 河北省邯鄲市婦幼保健院，河北 邯鄲 056002)

[摘要]目的探討轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1 (Notch1)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)情況及臨床意義。方法收集子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本68例為實(shí)驗(yàn)組，并選取正常子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本32例為對(duì)照組，采用EliVisionTM免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組Notch1和VEGF的表達(dá)情況。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組中Notch1和VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。Notch1和VEGF的表達(dá)與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、cTNM、分化程度有關(guān)(P<0.05)；Notch1和VEGF表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論Notch1和VEGF在子宮內(nèi)膜癌組織的表達(dá)情況與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)，臨床檢測(cè)二者表達(dá)情況可為評(píng)估子宮內(nèi)膜癌嚴(yán)重程度提供參考。

[關(guān)鍵詞]子宮內(nèi)膜癌組織；Notch1蛋白；VEGF蛋白；EliVisionTM免疫組化；生存率

子宮內(nèi)膜癌為女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，發(fā)病率居女性惡性腫瘤的第2位，且近年來(lái)有上升趨勢(shì)，早期診斷該病成為目前亟待解決的問(wèn)題。多種細(xì)胞信號(hào)系統(tǒng)參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程，在通路中某一環(huán)節(jié)的異常可致細(xì)胞生長(zhǎng)失控,最終導(dǎo)致腫瘤形成。Notch1在細(xì)胞發(fā)育、增殖、分化和凋亡的過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，而VEGF在組織血管生成過(guò)程中起到重要作用，本研究采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)了Notch1和VEGF在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)情況，旨在探討二者表達(dá)情況與子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系。

1研究資料

1.1一般資料選取2010年1月—2014年12月大名縣婦幼保健院收治并存檔的68例子宮內(nèi)膜癌患者癌組織蠟塊為實(shí)驗(yàn)組，患者年齡56～71歲，中位年齡62.9歲，按照WHO標(biāo)準(zhǔn)[1]對(duì)全部病例的切片進(jìn)行復(fù)查。另選取正常子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本32例作為對(duì)照組，患者年齡55～70歲，中位年齡62.5歲。

1.2研究方法S-P試劑盒、二硝基聯(lián)苯胺(DAB)顯色液及兔抗人Notch1單克隆抗體和兔抗人VEGF多克隆抗體均購(gòu)自武漢博士德生物技術(shù)有限公司。采用EliVisionTM法,先進(jìn)行抗原修復(fù)，抗體為兔抗人Notch1和兔抗人VEGF(1∶100)，取已知切片作為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，鏡下觀察。Notch1陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞核，VEGF陽(yáng)性表達(dá)主要定位于細(xì)胞漿和細(xì)胞膜，以在細(xì)胞核或胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性信號(hào)。每張切片均隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野(×400)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%為(-)，5%～25%為(+)，26%～50%為()，>50%為()。+～為陽(yáng)性表達(dá)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用2檢驗(yàn),相關(guān)性分析用 Spearman 等級(jí)相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1Notch1和VEGF在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)情況Notch1陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞核，VEGF陽(yáng)性表達(dá)主要定位于細(xì)胞漿和細(xì)胞膜，見(jiàn)圖1和圖2。

圖1　Notch1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)情況(SP,×100)

圖2　VEGF在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)情況(SP,×100)

2.22組Notch1和VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)情況對(duì)照組中Notch1蛋白陽(yáng)性表達(dá)29例(88%)，VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)10例(31)；實(shí)驗(yàn)組中Notch1陽(yáng)性表達(dá)30例(44%)，VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)57例(75%)。2組中Notch1和VEGF陽(yáng)性表達(dá)率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。

2.3Notch1和VEGF在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)與病理指標(biāo)的關(guān)系Notch1和VEGF在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期有關(guān) (P均<0.05)；且Notch1與肌層浸潤(rùn)程度有關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1　Notch1和VEGF在子宮內(nèi)膜癌組織中的

2.4子宮內(nèi)膜癌組織中Notch1與VEGF表達(dá)的相關(guān)性Notch1、VEGF在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)呈明顯正相關(guān)(r=-0.513，P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2　子宮內(nèi)膜癌組織中Notch1與VEGF

