深圳市南山區和大鵬區潰瘍性結腸炎患者血漿同型半胱氨酸、葉酸及腫瘤壞死因子-α的水平及其臨床意義

陳少文，趙燕穎，黃麗萍，吉明柱，劉艷紅

1.深圳市大鵬新區南澳人民醫院消化科，廣東 深圳 518121；2.吉林大學第四醫院消化科；3.深圳市大鵬新區大鵬人民醫院內科；4.深圳市蛇口人民醫院消化科

深圳市南山區和大鵬區潰瘍性結腸炎患者血漿同型半胱氨酸、葉酸及腫瘤壞死因子-α的水平及其臨床意義

陳少文1，趙燕穎2，黃麗萍3，吉明柱4，劉艷紅4

1.深圳市大鵬新區南澳人民醫院消化科，廣東 深圳 518121；2.吉林大學第四醫院消化科；3.深圳市大鵬新區大鵬人民醫院內科；4.深圳市蛇口人民醫院消化科

目的 探討深圳市潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis,UC)患者中血漿同型半胱氨酸(Hcy)、葉酸(FA)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平的改變及其臨床意義。方法 采用直接化學發光法檢測深圳市南山區和大鵬區三家醫院門診和住院56例UC患者和60名健康對照人群血漿Hcy水平,并應用ELISA方法檢測血漿FA和TNF-α水平。結果 UC患者中血漿Hcy水平明顯高于對照組(P<0.01)；血漿Hcy水平與UC病情分級和病變范圍均無關(P>0.05)。中度和重度UC患者中血漿FA水平明顯低于對照組(P<0.01);血漿FA水平與UC病情分級無關(P>0.05)。UC患者中血漿TNF-α水平明顯高于對照組(P<0.05)，TNF-α水平和UC病情分級呈正相關。結論 UC患者血漿Hcy和TNF-α水平明顯高于正常人，FA水平則低于正常人，這些可能共同參與了UC的發生和發展。

潰瘍性結腸炎；同型半胱氨酸；葉酸；腫瘤壞死因子-α

潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis，UC)是一種病因不明的慢性腸道性疾病。病變多累及直腸和遠端結腸，并可向近端擴展以至發展到整個結腸。大量研究證實許多細胞因子與細胞因子網絡直接參與了UC的形成和發展，如IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α。同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)是一種含硫基的氨基酸,是能量代謝和許多去甲基化反應的重要中間產物，是一種生物活性極高的有害分子[1]，其含量的增加主要是由于代謝酶的異常或營養缺乏如葉酸、維生素B12、B6等。目前已證實高同型半胱氨酸血癥與克羅恩病相關，但Hcy水平與UC相關性還需要進一步的研究和證實。本文通過檢測深圳市南山區和大鵬區3家醫院UC患者和健康人的血清中Hcy、FA及TNF-α濃度，探討Hcy、FA和TNF-α與UC的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇深圳市大鵬區2家醫院和深圳市南山區蛇口人民醫院2009年1月-2013年12月確診的UC患者56例，男29例，年齡25～85歲，中位年齡51歲；女27例，年齡26～71歲，中位年齡50歲。診斷標準參考中華醫學會消化病學分會《對炎癥性腸病診斷治療規范的建議》[2]，并根據該建議將56例UC患者分為輕度UC組24例，中度UC組17例，重度UC組15例。此次入院有50例患者行電子結腸鏡檢查后明確病變部位，病變累及直腸、乙狀結腸者22例,左半結腸者15例，全結腸直腸者13例。對照組為同期在我院體檢中心收集的60名年齡、性別相匹配的健康體檢者(均排除高血壓、冠心病、糖尿病、自身免疫疾病及動靜脈血栓形成等疾病史)。

1.2 方法清晨空腹取靜脈血3 ml于分離采血管內。以離心半徑17.45 cm，3 500 r/min離心10 min分離血清，置于-80 ℃冰箱保存。采用直接化學發光法檢測56例UC患者和60名正常對照者血清Hcy水平，檢測儀器為西門子Centaur CP及其配套試劑。同時采用ELISA法檢測上述人群的FA和TNF-α水平。試劑盒購自美國R&D公司，嚴格按照說明書操作。

