限食水平和時間對黃鱔血細胞數的影響

阮國良+柯玉清+楊代勤

摘要：研究了不同水平和時間的限食對黃鱔（Monopterus albus）血細胞數量的影響，結果顯示：（1）不同程度的限食未使黃鱔血液的紅細胞數發生顯著性減少（P>0.05），但使其白細胞數均呈顯著增加趨勢（P<0.05），且隨著限食時間的延長其白細胞數增加更為明顯；（2）隨著限食時間的延長，黃鱔的淋巴細胞和血栓細胞比例顯著上升（P<0.05），而單核細胞和中性粒細胞等吞噬細胞的比例顯著下降（P<0.05）。因此，限食可迫使黃鱔產生防御性生理反應且可能使其非特異性免疫能力下降，從而提示在黃鱔的間歇性限食獲得補償生長的投喂模式中應避免長時間的持續限食。

關鍵詞：黃鱔（Monopterus albus）；限食水平；限食時間；血細胞

中圖分類號： S966.4

文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2016）04-0285-02

黃鱔（Monoperus albus）是我國重要的經濟養殖魚類[1]，其網箱養殖在長江中游地區發展迅速并正朝著產業方向發展[2]。為節約飼料與勞力成本、提高養殖效益，我們的研究初步表明，黃鱔在合理的限食投喂模式中可獲得良好的生長補償效應[3]，但在限食投喂過程中，黃鱔的健康狀況與免疫功能有待加以評價。血細胞是魚類重要的免疫細胞，其相關指標的變化與魚體的營養、代謝狀況及免疫功能等的動態變化密切相關[4-5]。李富樂等對洞庭湖區黃鱔的血細胞進行了分類與計數研究[6]，但有關限食與黃鱔血細胞變化的相關性研究則尚未見報道。為此，本試驗初步研究了不同水平和時間限食后黃鱔血細胞的變化，旨在評價限食程度對黃鱔免疫力的影響，從而為生產實踐中制定可行的限食投喂方案提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗魚、餌料及飼養條件

試驗用幼鱔（19.5±2.0）g來自長江大學黃鱔研究所。試驗魚經體質量篩選后轉入實驗室的塑料水族箱（70 cm×55 cm×36 cm）內進行飼養。在正式試驗前進行7 d飽食投喂的適應性暫養。暫養和試驗期間的餌料為鮮活的水蚯蚓。試驗期間，養殖箱內的溶氧量>5.2 mg/L，氨氮量<0.09 mg/L，pH值 6.5～7.2，通過雙制式空調將室溫控制在（25.0±1.0） ℃。

1.2 限食試驗設計

試驗設對照組和限食處理組，每組隨機放黃鱔20尾，每組3個重復，試驗時間為64 d。對照組為飽食投喂組（S0F60），即連續每天飽食喂食1次，每天傍晚時分進行足量投喂并觀察黃鱔的攝食情況，從投喂開始至 2 h后如水族箱中水蚯蚓略有剩余則視為飽食投喂。限食水平試驗的處理組如下：禁食1 d飽食喂食2 d組（S1F2），共20個周期；禁食1 d飽食喂食3 d組（S1F3），共15個周期；禁食1 d飽食喂食4 d組（S1F4），共12個周期。限食持續時間試驗的處理組如下：禁食1 d飽食喂食2 d組（S1F2），共20個周期；禁食2 d飽食喂食4 d組（S2F4），共10個周期；禁食4 d飽食喂食8 d組（S4F8），共5個周期。試驗期間，每天17：00—18：00時進行飽食投喂1次，次日約09：00虹吸清理殘餌。

1.3 血細胞的采集、計數與數據處理

限食投喂試驗結束后，對各個重復的水簇箱分別隨機取5尾黃鱔，采集血液樣本進行各類血細胞計數。血液采集、血細胞的計數方法參照文獻[7-8]。試驗結果用x±s表示，采用Statistica 6.0軟件進行單因素方差分析（ANOVA），當處理之間差異顯著（P<0.05）時，用Duncans檢驗進行多重比較。

2 結果

2.1 限食水平對黃鱔血細胞數量的影響

由表1可以看出，經過60 d的重復性“饑餓—投喂”養殖后，限食試驗組黃鱔較正常投喂黃鱔的紅細胞數少，并且隨著限食水平的提高呈下降趨勢，但下降不明顯（P>0.05）；各試驗組白細胞數量均顯著高于對照組S0F60（P<0.05），隨著限食水平的提高白細胞數量在各處理組之間無顯著差異。

