1例O型糾B型疑難血型鑒定分析

侯 萍 李劍平

1例O型糾B型疑難血型鑒定分析

侯 萍 李劍平

目的 探討初篩和復檢不符的疑難血型1例并對其進行分析。方法 采用血清學方法和分子生物學方法聯合對1例復檢的血型進行疑難血型鑒定。結果 血清學檢測結果證實為有B抗原，但不能證實是否是B抗原減弱還是B亞型，分子生物檢測結果證實為B型，兩種方法均證實為B型，非O型。結論 ABO血型的正確定型與臨床輸血安全有著緊密的聯系，錯誤的血型定型會使該獻血者在輸血時發生輸血反應，嚴重者甚至可危及受血者生命。因此對初篩有所懷疑的血型必須進行復檢，正確定型。

疑難血型；鑒定；分析

ABO血型的正確定型與臨床輸血安全有著緊密的聯系，錯誤的血型定型會使該獻血者在輸血時發生輸血反應，嚴重者甚至可危及受血者生命。本研究在復檢1名初篩為O型的獻血者ABO血型時，發現正定型抗B血清與獻血者紅細胞發生弱凝集，懷疑其可能是B抗原減弱或者是ABO亞型，為進一步確認該獻血者的ABO血型，進行了一系列的血型血清學和分子生物學試驗，現報道如下。

1 病例簡介

獻血者，女，35歲，遼寧省鳳城市人，已婚，2014年4月在本站采血車進行無償獻血300 mL。各項檢測指標合格。紙板法在室溫下紅細胞與抗A和抗B血清均不凝集，定為O型，然后檢驗科復檢發現紅細胞與抗B血清發生弱凝集，遂送本科室進行疑難血型鑒定。

2 方法

2.1 血清學檢測

2.1.1 試劑與儀器 抗A、抗B試劑、抗AB、抗H、人ABO血型反定型用紅細胞試劑盒（上海血液生物醫藥有限責任公司，批號：20130406，43700，20130408，20145310），抗A、抗B試劑、人ABO血型反定型用紅細胞試劑盒（北京金豪制藥股份有限公司，批號：2013063014，2014043010）。KUBOTA細胞洗滌離心機（日本久保田公司）。

2.1.2 ABO血型鑒定、血型物質測定、吸收放散試驗ABO血型正反定型、血型物質測定、吸收放散試驗方法均參考相關操作進行[7]，具體方法如下。

（1）ABO血型正反定型 正定型每管加1滴抗A、抗B、抗AB、和抗H試劑，同時分別加1滴患者3%～5%的紅細胞；反定型每管分別加2滴患者血清和1滴反定型Ac、Bc、Oc及患者自身細胞，離心，判讀結果。

（2）血型物質測定 制備倍量稀釋的抗體。用抗A檢查A型分泌型，抗B檢查B型分泌型；混合2滴稀釋后的抗體與1滴3%～5%的含有相應抗原的紅細胞鹽水，室溫中和15 min，離心判讀結果，檢查是否為A、B分泌型。

（3）吸收放散試驗 吸收試驗：抗A、抗B標準血清倍比稀釋測效價；取患者洗3次后的亞基紅細胞與等量的抗血清混合，4℃放置1 h，離心，吸取上清液，即為吸收液，吸收液做效價與相應的抗A、抗B標準血清對比。

放散試驗：取上述離心后壓積細胞加入1/2容積的生理鹽水，56℃水浴放散7～10 min，離心，上清液即為放散液，用A和B型紅細胞鑒定抗體，確定受檢者血型。

2.2 分子生物學檢測

2.2.1 樣本DNA提取 用血液DNA提取試劑盒(北京天根公司)從獻血者血液樣本中提取DNA，并用核酸蛋白測定儀測定DNA濃度和純度，試驗嚴格按照DNA提取試劑盒使用說明書進行操作。

2.2.2 ABO血型的聚合酶鏈反應-序列特異性引物基因分型（PCR-SSP） 采用天津秀鵬公司人紅細胞ABO血型基因檢測試劑盒，按照試劑盒操作說明書嚴格進行操作，首先配制dNTP-Buffer工作液，然后配制Buffer-酶-樣本混合液，混勻并離心Buffer-酶-樣本混合液，分別向每個引物孔（1～8孔）各加10 μL的混合液，每孔再分別加15～20 μL石蠟油，用密封膜封好PCR反應板；反應板頂部置PCR密封壓力墊，關上PCR儀，啟動PCR程序。結束后將PCR產物轉移到2.5%瓊脂糖凝胺電泳，電泳150 V，15 min，紫外光拍照記錄。

