Clobenpropit在胰腺癌動物模型中與吉西他濱抗腫瘤的協同作用

西安市中心醫院普外一科(西安710003)　曾　文　李　琳　鄭　晨

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Clobenpropit在胰腺癌動物模型中與吉西他濱抗腫瘤的協同作用

西安市中心醫院普外一科(西安710003)曾文李琳鄭晨

摘要目的：探討Clobenpropit作為一種特定的H3受體拮抗劑和H4受體激動劑，在胰腺癌中與吉西他濱共同使用的抗腫瘤作用。方法：通過人胰腺癌細胞株(PANC-1)建立裸鼠模型進行研究，通過尾靜脈注射藥物，測量腫瘤生長及抑制情況，并最終處死后行進一步研究以評價兩種藥物對細胞增殖、凋亡的影響。結果：Clobenpropit與吉西他濱聯用可顯著提高吉西他濱對腫瘤的抑制作用，而單用Clobenpropit的抗腫瘤效果不如單用吉西他濱顯著。其聯合使用可能是通過抑制細胞遷移、上調鈣粘附蛋白E等實現的。結論：Clobenpropit可以增強吉西他濱對胰腺癌細胞的抗腫瘤作用。

主題詞胰腺腫瘤 小鼠，裸 @Clobenpropit@吉西他濱

胰腺癌是一種預后較差的消化系統惡性腫瘤，目前治療的進展多體現在對生存期延長。手術切除是胰腺癌唯一可能治愈的治療方法，但臨床中大約只有15%的患者有手術切除的機會[1]。因此化療藥物在胰腺癌中得到了廣泛的應用，吉西他濱作為一種標準的經典化療藥物，主要通過吉西他濱三磷酸鹽進入DNA發揮其細胞毒性作用，導致DNA鏈合成終止。然而實際應用中胰腺癌是高度對化療不敏感的腫瘤之一，包括對吉西他濱的應用[2]。如何找到新的治療靶點和提高胰腺癌化療敏感性的藥物是目前研究的熱點方向。組織胺通過腫瘤細胞膜上的四個受體H1、H2、H3、H4在腫瘤細胞的增殖或凋亡上扮演了重要的角色。先前的研究表明，胰腺癌細胞的生長和增殖中與其H3受體增加，H4受體減少密切相關[3]。Clobenpropit作為一個特定的H3受體拮抗劑和H4受體激動劑，能抑制乳腺癌的擴散[4]。因此，我們的目的是探討在人類胰腺癌細胞中吉西他濱聯合Clobenpropit的抗癌效果。

材料與方法

1材料56只健康成年裸鼠，由西安交通大學醫學院提供。Clobenpropit進口自Sigma-Aldrich公司；吉西他濱進口自 LILLY FRANCE公司。

2動物分組和處理動物隨機分為Clobenpropit組、吉西他濱組、聯合用藥組及生理鹽水空白對照組。體外培養人胰腺癌細胞株進行裸鼠皮下注射，待皮下瘤生長至直徑約2 cm大小后開始給藥，其中Clobenpropit組每隔一天行尾靜脈注射(20 μmol/kg)、吉西他濱組每周兩次行尾靜脈注射(125mg/kg)、聯合用藥組給藥方法為單獨用藥兩組組合。

3抑瘤效果評價每周測量每只裸鼠的體重，并游標卡尺定期測定腫瘤大小。40 d后統一處死裸鼠，取腫瘤標本行病理及免疫組化研究。

4統計學方法使用SPSS 10.0進行統計學分析。t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

結果

1在胰腺癌裸鼠皮下瘤模型建立成功后，進行隨機分組裸鼠的體重測量，提示組間平均體重無顯著差異。所有的裸鼠均存活至實驗結束。裸鼠的平均體重變化、腫瘤體積變化如表1、2所示。結果顯示裸鼠體重變化各組間并無明顯差異，腫瘤體積變化中聯合用藥組較其他組有明顯抑制，空白對照組較其他組有明顯增大。最終處死后腫瘤標本的瘤重結果提示Clobenpropit與吉西他濱聯合應用相比其他治療組明顯的抑制了腫瘤生長(P<0.05)(表3)。

