限食水平和時(shí)間對(duì)黃鱔血細(xì)胞數(shù)的影響

阮國良+柯玉清+楊代勤

摘要：研究了不同水平和時(shí)間的限食對(duì)黃鱔（Monopterus albus）血細(xì)胞數(shù)量的影響，結(jié)果顯示：（1）不同程度的限食未使黃鱔血液的紅細(xì)胞數(shù)發(fā)生顯著性減少（P>0.05），但使其白細(xì)胞數(shù)均呈顯著增加趨勢（P<0.05），且隨著限食時(shí)間的延長其白細(xì)胞數(shù)增加更為明顯；（2）隨著限食時(shí)間的延長，黃鱔的淋巴細(xì)胞和血栓細(xì)胞比例顯著上升（P<0.05），而單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞等吞噬細(xì)胞的比例顯著下降（P<0.05）。因此，限食可迫使黃鱔產(chǎn)生防御性生理反應(yīng)且可能使其非特異性免疫能力下降，從而提示在黃鱔的間歇性限食獲得補(bǔ)償生長的投喂模式中應(yīng)避免長時(shí)間的持續(xù)限食。

關(guān)鍵詞：黃鱔（Monopterus albus）；限食水平；限食時(shí)間；血細(xì)胞

中圖分類號(hào)： S966.4

文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2016）04-0285-02

黃鱔（Monoperus albus）是我國重要的經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖魚類[1]，其網(wǎng)箱養(yǎng)殖在長江中游地區(qū)發(fā)展迅速并正朝著產(chǎn)業(yè)方向發(fā)展[2]。為節(jié)約飼料與勞力成本、提高養(yǎng)殖效益，我們的研究初步表明，黃鱔在合理的限食投喂模式中可獲得良好的生長補(bǔ)償效應(yīng)[3]，但在限食投喂過程中，黃鱔的健康狀況與免疫功能有待加以評(píng)價(jià)。血細(xì)胞是魚類重要的免疫細(xì)胞，其相關(guān)指標(biāo)的變化與魚體的營養(yǎng)、代謝狀況及免疫功能等的動(dòng)態(tài)變化密切相關(guān)[4-5]。李富樂等對(duì)洞庭湖區(qū)黃鱔的血細(xì)胞進(jìn)行了分類與計(jì)數(shù)研究[6]，但有關(guān)限食與黃鱔血細(xì)胞變化的相關(guān)性研究則尚未見報(bào)道。為此，本試驗(yàn)初步研究了不同水平和時(shí)間限食后黃鱔血細(xì)胞的變化，旨在評(píng)價(jià)限食程度對(duì)黃鱔免疫力的影響，從而為生產(chǎn)實(shí)踐中制定可行的限食投喂方案提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)魚、餌料及飼養(yǎng)條件

試驗(yàn)用幼鱔（19.5±2.0）g來自長江大學(xué)黃鱔研究所。試驗(yàn)魚經(jīng)體質(zhì)量篩選后轉(zhuǎn)入實(shí)驗(yàn)室的塑料水族箱（70 cm×55 cm×36 cm）內(nèi)進(jìn)行飼養(yǎng)。在正式試驗(yàn)前進(jìn)行7 d飽食投喂的適應(yīng)性暫養(yǎng)。暫養(yǎng)和試驗(yàn)期間的餌料為鮮活的水蚯蚓。試驗(yàn)期間，養(yǎng)殖箱內(nèi)的溶氧量>5.2 mg/L，氨氮量<0.09 mg/L，pH值 6.5～7.2，通過雙制式空調(diào)將室溫控制在（25.0±1.0） ℃。

1.2 限食試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)設(shè)對(duì)照組和限食處理組，每組隨機(jī)放黃鱔20尾，每組3個(gè)重復(fù)，試驗(yàn)時(shí)間為64 d。對(duì)照組為飽食投喂組（S0F60），即連續(xù)每天飽食喂食1次，每天傍晚時(shí)分進(jìn)行足量投喂并觀察黃鱔的攝食情況，從投喂開始至 2 h后如水族箱中水蚯蚓略有剩余則視為飽食投喂。限食水平試驗(yàn)的處理組如下：禁食1 d飽食喂食2 d組（S1F2），共20個(gè)周期；禁食1 d飽食喂食3 d組（S1F3），共15個(gè)周期；禁食1 d飽食喂食4 d組（S1F4），共12個(gè)周期。限食持續(xù)時(shí)間試驗(yàn)的處理組如下：禁食1 d飽食喂食2 d組（S1F2），共20個(gè)周期；禁食2 d飽食喂食4 d組（S2F4），共10個(gè)周期；禁食4 d飽食喂食8 d組（S4F8），共5個(gè)周期。試驗(yàn)期間，每天17：00—18：00時(shí)進(jìn)行飽食投喂1次，次日約09：00虹吸清理殘餌。

