雞傳染性鼻炎鑒別診斷技術(shù)研究進(jìn)展

張婷婷/哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司

?

雞傳染性鼻炎鑒別診斷技術(shù)研究進(jìn)展

張婷婷/哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司

副雞禽桿菌為禽桿菌屬，革蘭氏陰性（G-）小球桿菌，具有多形性，需養(yǎng)或厭氧條件下均能生長。根據(jù)學(xué)者Page的分型方案，分為A型（標(biāo)準(zhǔn)菌株為0083菌株）、B型（標(biāo)準(zhǔn)菌株為0222）、C型（標(biāo)準(zhǔn)菌株為Modesto菌株）三個(gè)血清型。本文旨在通過討論Hpg的臨床癥狀及其鑒別診斷方法，為現(xiàn)場及實(shí)驗(yàn)室Hpg鑒定提供理論依據(jù)。

一、流行病學(xué)

Hpg可引起雞傳染性鼻炎（Infectious Coryza， IC），臨床癥狀明顯，以流鼻汁、眼結(jié)膜炎和面部腫脹為主要特征，本病呈世界性流行。雞是Hpg的主要宿主，各年雞只齡均易感，4周齡以上易感性增強(qiáng)；病程一般為4～18 d，發(fā)病率在20%～50%，死亡率約為5%～20%。

產(chǎn)蛋雞群在發(fā)病后約5～6 d，產(chǎn)蛋高峰期的雞群產(chǎn)蛋量平均下降25%左右，發(fā)病初期雞只很少死亡，但后期狀態(tài)轉(zhuǎn)好時(shí)雞群死淘率增加。

Hpg的三種血清型（A型、B型和C型），在我國均有分離報(bào)道，以A型居多，A型發(fā)病率約為10.3%～25%；B型和C型發(fā)病率較低。

傳播方式是呼吸道和消化道傳播，其中呼吸道傳播引起的危害較為嚴(yán)重，特別是對當(dāng)前規(guī)模化或集約化養(yǎng)殖模式，同時(shí)該病的暴發(fā)具有明顯的氣候性，多在高溫高濕的季節(jié)。

二、臨床癥狀

病雞臉腫脹或顯示水腫，眼結(jié)膜炎、眼瞼腫脹、出現(xiàn)眼睛流淚，流鼻液，先為漿液性，后為膿性，其中混有泡沫，呼吸困難、出現(xiàn)呼嚕聲和奇怪的咳嗽聲，同時(shí)出現(xiàn)拉白、黃、綠色的稀糞。仔雞生長不良；成年母雞產(chǎn)蛋減少，產(chǎn)蛋率及采食量下降，軟殼蛋增加；公雞肉髯常見腫大。

三、細(xì)菌的分離和初步鑒定

對疑似發(fā)病雞進(jìn)行無菌操作，取框下竇內(nèi)滲出物（鼻竇深部、氣管或氣囊粘液均可），常規(guī)鑒定方法有以下四種。

（一）微衛(wèi)星現(xiàn)象

劃線接種血瓊脂平板，葡萄球菌交叉劃線，置5% CO237℃培養(yǎng)24 h，觀察培養(yǎng)后的平板是否存在衛(wèi)星現(xiàn)象，進(jìn)而判斷是否為目標(biāo)菌。

（二）V因子

研究表明Hpg的生長需要V因子，因此可將疑似菌同時(shí)接種含有一定濃度NAD的雞血清雞肉湯平板和普通培養(yǎng)基，若為目標(biāo)菌，則僅在含有NAD的平板上生長，在普通培養(yǎng)基上不生長。

（三）理化性質(zhì)

對分離菌的純培養(yǎng)物進(jìn)行生化鑒定，如果生化鑒定結(jié)果與Hpg的生化特性（能發(fā)酵麥芽糖、蔗糖、葡萄糖產(chǎn)酸，但不發(fā)酵乳糖；吲哚試驗(yàn)陽性，過氧化氫酶試驗(yàn)陰性）相吻合，便可作出診斷。

（四）動物回歸試驗(yàn)

將純培養(yǎng)物眶下竇內(nèi)接種6周齡左右健康雞，若在7 d內(nèi)出現(xiàn)典型鼻炎癥狀，即可初步鑒定為Hpg。

四、實(shí)驗(yàn)室診斷方法

（一）血清學(xué)方法

血清學(xué)診斷方法主要包括：瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（AGP）、血清平板凝集試驗(yàn)（SPA）、血凝抑制試驗(yàn)（HI）、熒光抗體技術(shù)、ELISA和Dot-ELISA等方法。其中常用的方法為AGP和SPA，既可用菌株作抗原去檢測血清型抗體，也可以用血清對分離菌株進(jìn)行分型；HI用于檢測疫苗免疫后抗體水平，根據(jù)抗體水平評價(jià)疫苗免疫效果，目前主要使用的特異性抗原只有A型和C型；ELISA方法，其敏感性和特異性都優(yōu)于以上幾種方法。2009年，豈曉鑫建立檢測A型副雞禽桿菌的夾心ELISA方法，結(jié)果表明該方法具有較好的特異性和敏感性，操作簡單快捷；2001年張培君等應(yīng)用建立的檢測副雞禽桿菌阻斷ELISA方法，檢驗(yàn)2 191份血清，A型抗體陽性檢出率為27.4%，C型抗體陽性檢出率為11.5%。