1.3 統計學處理采用SPSS 12.0軟件進行統計分析。組間均數的比較采用t檢驗，計數資料比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman秩相關分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組血漿Hcy、FA和TNF-α的表達情況UC組Hcy水平顯著高于健康對照組，差異有統計學意義(P<0.01)。輕度UC患者Hcy水平低于中度UC患者，中度UC患者Hcy水平低于重度UC患者，但兩組比較差異均無統計學意義(P=0.103，P=0.115)。一般正常空腹血漿總Hcy水平為5～15 μmol/L，故以血漿Hcy水平15.00 μmol/L為界值分高低2組。UC患者中Hcy≥15 μmol/L者23例，(41.07%)，健康對照組中Hcy≥15 μmol/L者6例(10.00%)，健康對照組中高Hcy的比例明顯低于UC組，差異有統計學意義(χ2=5.561，P=0.008)。

重度和中度UC患者的FA水平明顯低于健康對照組，差異有統計學意義(P<0.01)。輕度UC患者血漿FA水平雖然低于健康對照組，但差異無統計學意義(P>0.05) 。輕度UC患者的FA水平高于中度UC患者，中度UC患者FA水平高于重度UC患者，但差異無統計學意義(P>0.05) 。UC患者的TNF-α水平明顯高于健康對照組，差異有統計學意義(P<0.01)。重度UC患者TNF-α水平高于中度UC患者，中度UC患者TNF-α水平高于輕度UC患者，差異均有統計學意義(P<0.05，見表1)。

分組例數Hcy(μmol/L)FA(nmol/L)TNF?α(ng/L)UC組 輕度2415．99±3．02?7．55±1．3732．5±3．7? 中度1718．01±4．21?5．11±1．11?59．1±9．9?# 重度1519．53±5．16?4．12±0．95?86．9±11．9?#對照組608．11±2．079．98±1．3815．9±9．1

注：與對照組比較，*P<0.05；與輕度UC患者比較，#P<0.05。

2.2 Hcy、FA、TNF-α和UC的相關性UC按病變范圍分為全結腸型、直腸、乙狀結腸型、左半結腸型、直腸型和區域性結腸型UC。各組UC患者血漿Hcy水平差異無統計學意義(P=0.385)，經相關性分析顯示Hcy水平與UC病變范圍無相關性(r=-0.142，P=0.278)。血漿FA、TNF-α水平與UC病變范圍無相關性(P=0.416)。

UC患者血漿Hcy、FA和TNF-α與疾病相關性的分析顯示，Hcy水平與UC病情分級無相關性(r=-0.239，P=0.09)。FA水平與病情分級無相關性(r=0.195，P=0.186)。TNF-α水平與病情分級呈正相關 (r=0.362，P=0.017 )。

3 討論

目前認為UC與遺傳、環境、免疫因素有關，腸道免疫系統調節異常可能發揮重要作用。腸黏膜可直接產生免疫效應分子對抗腸腔內微生物，或通過信號傳導啟動黏膜獲得性免疫，介導直接的黏膜保護反應，這些分子的異常可能會引起黏膜保護機制的破壞[3-4]。有報道IL-1、TNF-α是介導UC炎癥發生和擴大的兩個主要的細胞因子[5]。TNF-α為重要的促炎性細胞因子，主要產生細胞為單核巨噬細胞，為介導UC的主要細胞因子。在UC患者體內存在多種異常抗體及免疫復合物，其通過不同途徑刺激單核-巨噬細胞產生并釋放TNF-α[6]。過多表達的TNF-α可以破壞腸黏膜及血管系統，導致炎性病變及潰瘍的形成。且有研究[7]顯示UC患者腸黏膜、糞便、血液中TNF-α水平增高，且與疾病活動度相關。按UC病情輕重可分為3級：輕度：此型最常見，通常僅累及結腸的遠端部分，病情輕，腹瀉每日少于4次，腹痛、便血輕或少見，缺乏全身癥狀和體征；中度：介于輕度與重度之間，起病突然，腹瀉每日4～5次，為稀便和血便，腹痛較重，有低熱，體質量減輕，食欲減退，可有腸道外表現；重度：起病急驟，有顯著的腹瀉、便血，有持續的嚴重腹痛，可出現低血壓。我們發現UC患者TNF-α水平顯著高于健康對照組，重度UC患者血清TNF-α水平顯著高于中度和輕度UC患者，且TNF-α水平與UC病情分級呈正相關。進一步證明TNF-α參與了UC的發病機制，且與UC的發生、發展密切相關。