2.2 限食水平對黃鱔白細胞分類計數的影響

由表2可以看出，經過60 d的重復性“饑餓—投喂”飼養后，各試驗組的黃鱔淋巴細胞比例均呈上升趨勢，試驗組S1F2和S1F3顯著高于對照組S0F60（P<0.05），試驗組S1F4與其他組比較均不顯著（P>0.05）；各試驗組單核細胞比例均呈下降趨勢，試驗組S1F2比例顯著低于對照組S0F60（P<0.05），但與其他組之間無顯著差異（P>0.05）；試驗組S1F2和S1F3的血栓細胞比例顯著低于對照組S0F60和試驗組S1F4（P<0.05）；試驗組嗜中性粒細胞和嗜酸性粒細胞比例變化均不顯著（P>0.05）。

2.3 限食持續時間對黃鱔血細胞數的影響

由表3可以看出，經過60 d的重復性“饑餓—投喂”飼養后，各試驗組黃鱔紅細胞數量均低于對照組S0F60，但無顯著差異（P>0.05）；各試驗組白細胞數量均高于對照組S0F60，且試驗組S2F4和S4F8顯著高于對照組S0F60（P<0.05）。但各試驗組之間不存在顯著差異（P>0.05）。

2.4 限食持續時間對黃鱔白細胞分類計數的影響

由表4可以看出，經過60 d的重復性“饑餓—投喂”飼養后，試驗組的淋巴細胞比例均顯著高于對照組S0F60（P<005），且試驗組S4F8顯著高于試驗組S1F2和S2F4（P<0.05）；試驗組單核細胞比例均顯著低于對照組S0F60（P<0.05），且隨著限食持續時間的延長，呈逐漸下降趨勢；試驗組嗜中性粒細胞均顯著低于對照組S0F60（P<0.05），隨著限食持續時間的延長，嗜中性粒細胞比例下降越來越明顯，試驗組S4F8顯著低于試驗組S1F2和S2F4（P<0.05）；試驗組嗜酸性粒細胞比例均有所上升，但變化不顯著（P>0.05）；各試驗組血栓細胞均低于對照組S0F60，試驗組S1F2和S4F8顯著低于其他組（P<0.05）。

3 討論

3.1 限食對黃鱔紅細胞數和白細胞數的影響

血液作為魚類重要的組織器官之一，主要具有運輸、交換和防御三大生理功能。血液成分的相對恒定是魚類生命活動正常進行的基本條件。魚類血液生理指標變化與機體的新陳代謝、生理狀況顯著相關，因而被廣泛地用來評價魚體的健康狀況及其對環境的適應。目前，對一些魚類的研究表明，紅細胞的數量隨著饑餓時間的延長而下降[9-13]。陳曉耘等對饑餓南方幼魚血液的研究表明，饑餓使南方幼魚血液生理指標變化顯著，紅細胞數量顯著減少[9]；陳慧群等對鰻鱺的研究表明饑餓20 d后，鰻鱺紅細胞數較正常魚下降了39%[12]。本研究中，限食使黃鱔紅細胞數下降，這與以上文獻的許多研究結果基本一致，但這種下降與對照組相比差異不顯著（P>0.05）。氧氣運輸是紅細胞的重要生理功能之一，故限食程度可能不影響黃鱔紅細胞攜帶和運輸氧氣的功能。本研究發現，不同水平的限食均引起黃鱔白細胞數有所增加，且隨著限食持續時間的增加其白細胞數顯著上升，這與持續饑餓可使某些魚類的白細胞數顯著上升[14-16]的結果基本一致。攝食不足或饑餓引起白細胞數上升很可能是魚類為適應生存條件變化所發生的一種防御性生理反應。

3.2 限食對黃鱔各類白細胞比例的影響

白細胞與機體的免疫功能有關，通過對魚類白細胞數量和各類白細胞比例的測定可以從某個側面反映其生理狀況的變化，同時白細胞數目的變化顯示了機體的免疫系統受到影響。

李霞等發現，當饑餓時間少于20 d 時，紅鰭東方鲀外周血中白細胞的數量明顯增加，但隨著饑餓時間的延長，白細胞的數量呈下降趨勢；脾臟中淋巴細胞的轉化率明顯升高，淋巴細胞的增殖能力也增加，巨噬細胞的吞噬活性增加，吞噬力增強，但長時間饑餓后魚體淋巴增殖能力和吞噬力會降低[17]。本研究中隨著限食水平提高和限食持續時間的延長，黃鱔白細胞數及各類白細胞比例發生了不同程度的變化。限食水平試驗組S1F2和S1F3淋巴細胞比例、血栓細胞比例顯著上升，試驗組S1F2單核細胞比例顯著下降；限食持續時間試驗組淋巴細胞比例均顯著高于對照組，單核細胞、中性粒細胞比例均顯著低于對照組S0F60。本研究表明，隨著限食程度的加深，黃鱔的淋巴細胞和血栓細胞比例顯著上升，而單核細胞和中性粒細胞等吞噬細胞的比例顯著下降。因此，限食作為一種營養脅迫促使黃鱔非特異性免疫能力發生不同程度的下降，從而提示在黃鱔的間歇性限食獲得補償生長的投喂模式中應避免持續長時間的限食。

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