單籠與群居飼養對雌性食蟹猴生理指標的影響

李 偉, 金 益, 柏 熊, 王曉東, 邢正弘, 王校權

(1. 上海西普爾-必凱實驗動物有限公司, 上海 201203; 2. 上海實驗動物研究中心, 上海 201203; 3. 上海本莊生物科技有限公司, 上海 201403)

單籠與群居飼養對雌性食蟹猴生理指標的影響

李 偉1,2, 金 益1,2, 柏 熊1,2, 王曉東1,2, 邢正弘1,2, 王校權3

(1. 上海西普爾-必凱實驗動物有限公司, 上海 201203; 2. 上海實驗動物研究中心, 上海 201203; 3. 上海本莊生物科技有限公司, 上海 201403)

目的 了解單籠與群居飼養雌性食蟹猴生理指標的差異。方法 選取9只4～6歲雌性食蟹猴作為實驗對象，前5個月單籠飼養，后5個月群居飼養。對體質量、體溫、血常規、血生化、尿常規等生理指標進行測定。采用重復測量方差分析比較兩階段指標是否存在差異。結果 食蟹猴單籠階段的體質量顯著低于群居階段(P＜0.05)。血常規中，單籠階段的白細胞計數(WBC)、嗜中性粒細胞計數(NEUT)、嗜中性粒細胞百分比(NEUT%)極顯著高于群居階段(P＜0.01); 單籠階段的單核細胞計數(MONO)、單核細胞百分比(MONO%)極顯著低于群居階段(P＜0.01); 單籠階段的淋巴細胞百分比(LYMPH%)顯著低于群居階段(P＜0.05)。血液生化中，單籠階段的總膽紅素(TBIL)極顯著低于群居階段(P＜0.01); 單籠階段的天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、甘油三酯(TG)顯著高于群居階段(P＜0.05)。單籠階段的尿常規中的蛋白質陽性率高于群居階段，組間相比差異顯著(P＜0.05)。其余指標組間相比無統計學差異。結論 食蟹猴更適合群居飼養，如果長期單籠飼養，可能對其體質量及血液學和尿常規中某些指標產生較大影響。

食蟹猴; 雌性; 生理指標; 血液學; 尿常規

食蟹猴(Macaca fascicularis)具有許多與人類相似的生物學特性，并且飼養繁殖相對簡單，被廣泛應用于醫學生物學研究中。特別是在基因工程、生物制劑等藥物的毒理試驗中，食蟹猴作為人類的“替身”，是不可缺少的試驗支撐條件。此外，在一些人類重大傳染病的研究，如艾滋病以及肝炎的防治研究，食蟹猴作為非人靈長類動物更是不可缺少的實驗動物[1]。

本研究初步探討了單籠飼養與群養雌性食蟹猴對其生理指標的影響，以便建立更為合理的飼養管理模式，在保證動物福利的基礎上，為醫學實驗研究提供健康、可靠的實驗動物奠定一定的基礎。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

4～6歲普通級雌性食蟹猴9只, 購于海南金港生物技術股份有限公司[SCXK(瓊)2010-0001]，體質量3～5 kg, 以1～9號不銹鋼彩色頸牌進行編號識別。

1.2 飼養條件

群居飼養于環境開放的, 有憩息架、秋千、巖洞等設施的露天陽光棚, 其規格為10 m×4.2 m× 3.5 m, 單籠飼養于不銹鋼籠具內, 籠具規格65 cm× 70 cm×80 cm，籠具安置在環境開放的露天陽光棚里。溫度26 ℃左右，相對濕度40%～70%。飼喂全價猴專用飼料, 定時加喂水果, 飲水經煮沸滅菌。單籠適應性飼養2個月后開始試驗[SYXK(滬) 2009-0081], 前5個月單籠飼養, 后5個月群居飼養。

1.3 檢測儀器

常用電子體重秤(感量0.1 kg), 華佗佳人PG-900電子體溫計，日本Sysmex xt-2000i全自動血液分析儀，Thermo-legend RT+冷凍離心機，日立-7180型全自動生化分析儀，Uritest 500B尿分析儀。

1.4 測定方法

本實驗所有指標均為隔夜禁食16 h后在每月中旬某日上午測量，單籠與群居階段各連續測量5個月數據。

1.4.1 體質量的測定 用放置在堅實的水平地面的電子體重秤進行稱量, 先稱量人重量, 再將食蟹猴抓出, 人與猴一同站上電子體重秤，獲得人與猴的總重量，以總重量減去人重量得到食蟹猴的體質量。

1.4.2 體溫的測定 在室溫下，把動物用手固定后，動物在相對比較安靜的情況下，用電子體溫計測直腸溫度(溫度計在直腸內放置約60 s)，直至“℃”閃爍停止即記錄體溫[2]。