Hcy是甲硫氨酸(Met)去甲基化過程中的產物，UC患者高水平的Hcy對結腸血管內皮和上皮細胞具有潛在的損傷作用，可能加重UC的炎性反應過程。Hcy可能通過多種機制參與UC的病理生理過程[8]，Hcy可按不同方式轉運至細胞內并通過巰基自氧化產生氧自由基，可降低細胞內抗氧化酶表達，降低機體清除體內氧自由基的能力，通過氧化應激反應造成內皮細胞的損傷[9]。Hcy還可通過誘導產生核因子NF-κB、IL-6、IL-8等炎性因子促進炎性反應[10]。另外，高水平的Hcy還可以促進血小板聚集，活化的血小板釋放多種炎性介質，參與腸黏膜的炎癥反應，導致UC發生[11]。已有研究[12]報道Hcy的升高可能與遺傳基因、葉酸和VB12等表達水平有關。國外研究發現，IBD患者血漿和腸黏膜中Hcy濃度明顯高于對照組，UC患者血漿Hcy水平更高達30%[13]。

本研究也顯示UC患者血漿Hcy水平明顯高于對照組，但血漿Hcy水平與UC患者病情分級及病變范圍無關，這與既往的某些報道[14]不一致，可能和樣本量不大有關。另外，有研究顯示有UC家族史的患者的Hcy水平也較高[15]，這個結果有待于我們進一步證實。血漿TNF-α水平與UC密切相關，且與病情程度呈正相關性。但FA與UC無明顯相關性。

總之，血清Hcy和TNF-α水平升高在UC患者中具有一定普遍性，為臨床治療提供新的思路。但是在本研究中沒有涉及UC患者Hcy代謝酶基因多態性的研究，我們還需要更加廣泛深入的探討UC和Hcy及其影響因素之間的關系，為UC的治療開辟新的途徑。

[1]Adedokun OJ, Sandborn WJ, Feagan BG, et al.Association between serum concentration of infliximab and efficacy in adult patients with ulcerative colitis [J]. Gastroenterology, 2014, 147(6): 1296-1307.

[2]The Chinese Medical Association Digestion Epidemiology Branch. Recommendation of the diagnosis and treatment of inflammatory bowel disease [J]. Chin J Dig, 2001, 6(1): 53-59. 中華醫學會消化病學分會. 對炎癥性腸病診斷治療規范的建議[J].中華消化雜志, 2001, 6(1): 53-59.

[3]Li KY, Zhang YL, Cui X. The relationship between mucosal healing and outcomes in ulcerative colitis after treatment with corticosteroids [J]. Chin J Gastroenterol Hepatol, 2013, 22(3): 246-249. 李匡一,張亞歷,崔西.激素治療潰瘍性結腸炎黏膜愈合程度與預后的關系 [J].胃腸病學和肝病學雜志, 2013, 22(3): 246-249.

[4]Samaan MA, Bagi P, Vande Casteele N, et al. An update on anti-TNF agents in ulcerative colitis [J].Gastroenterol Clin North Am, 2014, 43(3):479-494.

[5]Sacco R, Tanaka T, Yamamoto T, et al. Adacolumn leucocytapheresis for ulcerative colitis: clinical and endoscopic features of responders and unresponders [J]. Expert Rev Gastroenterol Hepatol, 2015, 9(3):327-333.

[6]Zampeli E, Gizis M, Siakavellas S, et al.Predictors of response to anti-tumor necrosis factor therapy in ulcerative colitis [J] . World J Gastrointest Pathophysiol, 2014, 5(3):293-303.

[7]Xiao XL. Study on correlation of characteristics of intestinal flora with serum levels of TNF-α and endotoxin in patients with ulcerative colitis [J]. Journal of Clinical and Experimental Medicine, 2012, 11(17): 1364-1365, 1368. 肖修玲. 潰瘍性結腸炎患者腸道菌群與血TNF-α、內毒素水平的關系[J]. 臨床和實驗醫學雜志, 2012, 11(17): 1364-1365, 1368.

[8]Owczarek D, Cibor D, Sa apa K, et al.Homocysteine in patients with inflammatory bowel diseases [J]. Przegl Lek, 2014, 71(4):189-192.

