酸柏梔油軟膠囊抗氧化作用初步研究*

延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院(延安716000)

張正祥　付佳廷　景東華△　吉金山　王　璐　米志寬　李寶莉　張　強(qiáng)　李　靜　宋偉欣　苗乃周

?

酸柏梔油軟膠囊抗氧化作用初步研究*

延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院(延安716000)

張正祥付佳廷景東華△吉金山王璐米志寬李寶莉張強(qiáng)李靜宋偉欣苗乃周

摘要目的：探討酸柏梔油軟膠囊抗氧化作用。方法：將60只SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、高、中、低酸柏梔軟膠囊組和辛伐他汀組。對(duì)照組正常飲食，其他組高脂飲食，4周后，眼眶采血全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清中甘油三酯(TG)、總膽固醇(CH)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)水平。高脂血癥大鼠模型建立后，對(duì)照組不做處理，其他組均在每天上午9:00按1ml/100g劑量灌胃：模型對(duì)照組給予生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組給予辛伐他汀(0.3 mg/100g)，高劑量組給予酸柏梔油軟膠囊(0.45g/100g)，中劑量組給予酸柏梔油軟膠囊(0.18g/100g)，低劑量組給予酸柏梔油軟膠囊(0.072g/100g)。5周后，水合氯醛腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈采血測(cè)定血漿中TG、CH、HDL、LDL及總超氧化物歧化酶(T-SOD)水平。結(jié)果：高脂飲食4周后，高脂飲食大鼠血漿CH、HDL、LDL水平高于對(duì)照組，TG水平低于對(duì)照組(P<0.05)。干預(yù)5周后，酸柏梔油軟膠囊均可降低高脂血癥大鼠血清TC、升高血清T-SOD(P<0.01)；高劑量組降低LDL-C和TG水平(P<0.05)。結(jié)論：酸柏梔油軟膠囊具有降低高脂血癥大鼠血脂和升高高脂血癥大鼠血清總超氧化物歧化酶作用。

主題詞@酸柏梔油軟膠囊高脂血癥模型，動(dòng)物抗氧化劑大鼠

酸柏梔油軟膠囊(Soft capsule of compound oil of jujube , arboruitae and gardenia , SCCOJAG)是將酸棗仁、柏子仁、梔子的有效提取成分-酸棗仁油、柏子仁油、梔子油按照3∶3∶1配伍組成的復(fù)方制劑，其主要成分為多不飽和脂肪酸和維生素E[1]。現(xiàn)代研究表明， SCCOJAG具有降低血纖維蛋白原濃度、降低血液粘度、促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶、耐缺氧和緩解體力疲勞的功能[2-4]。本實(shí)驗(yàn)研究SCCOJAG降血脂和抗氧化作用。

資料與方法

1材料

1.1藥品：SCCOJAG由西安東盛醫(yī)藥研究所生產(chǎn)，酸棗仁油、柏子仁油、梔子油配比為3∶ 3∶ 1，0. 5 g /粒，批號(hào)：081120。辛伐他汀片山東魯抗醫(yī)藥集團(tuán)賽特有限責(zé)任公司生產(chǎn)，100mg/片，批號(hào)：131104。

1.2試劑：豬膽固醇、豬膽鹽、丙基硫氧嘧啶購(gòu)自北京博奧拓達(dá)公司，蛋黃、普通飼料購(gòu)自第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，豬油自制。

1.3動(dòng)物：5周齡SD大鼠60只(180±20g，雌雄各半)由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.4 儀器：全自動(dòng)生化分析儀，規(guī)格型號(hào)：Cobas c 7 01 模塊；生產(chǎn)地址：德國(guó)羅氏診斷有限公司；產(chǎn)品序列號(hào)：1145-05。

2方法

2.1高脂飼料配置：5%膽固醇、5%蛋黃、0. 5%膽酸鈉、0.2%丙基硫氧嘧啶、10%豬油、80%普通飼料混勻，壓制成條，50℃烘干。

2.2建立SD大鼠高脂血癥模型：60只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按照體重，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、高劑量酸柏梔油軟膠囊組、中劑量酸柏梔油軟膠囊組和低劑量酸柏梔油軟膠囊組，空白對(duì)照組給予正常飼料，其余各組給予高脂飼料，所有大鼠均自由飲水。4周后，采血前12h禁食自由飲水。采血時(shí)腹腔注射5%水合氯醛(0.6ml/100g劑量)麻醉，眼眶采血3ml，全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定TG、CH、HDL、LDL、T-SOD水平。