1.4.3 血常規指標測定 上肢靜脈采血1 mL, 全血用EDTA-K2抗凝，采集后的血液在碎冰中保存，全自動血液分析儀測試如下項目: 紅細胞數(RBC)、血紅蛋白濃度(HGB)、紅細胞壓積(HCT)、平均紅細胞體積(MCV)、平均血紅蛋白(MCH)、平均血紅蛋白濃度(MCHC)、血小板總數(PLT)、血小板平均體積（MPV）、血小板比容(PCT)、白細胞數(WBC)、淋巴細胞數(LYMPH)、單核細胞數(MONO)、嗜中性粒細胞數(NEUT)、嗜酸粒細胞數(EO)、嗜堿粒細胞數(BASO)、淋巴細胞百分率(LYMPH%)、單核細胞百分率(MONO%)、嗜中性粒細胞數百分率(NEUT%)、嗜酸粒細胞百分率(EO%)、嗜堿粒細胞百分率(BASO%)。

1.4.4 血生化指標測定 用促凝劑真空采血管采集血液，采血量為1 mL，采集后的血液置于碎冰中保存。用Thermo-legend RT+冷凍離心機2 500 g，4 ℃，離心15 min，分離血清，用全自動生化分析儀測定如下項目: 天門冬氨酸轉氨酶(AST)、丙氨酸轉氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、總膽固醇(CHOI)、總膽紅素(T-BIL)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、鈉離子(Na+)、鉀離子(K+)、鈣離子(Ca2+)、甘油三脂(TG)、磷(P)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)、肌酐(CREA)、血糖(GLU)、膽堿酯酶(CHE)。

1.4.5 尿常規異常情況檢查 測定當日清晨將潔凈干燥的托盤放置在猴籠下方，用一次性5 mL注射器收集猴尿液，放置于已編號的15 mL離心管中。尿分析儀及配套試紙測定如下指標，判定異常標準見標注: pH值、相對比重(SG)、隱血(BLD，≥10細胞/μL)、酮體(KET，≥0.5 mmol/L)、尿糖(GLU，≥0 mmol/L)、尿蛋白(PRO, ≥0.15 g/L)、尿膽紅素(BIL, ≥8.6 μmol/L)、尿膽原(URO，≥33 μmol/L)、亞硝酸鹽(NIT, 測定結果為“+”)、白細胞計數(WBC，≥15細胞/μL)、維生素C (≥0.6 mmol/L)。

1.5 統計學方法

2 結果

2.1 體質量、體溫

群居飼養的體質量均值明顯高于單籠飼養。體溫的組間差異不顯著(表1)。

表1 雌性食蟹猴體質量、體溫測量值

2.2 血液指標

血常規中，單籠階段的W B C、N E U T、NEUT%極顯著高于群居階段(P＜0.01); 單籠階段的MONO、MONO%極顯著低于群居階段(P＜0.01);單籠階段的LYMPH%顯著低于群居階段(P＜0.05)。血液生化中，單籠階段的TBIL極顯著低于群居階段(P＜0.01); 單籠階段的AST、TG顯著高于群居階段(P＜0.05)(表2)。

2.3 尿常規異常情況

單籠階段的尿蛋白質陽性較多。其余指標無顯著差異(表3)。

表2 雌性食蟹猴血常規、血生化變化值

表3 雌性食蟹猴尿常規測定值

3 討論

實驗表明, 單籠飼養的食蟹猴體質量持續下降,在單籠飼養的第5個月降到最低，均值為3.4 kg; 群居飼養后，體質量立即回升，在群居飼養第1個月均值就上升到4 kg，其后略有升高后企穩。經驗表明，成年食蟹猴的體質量會隨著時間緩慢增加，但在半年內變化幅度不大。本實驗的結果說明飼養環境對其體質量有影響，并且單籠飼養的5個月中體質量變化的幅度比群居的明顯，這說明單籠飼養造成的體質量下降快，幅度大。

關于食蟹猴的血液生理和生化值已有較多報道，但大多沒有特別關注研究對象是單籠還是群居飼養[3-8]。本文探討了單籠飼養與群養對食蟹猴的血液生理和血液生化是否產生不同影響。結果表明，單籠飼養的食蟹猴血常規和血生化值與已報道的文獻值基本一致，群居的則存在某些不同。血常規中的白細胞、中性粒細胞計數，單籠飼養階段的測量值比群居飼養的顯著升高。林健等對雌性SD大鼠進行單籠與群居的實驗，結果顯示單籠組白細胞、中性細胞計數高于群養組，與本實驗中雌性食蟹猴的表現一致，雖物種不同，但結果類似[9]。血生化中的AST、TG，單籠飼養階段的測量值比群居飼養的顯著升高。TBIL單籠飼養階段的測量值比群居飼養的顯著降低。尿常規中的蛋白質單籠飼養階段的測量值比群居飼養的顯著升高，單籠飼養的尿蛋白陽性較多，說明長期單籠飼養可能導致腎臟損傷，而群居后尿蛋白基本正常，說明本實驗中該損傷是可修復的。從以上結果可以看出，食蟹猴在單籠和群居的不同飼養條件下，在體質量和部分血常規、血生化、尿常規的指標上存在差異。這些差異應當引起關注。

本實驗的群居階段通過使食蟹猴飼養房間內增設憩息架、秋千、假山、巖洞等設施使環境更加豐富，使猴群生活的環境有更多的趣味，讓食蟹猴在其中生活展現更多的自然習性，滿足食蟹猴娛樂、躲避驚嚇和運動的需求。這樣既可以確保實驗動物健康，滿足其生活習性，也可以為科學實驗提供更可靠、更穩定、更接近正常反應的實驗數據。但在實際操作中，日常的人工飼養繁殖可以采用群養，而在動物實驗時卻因各種實驗要求難以群養。因此，單籠飼養時，應盡可能采用足夠大的籠具及其相關的福利設施(如，動物玩具、采食器及方式、大自然的音樂、錄像等)提高食蟹猴的福利，減少因低福利對其生長發育、生理生化指標的影響[10]。

[1] 田朝陽, 楊守凱. 非人靈長類動物在醫學科學實驗中的應用[J]. 中國比較醫學雜志, 2009, 19(6):74-77.