（二）分子生物學(xué)方法

分子生物學(xué)診斷方法應(yīng)用最為廣泛的為PCR診斷。該方法對檢測采集的臨床病料要求相對要低一些。試驗(yàn)結(jié)果表明，PCR對可疑病料的檢出率是細(xì)菌分離鑒定的2～3倍。應(yīng)用PCR方法診斷雞傳染性鼻炎，被國際公認(rèn)為金標(biāo)準(zhǔn)。但對于血清分型還需要PAGE法進(jìn)行。2008年鄧顯文等根據(jù)副雞禽桿菌的16S rDNA基因序列設(shè)計(jì)一對特異性引物建立了PCR方法，目的片段為282 bp，該方法可以檢測到10 pg的副雞禽桿菌DNA模板。2001年宋敏訓(xùn)等根據(jù)aroA基因設(shè)計(jì)了1對引物，建立了PCR方法，該P(yáng)CR能檢測出10個(gè)菌細(xì)胞，比常規(guī)PCR方法敏感性高。

五、臨床診斷方法

（一）與傳染性支氣管炎鑒別診斷

傳染性支氣管炎病雛雞發(fā)病重，呼吸癥狀明顯，流鼻液，無頭部腫脹。呈腎型傳染性支氣管炎，癥狀為腎腫大蒼白，腎小管、輸尿管有多量尿酸鹽沉積，藥物治療無明顯效果，病死率高，患病成年雞呼吸癥狀不明顯，產(chǎn)蛋量急劇下降，軟殼蛋、沙皮蛋較多，蛋清稀薄如水，濃蛋白層消失。蛋白稀薄如水，畸形蛋量增加。

（二）與傳染性喉氣管炎鑒別診斷

傳染性喉氣管炎多見于成年雞，癥狀為出血性炎癥，呼吸困難，咯血（血性粘液），氣管黏膜出血性壞死，久病雞喉氣管黏膜帶一層干酪樣假膜，無頭部腫脹，磺胺類藥物和抗生素治療無效。

（三）與支原體病鑒別診斷

支原體發(fā)病慢，呼吸道癥狀明顯且時(shí)間較長，一般數(shù)周或數(shù)月，腫臉的雞在雞群中傳播較慢，并且精神和采食變化不大，氣囊發(fā)炎、混濁、增厚，囊腔內(nèi)附有豆腐渣樣分泌物，而傳染性鼻炎氣囊無此病變。

（四）與維生素A缺乏癥鑒別診斷

維生素A缺乏癥病雞趾爪卷縮，眼睛流出奶樣分泌物，喙和小腿黃色變淡。剖檢癥狀為可見鼻腔、口腔、食道以致嗉囊的黏膜表面有大量白色小結(jié)節(jié)，嚴(yán)重時(shí)結(jié)節(jié)融合成一層灰白色的偽膜覆蓋于黏膜表面。

六、治療

1.添加敏感藥物。可按每100 kg飲水中添加復(fù)方支原凈（主要成分是泰妙菌素、替米考星）10 g（首次倍量），連續(xù)飲用4～5 d；飼料中添加0.02%的電解多維，連續(xù)使用10 d。

2.開展衛(wèi)生消毒。應(yīng)及時(shí)清除雞糞、墊料，每天用聚維酮碘、百毒殺按1∶300的比例對雞舍地面、墻壁、道路和活動場所進(jìn)行消毒一次，保持雞舍內(nèi)外通風(fēng)、干燥、衛(wèi)生。

3.加強(qiáng)飼養(yǎng)管理。改喂優(yōu)質(zhì)的雞飼料，調(diào)整飼養(yǎng)密度最佳為9～12只，改善通風(fēng)條件，做好防鼠工作，保持環(huán)境安靜，嚴(yán)禁非工作人員出入。

七、免疫工作

雞傳染性鼻炎最佳首免時(shí)間為5～42日齡，二免間隔70 d可進(jìn)行。如飼養(yǎng)周期在60周以上，可以考慮在產(chǎn)蛋高峰期后（50～55周齡）進(jìn)行第三次免疫，如果處在強(qiáng)制換羽的雞群時(shí)，應(yīng)在強(qiáng)制換羽前2周完成第三次免疫。免疫劑量：首免0.5 ml/只，二免0.5～1.0 ml/只（白羽、快大型黃羽種雞以及鼻炎發(fā)病嚴(yán)重場二免建議1.0 ml/只）。免疫過程中，操作人員應(yīng)不斷輕微搖晃疫苗瓶，以保證每只雞獲得混合均勻的抗原含量。

八、小結(jié)

目前認(rèn)為，Hpg感染雞群發(fā)病的因素與3種毒力抗原相關(guān)。第一種是能引起動物發(fā)展中毒癥狀的脂多糖。第二種是引起家禽心包積液的多糖。第三種是與IC主要癥狀鼻炎相關(guān)的莢膜。研究發(fā)現(xiàn)分離出的脂多糖與IC引起的蛋雞產(chǎn)蛋率下降可能有關(guān)，這也是引起家禽中毒癥狀的表現(xiàn)；分離出的多糖物質(zhì)據(jù)推測與IC引起的病理變化心包積液有關(guān)；有文獻(xiàn)報(bào)道透明質(zhì)（具有莢膜抗原）與IC感染引起的鼻腔、鼻竇炎癥有關(guān)聯(lián)。這就意味著它的病原學(xué)意義有相當(dāng)高的研究價(jià)值。

參考文獻(xiàn)（略）