2.3干預(yù)實(shí)驗(yàn)：造模成功后，空白對(duì)照組繼續(xù)正常飲食，模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、高劑量酸柏梔油軟膠囊組、中級(jí)劑量酸柏梔油軟膠囊組和低劑量酸柏梔油軟膠囊組繼續(xù)高脂飲食。空白對(duì)照組不做處理，其它各組均在上午9:00按1ml/100g 劑量灌胃，模型對(duì)照組給予生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組給予辛伐他汀(0.3mg/100g)，高劑量組(酸柏梔油軟膠囊0.45g/100g)，中劑量組(酸柏梔油軟膠囊0.18g/100g)，低劑量組(酸柏梔油軟膠囊0.072g/100g)。5周后，腹腔注射5%水合氯醛(0.6ml/100g)麻醉，麻醉后仰臥固定在手術(shù)臺(tái)上，腹部備皮，常規(guī)消毒，打開(kāi)腹腔，暴露腹主動(dòng)脈，在腎臟下方約1cm處向下分離腹主動(dòng)脈約1.5cm，近心端動(dòng)脈夾阻斷血流，遠(yuǎn)心端結(jié)扎，提起結(jié)扎線，在結(jié)扎線近心端剪一小口，沿腹主動(dòng)脈向向心端插入動(dòng)脈插管固定，松開(kāi)動(dòng)脈夾采血3ml，全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)TG、CH、HDL、LDL和T-SOD水平。

結(jié)果

1高脂飲食4周后，各組大鼠血清血脂及過(guò)氧化物歧化酶水平高脂飲食各組大鼠血漿TC、LDL-C、HDL-C水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，而血漿TG和T-SOD水平均低于對(duì)照組，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)表1。

表1　高脂飲食4周后各組大鼠血清血脂及超氧化物歧化酶水平

注：與正常對(duì)照組相比,*P<0.01；與模型對(duì)照組相比,△P<0.01

2酸柏梔油軟膠囊對(duì)高脂血癥大鼠血脂和血清總超氧化物歧化酶的影響造模成功后，分別給予辛伐他汀、高、中、低酸柏梔油軟膠囊干預(yù)5周后，腹腔麻醉(麻醉方法同上)，腹主動(dòng)脈采血測(cè)定各組大鼠血清中血脂及總超氧化物歧化酶水平，可見(jiàn)酸柏梔油軟膠囊降低高脂血癥大鼠血清TC、LDL-C、HDL-C)和TG水平，升高血清T-SOD，其中高劑量酸柏梔油軟膠囊組降低血清TC效果好于辛伐他汀組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；高劑量酸柏梔油軟膠囊組降低LDL-C和血清TG水平與辛伐他汀組相當(dāng)，中劑量和低劑量酸柏梔油軟膠囊組降低LDL-C和血清TG水平則不如辛伐他汀，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；高劑量酸柏梔油軟膠囊組升高血清T-SOD水平高于辛伐他汀組，中、低劑量酸柏梔油軟膠囊組則低于辛伐他汀組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2　酸柏梔油軟膠囊對(duì)高脂血癥大鼠血脂和血清總超氧化物歧化酶的影響

注：與正常對(duì)照組相比,*P<0.01；與模型對(duì)照組相比,△P<0.05，▲P<0.01；與陽(yáng)性對(duì)照組相比,#P<0.05，□P<0.01

討論

高脂血癥是動(dòng)脈粥樣硬化(Atheroslerosis, AS)發(fā)生的主要危險(xiǎn)因素之一，也是誘發(fā)心腦血管疾病的重要因素，血清中TC、TG和LDL-C含量升高， HDL-C含量降低，可導(dǎo)致動(dòng)脈內(nèi)膜損傷，血管通透性增高，加速脂質(zhì)在血管內(nèi)皮下沉積，誘發(fā)粥樣斑塊形成；而血脂升高時(shí)，氧自由基大量產(chǎn)生，脂質(zhì)過(guò)氧化作用增強(qiáng)，產(chǎn)生大量的丙二醛(Malondialdehyde, MDA)，使SOD 活性降低，促進(jìn)AS的發(fā)生和發(fā)展[5]。