3討論

目前子宮內(nèi)膜癌發(fā)病機(jī)制仍不清楚，可能與雌激素、子宮內(nèi)膜增生過(guò)長(zhǎng)、體質(zhì)、絕經(jīng)后延、遺傳等有關(guān)，早期癥狀不典型，難以早期診斷。研究發(fā)現(xiàn)Notch信號(hào)通路參與腫瘤的發(fā)生，該通路家族成員眾多，在哺乳動(dòng)物中包括Notch1、Notch1、Notch3和Notch4 4個(gè)受體[2-3]，其中Notch1是Notch信號(hào)通路中研究最為廣泛的受體[4]，其參與腫瘤的發(fā)生，并且在不同的惡性腫瘤組織中表達(dá)水平不同，表現(xiàn)為致癌或抑癌作用，如在乳腺癌、結(jié)腸癌和血液系統(tǒng)腫瘤[5-7]等組織中呈現(xiàn)高表達(dá)，為致癌作用；但是在皮膚鱗狀細(xì)胞癌、胃癌[8-9]中呈現(xiàn)低表達(dá)，起到抑癌、拮抗作用。本研究對(duì)Notch1在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)情況進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，Notch1在子宮內(nèi)膜癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于正常子宮內(nèi)膜組織，在子宮內(nèi)膜癌組織中表現(xiàn)為抑癌作用，應(yīng)該是Notch1抑制組織內(nèi)的細(xì)胞通路，重點(diǎn)是抑制PI3K/Akt通路和Wnt通路從而抑制癌細(xì)胞的增生；并且Notch1在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)情況與病理分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，說(shuō)明在病理分期較晚、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織中Notch1呈現(xiàn)低表達(dá)，其水平的下降抑制相關(guān)通路(Wnt通路等)的作用呈現(xiàn)能力不足，起不到抑制腫瘤發(fā)展的作用，水平高低側(cè)面反映出子宮內(nèi)膜癌的預(yù)后和惡性程度情況；但 Notch1表達(dá)情況與組織類型沒(méi)有相關(guān)性，考慮到也許是標(biāo)本量的不足，需要在以后工作中多收集病例資料和隨訪工作，科學(xué)地反映其真實(shí)水平。

VEGF在臨床上已經(jīng)被廣泛關(guān)注，其可促進(jìn)組織血管生成，尤其在腫瘤的血管生成過(guò)程中，新生血管為腫瘤生長(zhǎng)提供必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)維持其代謝[10]，另外血管也是腫瘤生長(zhǎng)、發(fā)生浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)，是重要的轉(zhuǎn)移途徑。有大量證據(jù)證明VEGF在腫瘤組織中高表達(dá)[11-12]，作用機(jī)制公認(rèn)是降解血管內(nèi)皮細(xì)胞基質(zhì)、破壞血管屏障作用，增加滲透作用，促進(jìn)大量的癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移進(jìn)入血液循環(huán)而轉(zhuǎn)移到遠(yuǎn)處。本研究結(jié)果顯示，在子宮內(nèi)膜癌組織中VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織，并且與腫瘤分化程度、浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期有關(guān)，提示VEGF可促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移，其高表達(dá)直接證明預(yù)后差，值得臨床醫(yī)生關(guān)注。

Spearman相關(guān)性分析顯示，Notch1和VEGF在子宮內(nèi)膜癌組織中呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，提示Notch1表達(dá)的增高可能負(fù)反饋?zhàn)饔糜赩EGF，抑制并且阻斷VEGF促血管生長(zhǎng)作用，使腫瘤血管形成受阻，從而起到抑癌作用。VEGF在臨床上檢測(cè)較多，故檢測(cè)Notch1目前只是在實(shí)驗(yàn)室層面上檢測(cè)，Notch1在有條件的醫(yī)院可以推廣，為進(jìn)一步研究子宮內(nèi)膜癌提供幫助。

總之，Notch1和VEGF在子宮內(nèi)膜癌組織的表達(dá)情況與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)，臨床檢測(cè)二者表達(dá)情況可為評(píng)估子宮內(nèi)膜癌嚴(yán)重程度提供參考。

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[收稿日期]2015-11-14

[通信作者]時(shí)志民,E-mail:shizhimin1980@163.com

[中圖分類號(hào)]R737.33

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B

[文章編號(hào)]1008-8849(2016)14-1568-02

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.14.032