[2] 韋祝梅, 黃俊華, 陳健東, 等. 食蟹猴體溫、呼吸率、血壓值和脈搏數的測定[J]. 廣西畜牧獸醫, 2009, 25(5):265-266.

[3] Schuurman HJ,Smith HT.Reference values for clinical chemistry and clinical hematology parameters in cynomolgus monkeys[J].Xenotransplantation, 2005, 12(1):72-75.

[4] 劉仕剛, 謝亮華. 東地區人工飼養食蟹猴血液常規和血清生化值的測定[J]. 實驗動物科學, 2012, 29(2):34-37.

[5] Bonfanti U, Lamparelli D,Colombo P, et al.Hematologyand serum chemistry parametersin juvenile cynomolgus monkeys (Macaca fascicularis) of Mauritius origin: comparison between purpose-bred and captured animals [J]. J Med Primatol, 2009, 38(4):228-235.

[6] Wang H, Niu YY, Si W, et al. Reference data of clinical chemistry,haematology and blood coagulation parameters in juvenile cynomolgus monkeys (Macaca fascicularis)[J]. Vet Med, 2012, 57(5):233-238.

[7] Bourg s-Abella N, Geffré A, Moureaux E, et al. Hematologic reference intervals in Cynomolgus (Macaca fascicularis) monkeys[J]. J Med Primatol, 2014, 43(1):1-10.

[8] 石巧娟, 初明明, 田朝陽, 等. 人工飼養食蟹猴血液常規和生化指標測定[J]. 實驗動物與比較醫學, 2012, 32(4):344-347.

[9] 林健, 黃宗銹, 陳冠敏, 等. 單籠與合籠飼養大鼠血液生理及生化指標差異的比較[J].中國衛生檢驗雜志, 2015, 25 (17):2869-2871.

[10] 高建峰, 滕利, 郭銘, 等. 環境豐容對長期單籠圈養食蟹猴行為的影響[J]. 四川動物, 2016, 2,243-248.

Comparison on Effects of Single Caged and Social Group on Physiological Indexes of Female Macaca Fascicularis

LI Wei1,2, JIN Yi1,2, BAI Xiong1,2, WANG Xiao-dong1,2, XING Zheng-hong1,2, WANG Xiao-quan3
(1. Sino-British SIPPR/BK Laboratory Animal LTD., Co, Shanghai 201203, China; 2. Shanghai Laboratory Animal Research Center,Shanghai 201203, China; 3. Shanghai Benzhuang Bioscience LTD., Co, Shnaghai 201403, China)

ObjectiveTo understand the differences on physiological indexes of single caged and social group female macaca fascicularis.MethodsNine female cynomolgus monkeys at the age of 4-6 years old were singly raised in cage at the first 5 months,and group raised in next 5 months.The body weight, body temperature, blood routine, urine routine, blood biochemistry were measured in single caged rearing and group breeding, repeated measures analysis of variance was used to compare whether there were differences between the two stages.ResultsBody weight in single caged stage was significantly lower than that in group phase (P＜0.05). In blood routine, white blood cell count (WBC), neutrophil count (NEUT), neutrophil percentage (NEUT%) in single caged stage were significantly higher than that in group stage (P＜0.01); monocyte count (MONO), the percentage of mononuclear cells (MONO%) in single caged stage were significantly lower than that in group stage (P＜0.01); lymphocyte percentage(LYMPH%) in single caged stage was significantly lower than that in group stage (P＜0.05). In blood biochemistry, total bilirubin(TBIL) in single caged stage was significantly lower than that in group stage (P＜0.01); aspartic acid amino transferase (AST), triglyceride (TG) in single caged stage were significantly higher than that in group stage (P＜0.05). The positive rate of urine protein in single caged stage is higher than that in the group stage(P＜0.05). Other indexes between the groups had no statistical difference.ConclusionThe macaca fascicularis was more suitable for the breeding of group, if the long-term single caged feeding, it could have a greater impact on body weight, hematology and urine routine of some indicators.

Macaca fascicularis; Female; Physiological index; Hematology; Urine routine

Q95-33

A

1674-5817(2016)05-0369-05

10.3969/j.issn.1674-5817.2016.05.009

2016-02-18

上海市科委實驗動物研究專項(13140901200)

李 偉(1980-),男,助理研究員。

E-mail: tianshixz@126.com

邢正弘, E-mail: zhxing57@163.com