本實(shí)驗(yàn)采用高脂飲食，建立高脂血癥大鼠模型，經(jīng)過(guò)酸柏梔油軟膠囊干預(yù)，觀察酸柏梔油軟膠囊對(duì)高脂血癥大鼠血脂和血清SOD水平影響。經(jīng)過(guò)4周的高脂飼料喂養(yǎng)，SD大鼠血清TC、LDL和HDL水平高于對(duì)照組，而血清TG和SOD水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與謝文鴻[6]、Yanagita[7]研究結(jié)果一致。王玉明等[8]研究發(fā)現(xiàn)，添加膽固醇飼料喂養(yǎng)大鼠，其肝臟膽固醇酯化酶(ACAT)和膽固醇異化的限速酶-7α-羥化酶基因表達(dá)增高，而膽固醇合成的關(guān)鍵酶-羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(HMG-CoA reductase)活性明顯下降，降低了高膽固醇飲食大鼠肝臟膽固醇水平，并增加(Cholesterol ester，CE)的合成，優(yōu)先向分泌的極低密度脂蛋白(Very low density lipoprotein，VLDL)內(nèi)填充膽固醇酯CE，相對(duì)減少了TG的充填，使肝外轉(zhuǎn)移的TG減少，可能導(dǎo)致血液中TG降低，而肝臟內(nèi)TG蓄積。血漿內(nèi)高TG和高LDL水平，使大鼠體內(nèi)過(guò)氧化損傷作用增強(qiáng)，黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶活性增加產(chǎn)生大量氧自由基，而體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)清除大量的氧自由基，而不斷消耗。因此，高脂飲食大鼠血清T-SOD水平低于對(duì)照組，說(shuō)明本次實(shí)驗(yàn)造模成功。