1.3 血細(xì)胞的采集、計(jì)數(shù)與數(shù)據(jù)處理

限食投喂試驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)各個(gè)重復(fù)的水簇箱分別隨機(jī)取5尾黃鱔，采集血液樣本進(jìn)行各類血細(xì)胞計(jì)數(shù)。血液采集、血細(xì)胞的計(jì)數(shù)方法參照文獻(xiàn)[7-8]。試驗(yàn)結(jié)果用x±s表示，采用Statistica 6.0軟件進(jìn)行單因素方差分析（ANOVA），當(dāng)處理之間差異顯著（P<0.05）時(shí)，用Duncans檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果

2.1 限食水平對(duì)黃鱔血細(xì)胞數(shù)量的影響

由表1可以看出，經(jīng)過60 d的重復(fù)性“饑餓—投喂”養(yǎng)殖后，限食試驗(yàn)組黃鱔較正常投喂黃鱔的紅細(xì)胞數(shù)少，并且隨著限食水平的提高呈下降趨勢，但下降不明顯（P>0.05）；各試驗(yàn)組白細(xì)胞數(shù)量均顯著高于對(duì)照組S0F60（P<0.05），隨著限食水平的提高白細(xì)胞數(shù)量在各處理組之間無顯著差異。

2.2 限食水平對(duì)黃鱔白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的影響

由表2可以看出，經(jīng)過60 d的重復(fù)性“饑餓—投喂”飼養(yǎng)后，各試驗(yàn)組的黃鱔淋巴細(xì)胞比例均呈上升趨勢，試驗(yàn)組S1F2和S1F3顯著高于對(duì)照組S0F60（P<0.05），試驗(yàn)組S1F4與其他組比較均不顯著（P>0.05）；各試驗(yàn)組單核細(xì)胞比例均呈下降趨勢，試驗(yàn)組S1F2比例顯著低于對(duì)照組S0F60（P<0.05），但與其他組之間無顯著差異（P>0.05）；試驗(yàn)組S1F2和S1F3的血栓細(xì)胞比例顯著低于對(duì)照組S0F60和試驗(yàn)組S1F4（P<0.05）；試驗(yàn)組嗜中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞比例變化均不顯著（P>0.05）。

2.3 限食持續(xù)時(shí)間對(duì)黃鱔血細(xì)胞數(shù)的影響

由表3可以看出，經(jīng)過60 d的重復(fù)性“饑餓—投喂”飼養(yǎng)后，各試驗(yàn)組黃鱔紅細(xì)胞數(shù)量均低于對(duì)照組S0F60，但無顯著差異（P>0.05）；各試驗(yàn)組白細(xì)胞數(shù)量均高于對(duì)照組S0F60，且試驗(yàn)組S2F4和S4F8顯著高于對(duì)照組S0F60（P<0.05）。但各試驗(yàn)組之間不存在顯著差異（P>0.05）。

2.4 限食持續(xù)時(shí)間對(duì)黃鱔白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的影響

由表4可以看出，經(jīng)過60 d的重復(fù)性“饑餓—投喂”飼養(yǎng)后，試驗(yàn)組的淋巴細(xì)胞比例均顯著高于對(duì)照組S0F60（P<005），且試驗(yàn)組S4F8顯著高于試驗(yàn)組S1F2和S2F4（P<0.05）；試驗(yàn)組單核細(xì)胞比例均顯著低于對(duì)照組S0F60（P<0.05），且隨著限食持續(xù)時(shí)間的延長，呈逐漸下降趨勢；試驗(yàn)組嗜中性粒細(xì)胞均顯著低于對(duì)照組S0F60（P<0.05），隨著限食持續(xù)時(shí)間的延長，嗜中性粒細(xì)胞比例下降越來越明顯，試驗(yàn)組S4F8顯著低于試驗(yàn)組S1F2和S2F4（P<0.05）；試驗(yàn)組嗜酸性粒細(xì)胞比例均有所上升，但變化不顯著（P>0.05）；各試驗(yàn)組血栓細(xì)胞均低于對(duì)照組S0F60，試驗(yàn)組S1F2和S4F8顯著低于其他組（P<0.05）。

