銅綠假單胞菌β-內酰胺酶的檢測及耐藥性分析

周 星

銅綠假單胞菌β-內酰胺酶的檢測及耐藥性分析

周 星

目的 探討銅綠假單胞菌β-內酰胺酶的檢測及耐藥性分析。方法 抽取銅綠假單胞菌株123株，對其展開體外藥敏試驗，對耐藥率進行統計，而后對β-內酰胺酶進行檢測，對比分析β-內酰胺酶陽性與陰性菌株的耐藥率。結果 經統計發現，本組123株銅綠假單胞菌株中，檢出產金屬β-內酰胺酶菌株26株，陽性率為21.14%；金屬β-內酰胺酶陽性菌株對頭孢哌酮、頭孢曲松、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、頭孢哌酮／舒巴坦、頭孢他啶、哌拉西林、頭孢吡肟、亞胺培南的耐藥率分別為100.00%、100.00%、73.08%、26.92%、69.23%、76.92%、100.00%、80.77%、100.00%，均明顯高于金屬β-內酰胺酶陰性菌株的30.93%、63.92%、10.31%、8.25%、1.03%、21.65%，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論 銅綠假單胞菌對β-內酰胺類抗菌藥物存在明顯耐藥性的主要機制為產金屬β-內酰胺酶，因此臨床用藥過程中，及時展開細菌培養和藥敏試驗的意義重大，能夠有效促進臨床合理用藥，減少耐藥性的發生。

銅綠假單胞菌；β-內酰胺類抗生素；合理用藥；耐藥性

臨床上檢測到的銅綠假單胞菌屬于條件致病菌的一種，可對人體的各個系統產生感染，其具有相對復雜的耐藥機制，從而使其成為現階段臨床上所面臨的嚴峻考驗。曾有研究指出，金屬β-內酰胺酶的產生是銅綠假單胞菌對β-內酰胺類抗菌藥物存在明顯耐藥性的主要機制，從而使得臨床用藥治療的難度增加[1]。在臨床抗菌治療的過程中，對病原菌的耐藥性進行了解對于臨床合理用藥，改善療效，降低耐藥性等均具有重要意義[2]。本次研究中出于對銅綠假單胞菌β-內酰胺酶的檢測及耐藥性進行分析探討，為今后的臨床治療工作中合理用藥提供可靠的參考依據的目的，對123株銅綠假單胞菌株的耐藥性以及產金屬β-內酰胺酶情況進行了檢測分析，現匯報結果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 研究中資料來源于本院2013年1月～2014年12月收集到的123株銅綠假單胞菌株，菌株來源于本院收治的臨床確診的門診以及住院患者的痰液、膿液、分泌物、引流液以及尿液標本。

1.2 方法

1.2.1 研究方法 對收集到的123株銅綠假單胞菌株展開體外藥敏試驗，對耐藥率進行統計，而后對β-內酰胺酶進行檢測，對比分析β-內酰胺酶陽性與陰性菌株的耐藥率。

1.2.2 藥敏試驗 研究中藥敏試驗采取K-B法，實驗操作依照臨床和實驗室標準化協會2011年的標準[3]進行，并對藥敏結果進行判斷。

1.2.3 金屬β-內酰胺酶的檢測 β-內酰胺酶檢測采取紙片協同法進行，金屬離子與乙二胺四乙酸絡合可使金屬酶失去活性，依據該特性，將待測菌株制備成0.5麥氏單位的菌液，將其均勻的涂布在M-H瓊脂平板上，并將2張亞胺培南紙片貼在平皿上，紙片之間的距離為2 cm，在其中1張亞胺培南紙片上加入5 μL的EDTA，結果判斷陽性標準：含EDTA的亞胺培南紙片的抑菌圈直徑相對于亞胺培南紙片增加6 cm，也就是表示該菌株可以產金屬酶。

1.3 統計學方法 采用SPSS 18.0統計學軟件，計數資料用例數（n）表示，計數資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 β-內酰胺酶檢測結果 本組123株銅綠假單胞菌株中，檢出產金屬β-內酰胺酶菌株26株，陽性率為21.14%。

2.2 藥敏試驗結果 研究中對銅綠假單胞菌對臨床常用的

12種抗菌藥物的耐藥性進行了檢測，結果發現，銅綠假單胞菌對氨曲南、慶大霉素、頭孢哌酮的耐藥率超過了40%，而對頭孢曲松的耐藥率則超過了70%，銅綠假單胞菌對哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、頭孢哌酮／舒巴坦等抗菌藥物的耐藥率則不足30%。見表1。

2.3 β-內酰胺酶陽性與陰性菌株藥敏試驗結果對比 金屬β-內酰胺酶陽性菌株與陰性菌株對頭孢哌酮、頭孢曲松、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、頭孢哌酮／舒巴坦、頭孢他啶、哌拉西林、頭孢吡肟、亞胺培南的耐藥率比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；對氨曲南、慶大霉素、左氧氟沙星的耐藥率比較，差異