高脂血癥大鼠，經(jīng)酸柏梔油軟膠囊干預(yù)5周后，血清TC、LDL-C、HDL-C和TG水平降低，血清T-SOD水平升高；并且高劑量組降低血清TC效果好于辛伐他汀組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；高劑量組降低LDL-C和TG作用與辛伐他汀組相當(dāng)，中劑量和低劑量組則不如辛伐他汀，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；高劑量組升高血清T-SOD水平高于辛伐他汀組，中、低劑量組則低于辛伐他汀組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；高、中、低劑量酸柏梔軟膠囊降低血清TC、LDL-C和TG作用，隨劑量增加而增加，高劑量組效果最好，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；其升高血清T-SOD作用，也隨劑量增加而增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而酸柏梔油軟膠囊卻降低血清HDL-C，且隨劑量增加作用更加明顯。酸柏梔油軟膠囊的主要成分為油酸、亞油酸和亞麻酸等不飽和脂肪酸和維生素E[1]，其中油酸[9]屬十八碳一烯酸，不飽和鍵的位置在甲基端的第九位，屬于ω-9不飽和脂肪酸；亞油酸[10](Linoleic acid；18：2 ω-6)是人體的一種必需脂肪酸(EFA)，屬于18 碳多不飽和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids, PUFA)，有兩個(gè)雙鍵，第一個(gè)雙鍵出現(xiàn)在甲基端的第六位，稱為ω-6多不飽和脂肪酸。亞麻酸[10](Linolenic acid，LA，C18：3)也是人體的一種必需脂肪酸(EFA)，屬于18碳多不飽和脂肪酸，包含三個(gè)雙鍵，有兩個(gè)同分異構(gòu)體：α-亞麻酸(ALA)和γ-亞麻酸(GLA)。α- 亞麻酸(ALA)是ω-3脂肪酸的典型代表，在人體內(nèi)可以合成其他的ω-3多不飽和脂肪酸(EPA、DHA)；GLA 是ω-6 多不飽和脂肪酸，是合成花生四烯酸(Arachidonic acid，ARA)的前體；油酸作為不飽和脂肪酸的一員，能夠緩解飽和脂肪酸引起的細(xì)胞毒性[11]，但是也可以引起細(xì)胞的氧化損傷與胰島素抵抗[12-13]。多不飽和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids, PUFA)，是人體的必須營(yíng)養(yǎng)成分之一，既能為機(jī)體提供能量，又是細(xì)胞內(nèi)膜的重要組成成分，其中ω-3、ω-6多不飽和脂肪酸還可影響血脂代謝。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，ω-3型多元不飽和脂肪酸能夠通過(guò)調(diào)控LDL-C受體mRNA水平而調(diào)節(jié)LDL-C受體活性；二十碳五烯酸(Eicosa pntemacnioc acid，EPA)、二十二碳六烯酸(Docosa hexaenoic acid, DHA)可使LDL-C受體活性增加，減少LDL-C受體在血液中水平，并促進(jìn)LDL-C受體向HDL-C轉(zhuǎn)化；同時(shí)，EPA、DHA 通過(guò)抑制羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶活性，減少對(duì)食物中TC的吸收，增加TC在糞便中排泄從而降低TC水平[14]。維生素E作為氧自由基和單線氧的清除劑，是機(jī)體抗氧化系統(tǒng)中非酶促反應(yīng)體系的重要組成成分。其可能通過(guò)可通過(guò)清除活性氧自由基、抑制細(xì)胞脂質(zhì)氧化、減少細(xì)胞中H2O2誘導(dǎo)的DNA 損傷和打斷脂質(zhì)過(guò)氧化鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、抑制核酸內(nèi)切酶的活化和促進(jìn)受損DNA的清除[15]等途徑清除脂質(zhì)過(guò)氧化自由基，升高高脂血癥大鼠SOD活性。酸柏梔油軟膠囊一方面通過(guò)多不飽和脂肪酸降低高血脂大鼠血清TC、 LDL和TG水平，減少了氧自由基的產(chǎn)生，減弱了脂質(zhì)過(guò)氧化作用，使SOD活性增加；另一方面，其含有47.6%維生素E，可清除脂質(zhì)過(guò)氧化自由基，升高高脂血癥大鼠SOD活性；而其降低高脂血癥大鼠HDL水平可能是降低TC的繼發(fā)效應(yīng)，即血清TC越低，機(jī)體代償性向肝臟轉(zhuǎn)移TC需要HDL就越少，體內(nèi)合成的HDL也就越少。

總之，酸柏梔油軟膠囊具有降低高脂質(zhì)血癥大鼠血清TC、LDL、TG和升高SOD水平的作用，其具體作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1]李寶莉,朱梅,陳雅慧,等. 酸柏梔油軟膠囊中脂肪酸和維生素E 的組成[J]. 中國(guó)老年學(xué)雜志,2013, 33(13):3106-3107.

[2]陳雅慧,朱梅,李寶莉, 等. 酸柏梔油軟膠囊對(duì)血瘀模型大鼠血液流變學(xué)的影響[J]. 中國(guó)老年學(xué)雜志,2012, 32(13):2773-2775.

[3]陳雅慧,朱梅,李寶莉, 等.酸柏梔油軟膠囊對(duì)小鼠耐缺氧和抗疲勞的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志,2012,28(4):339-341.

[4]李寶莉,陳雅慧,高楓,等. 酸柏梔油軟膠囊對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶及腦中NO、Ach 的影響[J]. 中藥藥理與臨床,2012,28(3):95-97.

[5]Yokozawa T，Cho EJ，Sasaki S，etal. The protective role of Chinese prescription Kangen-karyu extract on diet-induced hypercholesterolemia in rats [J]. Biol Pharm Bull, 2006,29( 4):760-765.

[6]謝文鴻,李亞潔,吳麗萍.深海魚(yú)油對(duì)高脂血癥大鼠血脂的影響[J]. 護(hù)理研究, 2013，27(7):2034-2036.

[7]Yanagita T, Han SY, Wang YM,etal. Cycloalliin, a cyclic sulfur imino acid, reduces serum triacylglycerol in rats [J]. Nutrition, 2003, 19:140-143.

[8]王玉明，王靜鳳，薛長(zhǎng)湖.膽固醇影響大鼠脂肪代謝的機(jī)制研究[J]. 營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2007,29(6):530-534.

