不同產地黃芪藥材中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量的比較

滕紅梅+昝亞玲+賈鵬+王玲麗+房敏峰+胡正海

摘要：通過高效液相色譜法（HPLC）測定不同產地黃芪藥材中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量，以期為黃芪藥材質量評定提供依據。采用Waters Symmetry C18 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm ），流動相為乙腈-水（81 ∶19），流速：1.0 mL/min，柱溫：30 ℃，進樣量10 μL，檢測波長260 nm。結果表明：毛蕊異黃酮葡萄糖苷的濃度在0.145 6～0.698 7 mg/mL 范圍內與峰面積呈良好的線性關系，r=0.999 7，平均加樣回收率為100.35%，RSD為1.98%，所建方法快速、簡便、重現性好。4個省份16個產地藥材中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量差異較大，其中內蒙古自治區包頭市所產黃芪中其含量最高。從各地平均值看，內蒙古自治區>山西省>甘肅省>黑龍江省，且內蒙古自治區與其他3個省份藥材中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量差異顯著。省內之間的差異顯著性結果表明，內蒙自治區和山西省產地之間差異較大，甘肅省和黑龍江省產地之間差異較小。

關鍵詞：黃芪；毛蕊異黃酮葡萄糖苷；HPLC

中圖分類號： S567.01

文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2016）04-0226-03

黃芪為著名滋補中藥，是豆科植物蒙古黃芪[Astragalus membranaceus （Fisch.） Bge. var. mongholicus （Bge.） Hsiao]或膜莢黃芪[Astragalus membranaceus （Fisch.） Bge.]的干燥根。現代藥理研究表明：黃芪具有斂瘡生肌、延緩衰老、增強機體免疫等功能[1]。諸多研究證明，黃酮類作為黃芪中的主要成分之一，其抗炎、抗病毒、調節免疫等多方面的藥理作用非常顯著[2-6]。毛蕊異黃酮葡萄糖苷作為黃芪藥材中黃酮類的主要成分，已被2010版《中國藥典》作為黃芪藥材的指標性成分[1]。

黃芪分布于華北、東北及西北地區。目前市場上的黃芪藥材產地較廣，品質差異較大[7-8]。本研究通過對黃芪4個主產省份山西省、內蒙自治區、黑龍江省、甘肅省16個不同產地藥材中的毛蕊異黃酮葡萄糖苷進行測定，并運用SSR法比較不同產地黃芪藥材中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量的差異大小，研究結果可為黃芪藥材的品質評價提供基礎和依據。

1 儀器、材料和試劑

1.1 儀器

Waters 2695高效液相色譜儀、2998 PDA檢測器、RE-52AA 系列旋轉蒸發器、KQ3200DE型數控超聲波清洗器、SHZ-DIII循環水式多用真空泵、FZ102微型植物試樣粉碎機、FA1004電子天平、DK-S24電熱恒溫水浴鍋、GF-101型電熱鼓風干燥箱。

1.2 材料

黃芪藥材分別購于山西省、內蒙自治區、黑龍江省、甘肅省等當地藥材市場，共4個省16個不同產地的黃芪，經運城學院滕紅梅教授認定均為黃芪藥材。將藥材置于40 ℃電熱鼓風干燥箱進行干燥，研成粉末過60目篩保存以備用。

1.3 試劑

毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品（購自中國藥品生物制品檢定所，批號：20141109）；水為二次重蒸水，甲醇和乙腈為色譜純。

2 方法與結果

2.1 黃芪中毛蕊異黃酮葡萄糖苷測定方法的建立

2.1.1 色譜條件 Waters公司Symmetry C18 色譜柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相水-乙腈（81 ∶19）；柱溫，30 ℃；流速，1.0 mL/min；檢測波長，260 nm；進樣量10 μL。色譜圖見圖1。

2.1.2 對照品溶液的制備 精確稱取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品6.950 mg置10 mL容量瓶中。加甲醇溶解、搖勻，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 將精確稱取的2 g黃芪粉末置于具塞錐形瓶中，加入甲醇50 mL，于80 ℃水浴鍋中加熱回流4 h，待放涼后再搖勻過濾，濾渣用10 mL甲醇洗滌2～3次，之后將原液與洗滌液合并，減壓回收溶劑后將殘渣加甲醇溶解，再轉移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻后用微孔濾膜過濾，即得到供試品溶液。

2.1.4 標準曲線的繪制 吸取毛蕊異黃酮苷對照品溶液 1 000 μL，加入濾過的甲醇2 000 μL，再用微孔濾膜濾過，置于樣品瓶中。按“2.1.1”節的色譜條件分別進樣2、4、6、8、10 μL，以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，結果發現，在濃度范圍內，標準品濃度與其峰面積呈現良好的線性關系。線性回歸方程為y=3.80×107 x+1.06×106，r=0.999 7，線性范圍0.145 6～0.698 7 mg/mL。