[9]Gürsoy G, Cimbek A, Acar Y, et al. Combined portal, splenic and mesenteric venous thrombosis in inactive ulcerative colitis with heterozygous mutation in MTHFR gene: arare case of thrombophilia [J].Res Med Sci, 2011, 16(11):1500-1506.

[10]Chen M, Mei Q, Xu J, et al.Detection of melatonin and homocysteine simultaneously in ulcerative colitis [J]. Clin Chim Acta, 2012, 413(1-2):30-33.

[11]Chen ML, Mei Q, Xu JM, et al.Significance of plasmic homocysteine, folate and Vitamin B(12) in ulcerative colitis [J]. Zhonghua Wei Chang Wai Ke Za Zhi, 2011, 14(3):185-187.

[12]Tang Q, Lu GP, Wu CF, et al. The relationships between hyperhomocysteinemia and folic acid, vitamin B12 and vitamin B6 [J]. Chin J Cardiol, 2004, 32(9): 812-815. 湯群, 陸國平, 吳春芳, 等. 同型半胱氨酸與葉酸、維生素B12及維生素B6的關系[J]. 中華心血管病雜志, 2004, 32(9): 812-815.

[13]Grimstad T, Berge RK, Bohov P, et al. Salmon diet in patients with active ulcerative colitis reduced the simple clinical colitis activity index and increased the anti-inflammatory fatty acid index--a pilot study [J]. Scand J Clin Lab Invest, 2011, 71(1):68-73.

[14]Zhou XJ, Guan XJ. The relationships between hyperhomocysteinemia and folic acid, vitamin B12 in patients with ulcerative colitis [J]. Beijing Medical Journal, 2015, 37(2): 175-176. 周旭軍, 關秀軍. 潰瘍性結腸炎患者血清同型半胱氨酸與葉酸和維生素B12的相關性研究[J]. 北京醫學, 2015, 37(2): 175-176.

[15]Ning Z. Analysis of serum homocysteine level in patients with ulcerative colitis [J]. Int J Lab Med, 2013, 34(6): 727-728. 寧楨. 潰瘍性結腸炎患者血清同型半胱氨酸水平的分析[J]. 國際檢驗醫學雜志, 2013, 34(6): 727-728.

(責任編輯：陳香宇)

Levels of plasma homocysteine, folic acid and tumor necrosis factor-alpha and their clinical significance in ulcerative colitis in Nanshan district and Dapeng district of Shenzhen

CHEN Shaowen1,ZHAO Yanying2, HUANG Liping3, JI Mingzhu4, LIU Yanhong4

1. Department of Gastroenterology, the Nan’ao People’s Hospital of Dapeng District in Shenzhen, Shenzhen 518121; 2. Department of Gastroenterology, the Fourth Hospital of Jilin University; 3. Department of Internal Medicine, the Dapeng People’s Hospital of Dapeng District in Shenzhen; 4. Department of Gastroenterology, the Shekou People’s Hospital of Shenzhen, China

Objective To investigate the levels of plasma homocysteine (Hcy), folic acid (FA) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) and their clinical significance in ulcerative colitis (UC) in Shenzhen city. Methods The plasma Hcy levels of 56 cases of UC patients and 60 healthy controls who were collected from three hospitals of Shenzhen city were detected by direct chemiluminescence, plasma FA and TNF-α levels were detected by ELISA assay.Results The level of plasma Hcy in patients with UC was higher than that of control group (P<0.01).The level of plasma Hcy was not related to lesion range and disease classification of UC (P>0.05). The level of plasma FA in moderate and severe UC was significantly lower than that in the control group (P<0.01). There was no association between the level of plasma and disease classification of UC (P>0.05). The level of plasma TNF-α in UC group was significantly higher than that in the control group (P<0.05), TNF-α level was positively related to disease classification of UC.Conclusion The levels of serum Hcy and TNF-α are significantly higher in UC patients than those in the normal controls. The level of FA is lower in UC patients than taht in the normal controls. These may be involved in the occurrence and development of UC.

Ulcerative colitis; Homocysteine; Folic acid; Tumor necrosis factor-α

10.3969/j.issn.1006-5709.2016.01.014

陳少文，主治醫師，研究方向：胃腸道疾病的臨床診治和基礎。E-mail：chenshaowen76@126.com

R574.62

A

1006-5709(2016)01-0056-03

2015-02-17