[9]周曉晶,李可,范航,等.不同變種及種源紫蘇種子油脂肪酸組成及含量比較[J]. 北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2015,37(1):95-106.

[10] 李殿鑫,陳銀基,周光宏, 等.ω-3 多不飽和脂肪酸分類、來(lái)源與疾病防治功能[J]. 中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng), 2006,(6)：52-54.

[11] Listenberger LL，Han X，Lewis SE，etal． Triglyceride accumulation protects against fatty acid-induced lipotoxicity[J]．Proceedings of the National Academy of Sciences，2003，100(6):3077-3082．

[12] Hwang YJ，Wi HR，Kim HR，etal． Pinus densiflora Sieb． Et Zucc． alleviates lipogenesis and oxidative stress during oleic acidinducedsteatosis in HepG2 cells[J]． Nutrients，2014，6 (7):2956-2972．

[13] Wu HT，Chen W，Cheng KC，etal． Oleic acid activates peroxisome proliferator-activated receptor δ to compensate insulin resistance in steatotic cells[J]． The Journal of Nutritional Biochemistry，2012，3(10):1264-1270．

[14] Jurczuk M，Brzóska MM，Moniuszko-Jakoniuk J． Hepatic and renal concentrations of vitamins E and Cin lead-and ethanol-exposed rats．An assessment of their involvement in the mechanisms of peroxidative damage[J]． Food and Chemical Toxicology，2007，45( 8) : 1478 -1486．

[15] 汪求真，馬愛(ài)國(guó)． 維生素E 對(duì)氧化應(yīng)激及相關(guān)慢性病的影響[J]． 國(guó)外醫(yī)學(xué): 衛(wèi)生學(xué)分冊(cè)，2008，35( 6) :364-370．

(收稿：2015-07-17)

Preliminary study on antioxidant activity of soft capsule of compound oil of jujube，arboruitae，and gardenia

Medical College of Yan’an University(Yan’an 716000)

Zhang ZhengxiangFu JiatingJing Donghua et al

ABSTRACTObjective:To investigate the antioxidant effects of soft capsule of compound oil of jujube，arboruitae，and gardenia. Methods: The 60 SD rats were randomly assigned to normal control group，model control group, high, medium and low SCCOJAG group and simvastatin group. A normal diet was given to the control group and a high fat diet was given to other groups. After 4 weeks，the level of triglyceride (TG), total cholesterol (TC), high density lipoprotein (HDL) and low density lipoprotein (LDL) in serum were determined by the automatic biochemical analyzer for orbital blood sampling. After the establishment of the model of hyperlipidemia rats，other groups were administered in the dose of 1ml / 100g every 9:00 a.m. according to the gavage method except for the control group; model control group was given normal saline，the positive control group received simvastatin (0.3 mg / 100g)，high dose group given SCCOJAG (0.45g/ 100g)， middle dose group given acid SCCOJAG 0.18g/100g，low dose group given SCCOJAG 0.072g/100g. After 5 weeks, the abdomen was anaesthetized with chloral hydrate, the abdominal aortic blood sampling was collected to determine the levels of plasma TG,TC,HDL,LDL and total superoxide dismutase (T-SOD).Results: After high fat diet for 4 weeks ，plasma TC,HDL and LDL levels of the rats with high fat diet were higher than those in the control group(P<0.05)，and TG levels were lower than those in the control group (P<0.05). After 5 weeks' intervention，SCCOJAG could reduce serum TC of the rats with hyperlipidemia, elevated serum levels of T-SOD (P< 0.01)；High dose group decreased low density lipoprotein cholesterol (LDL-C) and TG levels (P< 0.05).Conclusion: SCCOJAG can reduce the blood lipid of hyperlipidemia rats and elevated serum TSOD in rats with hyperlipidemia..

KEY WORDS@Soft capsule of compound oil of jujube , arboruitae and gardeniaHyperlipidemiasModels,animalAntioxidants Rat

【中圖分類號(hào)】R392.5

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.03.004

*國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201210719014)

延安大學(xué)專項(xiàng)科研基金項(xiàng)目(YD2008-44)

△延安大學(xué)附屬醫(yī)院