3 討論

3.1 限食對(duì)黃鱔紅細(xì)胞數(shù)和白細(xì)胞數(shù)的影響

血液作為魚類重要的組織器官之一，主要具有運(yùn)輸、交換和防御三大生理功能。血液成分的相對(duì)恒定是魚類生命活動(dòng)正常進(jìn)行的基本條件。魚類血液生理指標(biāo)變化與機(jī)體的新陳代謝、生理狀況顯著相關(guān)，因而被廣泛地用來評(píng)價(jià)魚體的健康狀況及其對(duì)環(huán)境的適應(yīng)。目前，對(duì)一些魚類的研究表明，紅細(xì)胞的數(shù)量隨著饑餓時(shí)間的延長而下降[9-13]。陳曉耘等對(duì)饑餓南方幼魚血液的研究表明，饑餓使南方幼魚血液生理指標(biāo)變化顯著，紅細(xì)胞數(shù)量顯著減少[9]；陳慧群等對(duì)鰻鱺的研究表明饑餓20 d后，鰻鱺紅細(xì)胞數(shù)較正常魚下降了39%[12]。本研究中，限食使黃鱔紅細(xì)胞數(shù)下降，這與以上文獻(xiàn)的許多研究結(jié)果基本一致，但這種下降與對(duì)照組相比差異不顯著（P>0.05）。氧氣運(yùn)輸是紅細(xì)胞的重要生理功能之一，故限食程度可能不影響黃鱔紅細(xì)胞攜帶和運(yùn)輸氧氣的功能。本研究發(fā)現(xiàn)，不同水平的限食均引起黃鱔白細(xì)胞數(shù)有所增加，且隨著限食持續(xù)時(shí)間的增加其白細(xì)胞數(shù)顯著上升，這與持續(xù)饑餓可使某些魚類的白細(xì)胞數(shù)顯著上升[14-16]的結(jié)果基本一致。攝食不足或饑餓引起白細(xì)胞數(shù)上升很可能是魚類為適應(yīng)生存條件變化所發(fā)生的一種防御性生理反應(yīng)。

3.2 限食對(duì)黃鱔各類白細(xì)胞比例的影響

白細(xì)胞與機(jī)體的免疫功能有關(guān)，通過對(duì)魚類白細(xì)胞數(shù)量和各類白細(xì)胞比例的測定可以從某個(gè)側(cè)面反映其生理狀況的變化，同時(shí)白細(xì)胞數(shù)目的變化顯示了機(jī)體的免疫系統(tǒng)受到影響。

李霞等發(fā)現(xiàn)，當(dāng)饑餓時(shí)間少于20 d 時(shí)，紅鰭東方鲀外周血中白細(xì)胞的數(shù)量明顯增加，但隨著饑餓時(shí)間的延長，白細(xì)胞的數(shù)量呈下降趨勢；脾臟中淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率明顯升高，淋巴細(xì)胞的增殖能力也增加，巨噬細(xì)胞的吞噬活性增加，吞噬力增強(qiáng)，但長時(shí)間饑餓后魚體淋巴增殖能力和吞噬力會(huì)降低[17]。本研究中隨著限食水平提高和限食持續(xù)時(shí)間的延長，黃鱔白細(xì)胞數(shù)及各類白細(xì)胞比例發(fā)生了不同程度的變化。限食水平試驗(yàn)組S1F2和S1F3淋巴細(xì)胞比例、血栓細(xì)胞比例顯著上升，試驗(yàn)組S1F2單核細(xì)胞比例顯著下降；限食持續(xù)時(shí)間試驗(yàn)組淋巴細(xì)胞比例均顯著高于對(duì)照組，單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞比例均顯著低于對(duì)照組S0F60。本研究表明，隨著限食程度的加深，黃鱔的淋巴細(xì)胞和血栓細(xì)胞比例顯著上升，而單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞等吞噬細(xì)胞的比例顯著下降。因此，限食作為一種營養(yǎng)脅迫促使黃鱔非特異性免疫能力發(fā)生不同程度的下降，從而提示在黃鱔的間歇性限食獲得補(bǔ)償生長的投喂模式中應(yīng)避免持續(xù)長時(shí)間的限食。

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