2.1.5 精密度試驗 精確吸取山西省渾源市同一供試品溶液重復進樣5次，測得毛蕊異黃酮葡萄糖苷峰面積的RSD為0.46%。

2.1.6 穩定性試驗 取山西省渾源市同一供試品溶液，分別在0、2、4、8、16、24 h檢測，顯示毛蕊異黃酮葡萄糖苷峰面積的RSD為1.20%。

2.1.7 重現性試驗 準確稱取產自山西省渾源市的藥材粉末平行樣品5份，按“2.1.3”節的制備方法操作，顯示毛蕊異黃酮葡萄糖苷峰面積的RSD為1.67%，平均含量為 0.234 mg/g，表明本法重現性良好。

2.1.8 回收率試驗 稱取含量已知的同一批樣品5份，每份約0.5 g，依次加入濃度為0.133 mg/mL的毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品溶液4 mL。按“2.1.3”節方法配制樣品溶液，并于“2.1.1”節色譜條件下進樣，根據測量結果計算出各對照品的平均加樣回收率。計算所得回收率為100.35%，RSD為 1.98%。

2.1.9 樣品含量測定 精確量取樣品溶液按照“2.1.1”節的色譜條件測定其峰面積，根據“2.1.2”節得出的回歸方程計算不同產地黃芪毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量。

2.2 試驗結果

2.2.1 不同產地黃芪藥材毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量比較 由表1可見，4省份16個不同產地的黃芪藥材中內蒙古自治區包頭市的毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量最高，為 1.312 mg/g，山西省安澤市黃芪中含量最少，為 0.230 mg/g，包頭市藥材的含量是安澤市藥材的5.7倍，差別較為懸殊。含量最少的安澤黃芪中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量也是《中國藥典》中規定最低含量0.020%的10倍以上。

2.2.2 SSR法分析不同產地黃芪中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量差異 由圖2可以看出，內蒙古自治區來源藥材的毛蕊異黃酮葡萄糖苷平均含量最高，甘肅省藥材含量最低，4個省份來源藥材結果為：內蒙古自治區>山西省>甘肅省>黑龍江省，其含量平均值依次為：0.690、0.361、0.300、0.273 mg/g。運用DPS軟件中SSR法分析4個省份不同產地黃芪藥材中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的差異，結果表明：內蒙古自治區來源藥材和其他3個省份之間差異顯著（P<0.05），其3個省份之間含量相對接近，山西省和黑龍江省間差異顯著，山西省和甘肅省、甘肅省和黑龍江省間差異不顯著。

由圖3可以看出，內蒙古自治區的4個產地來源中，包頭市藥材含量最高，呼倫貝爾市藥材含量最低：包頭市和呼和浩特市與其他產地差異呈顯著水平，赤峰市和呼倫貝爾市差異不顯著。

由圖4可以看出，在山西4個產地中，安澤的含量最低，應縣的含量最高，表明不同產地藥材的毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量差異較為顯著。

由圖5可以看出，在甘肅的5個產地中，渭源的含量最低，宕昌的含量最高。宕昌與甘肅其他產地黃芪中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量差異顯著，其他幾個產地的含量接近。

由圖6可以看出，黑龍江的3個產地中大興安嶺和長白山、哈爾濱來源的藥材差異呈顯著水平，長白山和哈爾濱來源的藥材差異不顯著。

3 結論

毛蕊異黃酮葡萄糖苷已經被《中國藥典》作為衡量黃芪質量優劣的一個標志性成分。當前，市場上的黃芪藥材產地較為混雜，主要來源地有山西、內蒙古、甘肅及黑龍江等。本試驗對4個黃芪主產省份16個產地的研究結果表明：產地不同黃芪中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量差異明顯，這一研究結果與劉楊等[7]及黃志勤等[9]對河北、河南、山西、內蒙古等地黃芪藥材的研究結論相似，揭示毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量差異是造成各地黃芪藥材品質不同的主要原因之一。

4個黃芪主產省份中，內蒙古、山西、甘肅黃芪中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量整體較高，黑龍江平均含量較低，這與黃芪的道地產區為山西、內蒙古和甘肅的傳統觀念相符。 4個省份不同產地的黃芪中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的差異顯著性結果表明，山西和內蒙兩省份內產地之間差異較大，甘肅和黑龍江兩省份內產地之間差異較小。內蒙古包頭和自治區內其他3個產地之間的含量相差懸殊。說明同為道地產區，黃芪藥材中的黃酮類有效成分含量差異較大，啟示我們評價藥材不能籠統以道地產區而論，要客觀評價藥材的品質，需要科學合理地制定較為系統化的評價體系。

參考文獻：

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