表1　各組裸鼠的平均體重變化結果(g)

表2　各組裸鼠的腫瘤體積變化結果(mm3)

表3　各組裸鼠處死后腫瘤標本的瘤重比較(mg)

2免疫組化提示Clobenpropit單獨及與吉西他濱聯合用藥組中均較對照及吉西他濱單獨用藥組明顯上調了鈣粘附蛋白E(E-cadherin)的表達(P<0.05)(附圖)。

附圖　各組間E-cadherin免疫組化對比

討論

組胺及其受體在腫瘤發生發展的過程中作用是復雜的。本實驗中，我們評估了一個特定的組胺受體及其受體激動劑對人胰腺癌細胞的影響。目前越來越多的證據表明，上皮間質化(EMT)與腫瘤關系密切，EMT在多種實體腫瘤的進展和轉移中起到了重要的作用，包括胰腺癌[5]。E-cadherin主要分布于上皮組織中，是重要的細胞間粘附分子之一。它在惡性細胞轉化中起重要作用，尤其在腫瘤的發生、發展過程中起著重要作用，其缺失與腫瘤的侵襲和轉移相關[6]。此外，E-cadherin表達缺失已與一些癌癥的臨床不良預后相關。在本實驗中，H4受體激動劑也印證了可增加小鼠體內移植瘤的E-cadherin的表達[7]。Clobenpropit發揮了重要的作用，通過上調E-cadherin抑制了EMT過程，從而達到干擾胰腺癌細胞的遷移和增加吉西他濱對細胞化療敏感性的目的。

不同的胰腺癌細胞株對化療的敏感性不同，其中Panc-1是已知的對吉西他濱化療不敏感細胞株[8]。為了闡明Clobenpropit的效果，我們選用了該細胞株。眾所周知，胰腺癌細胞發生與EMT表達增加相關。本實驗表明對異種移植的裸鼠在聯合治療組與對照組相比下腫瘤體積明顯減小，表明胰腺癌細胞的凋亡在吉西他濱和Clobenpropit聯合治療后明顯增加。這些結果說明靶向治療逆轉EMT能增加胰腺癌對化療的敏感性。然而通過H4受體抑制EMT的分子機制仍需要下一步的深入研究。

參考文獻

[1]Lennon A M， Wolfgang C L， Canto M I，etal. The early detection of pancreatic cancer: what will it take to diagnose and treat curable pancreatic neoplasia?[J]. Cancer Research，2014，74(13): 3381-3389.

[2]Ansari D， Urey C， Hilmersson K S，etal. Apicidin sensitizes pancreatic cancer cells to gemcitabine by epigenetically regulating MUC4 expression[J]. Anticancer Research， 2014， 34(10): 5269-5276.

[3]Falus A， Gilicze A. Tumor formation and antitumor immunity; the overlooked significance of histamine[J]. Journal of Leukocyte Biology， 2014， 96(2): 225-231.

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[5]Li Y， Kong D， Ahmad A，etal. MicroRNA Targeted Therapy for Overcoming Drug Resistance， Reversal of EMT and Elimination of Cancer Stem Cells in Prostate and Pancreatic Cancer[M]//MicroRNA Targeted Cancer Therapy. Springer International Publishing， 2014: 199-217.

[6]Van Roy F. Beyond E-cadherin: roles of other cadherin superfamily members in cancer[J]. Nature Reviews Cancer， 2014， 14(2): 121-134.

[7]Martinel L D J， Rivera E S， Medina V A. Histamine H4 receptor：insights into a potential therapeutic target in breast cancer[J]. Frontiers in Bioscience (Scholar edition)， 2014， 7：1-9.

[8]Zhang H， Chen L， Bu H Q，etal. Effects of emodin on the demethylation of tumor-suppressor genes in pancreatic cancer PANC-1 cells[J]. Oncology Reports， 2015， 33(6): 3015-3023.

(收稿：2015-07-09)

【中圖分類號】R735.9

【文獻標識碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.02.009