3 結果

3.1 血清學檢測結果 獻血者紅細胞在室溫下與上海和北京的抗B凝集均較弱為2+，同時與抗AB的凝集更弱為鏡下mf，與抗H凝集則高達4+，正定型出現定型困難；反定型獻血者血漿與Ac凝集為4+，與Bc、Oc及自身均不凝集，反定型為B型。血型物質測定為分泌型，有B物質。經吸收放散試驗證明其紅細胞上有B抗原，沒有A抗原。見表1～表5。

表1 ABO血型正反定型結果

表2 血型物質測定結果

表3 受檢者與抗A血清吸收試驗結果

表4 受檢者與抗B血清吸收試驗結果

表5 放散試驗結果

3.2 分子生物學檢測結果 根據PCR-SSP檢測試劑盒提供的參考等位基因和圖1電泳結果判定該獻血員基因型B/O 2。該結果符合其血清型。見圖1。

圖1 PCR-SSP電泳圖注：1：O 1；2：非O 1；3：O 2；4：非O 2；5：B；6：非B；7：A 2；8：非A 2

4 討論

本例B型獻血者由于紅細胞表面B抗原極弱，在采血車采用紙板法定型極易誤定為O型。該獻血者在進行血型血清學鑒定時，發現正定型抗B凝集減弱，抗AB凝集極弱，造成血型定型困難，為進一步鑒定該獻血者血型，我們又進行了血型物質和吸收放散試驗，結果證明，有B抗原存在，暫定B型，但不排除B亞型的可能性，

由于血清學技術存在一定的局限性，有時導致一些疑難血型標本難以準確判定。因此，通過采用分子生物學技術可以準確地對正、反定型不一致的標本進行定型[1-2]。所以，本研究對本例血清學存在B抗原，但不能確定是B抗原減弱還是B亞型的標本進行了分子生物學的基因檢測，經進一步分子生物學試驗證實基因型為B/O 2，該結果顯示為B型，與血清學結果基本一致，同時排除了B亞型的可能性，證實為B抗原減弱的B型獻血者。

血型的正確鑒定對于獻血者和用血者都具有重要的臨床意義，是保證安全輸血的關鍵。本例為1名已婚的女性獻血者，因此，如果該獻血者為O型血，與非O型血的男士生子，可能會有發生新生兒溶血病的風險，因此該獻血者血型的正確定型尤為重要。另外，作為用血者，血型不合的血液輸注也會引起急性溶血性輸血反應的可能性[3]。

據文獻報道[4-5]，血型鑒定發生錯誤的原因，有47%由于人為錯誤造成，因此在日常工作中，發現正反定型不一致時，一定要引起高度重視。就醫療系統而言，有15%是檢測人員沒執行嚴格查對制度和醫療技術操作規程造成[6]。就血站而言，隨著無償獻血人員的逐漸增多，血型錯定或者一些疑難血型的風險就逐漸加大，因此，除了要求采血車工作人員增加責任感和嚴格按照操作規程進行檢測外，對有疑問的血型一定要復檢，復檢采用血清學方法，如果不能證實是否是抗原減弱或者亞型，還需進一步的分子生物學試驗進行確證，保證血型的準確無誤，進而保證輸血安全。

[1] 李彤彤，黃嫻，王維.國內異常ABO血型的鑒定研究進展[J].檢驗醫學與臨床，2013，10（14）：1889-1890.

[2] 萬小春，李雪群，嚴鳳好.從檢出8例弱B型探討ABO血型正反定型的重要性[J].中外健康文摘，2011，8（16）：208-209.

[3] 蘭炯采，負中橋，陳靜嫻．輸血免疫血液學實驗技術[M]．北京：人民衛生出版社，2011:49-140．

[4] 劉萍，李榮國，王志梅,等.街頭獻血車ABO血型初檢錯誤的原因分析及預防[J].中外健康文摘，2009,6（32）：115.

[5] 李瑞麗，秦強國，張穎,等.2010年無償獻血者ABO血型檢測結果分析[J].中國醫藥指南，2011，9（14）：70.

[6] 陳巖.血型鑒定錯誤的原因分析[J].中外健康文摘，2013，10（25）：12.

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.13.007

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