3 討論

銅綠假單胞菌為臨床上十分常見的一種條件致病菌，研究發現，銅綠假單胞菌可以誘發機體多系統、多臟器、多部位的感染。流行病學調查結果顯示，在呼吸科多數老年患者的體質虛弱，存在慢性疾病基礎，抵抗力較低，因此多長期住院治療，從而導致患者機體的微生態失衡，造成體內菌群失調，這就為銅綠假單胞菌的生長和繁殖創造了良好的條件[4]。曾有文獻報道，銅綠假單胞菌對β-內酰胺類抗生素的耐藥性明顯，經研究發現，其可能與其產金屬β-內酰胺酶有關[5-6]。本次研究中出于對銅綠假單胞菌β-內酰胺酶的檢測及耐藥性進行分析探討，為今后的臨床治療工作中合理用藥提供可靠的參考依據的目的，對我院收集到的123株銅綠假單胞菌株的耐藥性以及產金屬β-內酰胺酶情況進行了檢測分析，結果發現，銅綠假單胞菌對氨曲南、慶大霉素、頭孢哌酮的耐藥率超過了40%，而對頭孢曲松的耐藥率則超過了70%，銅綠假單胞菌對哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、頭孢哌酮／舒巴坦等抗菌藥物的耐藥率則不足30%；123株銅綠假單胞菌株中，檢出產金屬β-內酰胺酶菌株26株，陽性率為21.14%，并且金屬β-內酰胺酶陽性菌株與陰性菌株對頭孢他啶、頭孢吡肟、頭孢哌酮／舒巴坦、亞胺培南、哌拉西林、頭孢曲松、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、頭孢哌酮的耐藥率比較差異有統計學意義；對氨曲南、左氧氟沙星、慶大霉素的耐藥率比較則差異無統計學意義。這一結果與相關文獻報道結果一致[7-8]，由此證實了，銅綠假單胞菌對β-內酰胺類抗菌藥物存在明顯耐藥性的主要機制為產金屬β-內酰胺酶，因此臨床用藥過程中，及時展開細菌培養和藥敏試驗的意義重大，能夠有效促進臨床合理用藥，減少耐藥性的發生。

[1] 余廣超,徐霖,袁廣卿，等.亞胺培南耐藥銅綠假單胞菌的金屬β-內酰胺酶檢測［J］.中國抗生素雜志,2011,36(3):223-225．

[2] 張娟,葉聰秀，曹開源，等.耐碳青霉烯類銅綠假單胞菌金屬β-內酰胺酶基因檢測及其與整合子的關系研究[J].中國抗生素雜志,2013,38(9):705-710．

[3] 陳東科，孫長貴．實用臨床微生物學檢驗與圖譜［M］.北京:人民衛生出版社,2011：99-102.

[4] 張淑明,馬國賢,李曉輝,等.2011年本院銅綠假單胞菌分布及耐藥情況分析［J］.中國臨床藥理學雜志,2012,28(9):650-652．

[5] 屠涌濤,肖美英,糜祖煌.一組泛耐藥銅綠假單胞菌耐藥相關基因的樣本聚類分析[J].實用醫學雜志,2013,29(9):1515-1517．

[6] 周志慧，呂芳芳,周建英,等.中國部分地區銅綠假單胞菌耐藥性及主要β-內酰胺酶基因型分布[J].中華傳染病雜志,2010, 28(10):577-581．

[7] 王紹志,柴連海,張勇，等.ICU患者感染銅綠假單胞菌對抗菌藥物耐藥性機制分析及檢測方法評價[J].中國急救醫學,2015,25(6):510-513.

[8] 楊艷,王厚照,張玲，等.多重耐藥鮑曼不動桿菌耐藥性及β－內酰胺酶耐藥基因的研究[J].微生物學雜志,2015,18(4):62-66.

湖南 411400 湘鄉市人民醫院檢驗科 （周星）無統計學意義。見表2。

表1 123株銅綠假單胞菌株藥敏試驗結果統計

抗菌藥物敏感(n)敏感率(%)耐藥(n)耐藥率(%)氨曲南7056.915343.09慶大霉素7157.725242.28頭孢哌酮6754.475645.53頭孢曲松3528.468871.54哌拉西林/他唑巴坦9476.422923.58阿米卡星9879.672520.33頭孢哌酮／舒巴坦10484.551915.45頭孢他啶8266.674133.33左氧氟沙星8065.044334.96哌拉西林7863.414536.59頭孢吡肟7863.414536.59亞胺培南9778.862621.14

表2 β-內酰胺酶陽性與陰性菌株藥敏試驗結果對比[n(%)]

抗菌藥物金屬酶陽性（n=26）金屬酶陰性（n=97）χ2值P值敏感耐藥敏感耐藥氨曲南15（57.69）11（42.31）55（56.70）42（43.30）0.00820.3982慶大霉素14（53.84）12（46.16）57（58.76）40（41.24）0.20310.4412頭孢哌酮0（0）26（100.00）67（69.07）30（30.93）39.44510.0212頭孢曲松0（0）26（100.00）35（36.08）62（63.92）13.11270.0276哌拉西林/他唑巴坦7（26.92）19（73.08）87（89.69）10（10.31）44.83280.0187阿米卡星19（73.08）7（26.92）89（91.75）8（8.25）5.04840.0421頭孢哌酮／舒巴坦8（30.77）18（69.23）96（98.97）1（1.03）67.88970.0243頭孢他啶6（23.08）20（76.92）76（78.35）21（21.65）28.18950.0194左氧氟沙星15（57.69）11（42.31）65（67.01）32（32.99）0.78300.3287哌拉西林0（0）26（100.00）78（80.41）19（19.59）57.14640.0102頭孢吡肟5（19.23）21（80.77）73（75.26）24（24.74）27.74200.0113亞胺培南0（0）26（100.00）97（100.00）0（0）123.00000.0098

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.13.102