類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者嗜堿性粒細(xì)胞與疾病活動(dòng)度和Th1應(yīng)答失衡的關(guān)系①

唐　培　陳秋華　路　杰　蘭巧芬　廖煥金　陳燕文　李尚妹　吳　平　劉華鋒　謝　彤　潘慶軍

(廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)研究中心&風(fēng)濕免疫科，湛江524001)

?

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者嗜堿性粒細(xì)胞與疾病活動(dòng)度和Th1應(yīng)答失衡的關(guān)系①

唐培②陳秋華路杰蘭巧芬廖煥金陳燕文李尚妹吳平劉華鋒謝彤潘慶軍

(廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)研究中心&風(fēng)濕免疫科，湛江524001)

[摘要]目的：探討RA患者外周嗜堿性粒細(xì)胞的活化情況和活化機(jī)制，以及與疾病活動(dòng)度和Th1/Th2應(yīng)答失衡的關(guān)系。方法：本研究運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis,RA)患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中Th1/Th2細(xì)胞的比值和嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量及活化水平，用ELISA法檢測(cè)血清中IFN-γ和IL-4水平，用Western blot法檢測(cè)血清中循環(huán)的IgE型免疫復(fù)合物(IgE-CIC)的水平。結(jié)果：Th1/Th2細(xì)胞比值與DAS28評(píng)分呈低度線性正相關(guān)關(guān)系；RA患者血清IFN-γ水平較對(duì)照組顯著升高，且和疾病活動(dòng)度相關(guān)，但I(xiàn)L-4的水平則無(wú)差異；RA患者嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照組顯著降低，且高度活化(高表達(dá)CD203c和CD62L)；RA患者外周血存在高水平的IgE-CIC,而對(duì)照組則無(wú)。結(jié)論：RA患者外周血嗜堿性粒細(xì)胞高度活化、數(shù)量顯著減少，可能會(huì)遷徙至次級(jí)淋巴組織和炎癥部位，對(duì)抗外周Th1應(yīng)答失衡，有望為RA的防治提供新的線索。

[關(guān)鍵詞]類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎; 嗜堿性粒細(xì)胞; Th1 細(xì)胞; IFN-γ; IL-4

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis，RA)是一種常見(jiàn)的T、B細(xì)胞免疫應(yīng)答失衡并以炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)關(guān)節(jié)滑膜為特征的慢性自身免疫性疾病，常伴有血清類風(fēng)濕因子陽(yáng)性等特點(diǎn)。其發(fā)病機(jī)制雖尚未完全解析，但是Th1/Th2應(yīng)答失衡在RA疾病的發(fā)展中起到重要作用[1]。既往關(guān)于RA患者Th1/Th2應(yīng)答失衡的研究，主要認(rèn)為活動(dòng)期RA患者外周血中以Th1介導(dǎo)的細(xì)胞應(yīng)答為主[1]。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，在RA發(fā)病早期外周血中以Th2應(yīng)答為主，而長(zhǎng)期慢性RA則是以Th1應(yīng)答為主[2]。在RA出現(xiàn)臨床關(guān)節(jié)病變的最早期，滑膜和滑膜液中出現(xiàn)短暫的Th2型細(xì)胞因子譜(IL-4和IL-13)但顯著缺乏Th1型細(xì)胞因子譜(IFN-γ)，這可決定早期滑膜炎發(fā)展成RA，而不是非RA持久性滑膜炎[3]。Aarvak[4]首次發(fā)現(xiàn)1例成年活動(dòng)期RA患者滑膜中以Th2應(yīng)答為主而外周血PBMC以Th1應(yīng)答為主，兩年后發(fā)展為滑膜中以Th0和Th1應(yīng)答為主，且與RA炎癥相關(guān)。以上研究說(shuō)明Th1/Th2型細(xì)胞因子的產(chǎn)生在RA疾病的早期和晚期不同，提示在疾病的不同階段可能存在Thl/Th2應(yīng)答模式的改變，而且在不同部位如外周循環(huán)系統(tǒng)和關(guān)節(jié)局部所起的作用可能不同，仍需進(jìn)一步深入探討。

近年來(lái)，隨著嗜堿性粒細(xì)胞(Basophil)條件缺失技術(shù)的發(fā)展和高純度細(xì)胞分選技術(shù)的應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)它是Th2細(xì)胞早期分化過(guò)程中主要細(xì)胞因子IL-4的產(chǎn)生細(xì)胞，可調(diào)節(jié)Th2型免疫應(yīng)答，進(jìn)而參與Th2免疫介導(dǎo)的相關(guān)疾病。此外，還發(fā)現(xiàn)嗜堿性粒細(xì)胞可表達(dá)MHCⅡ類分子和共刺激分子，并可遷移至引流淋巴結(jié)，攝取抗原并提呈給初始T淋巴細(xì)胞，參與抗原遞呈[5]。但嗜堿性粒細(xì)胞在RA發(fā)病中的作用和機(jī)制尚未見(jiàn)報(bào)道。

本研究擬對(duì)RA患者體內(nèi)Th1和Th2水平及嗜堿性粒細(xì)胞的數(shù)量和活化狀態(tài)進(jìn)行檢測(cè)，并進(jìn)一步探討嗜堿性粒細(xì)胞的活化機(jī)制，有望為嗜堿性粒細(xì)胞靶向防治RA提供線索。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1研究對(duì)象2013年10月至2014年9月在廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科確診的RA患者62例，平均年齡為(49.5±1.5)歲，病程(7.6±4.9)年，所有入選病例均符合1987年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)RA分類標(biāo)準(zhǔn)[6]。活動(dòng)期RA患者62例(根據(jù)疾病活動(dòng)度指標(biāo)DAS28評(píng)分(評(píng)分≤5.1為低中活動(dòng)度組，評(píng)分>5.1為高活動(dòng)度組)，其中低中活動(dòng)度RA患者33例，高活動(dòng)度RA患者29例，另有22例本院同期健康志愿者(男4例，女18例)作為對(duì)照組，對(duì)照組平均年齡(46.7±2.5)歲。

1.1.2檢測(cè)試劑熒光抗體PE-anti-human CD203c，APC/Cy7-anti-human CD62L，Percp-anti-human CD3，F(xiàn)ITC-anti-human CD8，Alexa Fluor 647-anti-human IFN-γ， PE/Cy7--anti-human IL-4，均購(gòu)自Biolegend公司。抗人IgE抗體(HRP)，購(gòu)自Abcam公司。人IL-4 ELISA試劑盒和人IFN-γ ELISA 試劑盒購(gòu)自博士德生物技術(shù)公司。紅細(xì)胞裂解液和固定液購(gòu)自eBioscience公司。人外周血淋巴細(xì)胞分離液，購(gòu)自天津?yàn)笊锟萍脊尽４碳?PMA-lonomycin和阻斷劑BFA-monomycin購(gòu)自杭州聯(lián)科生物技術(shù)公司。所有試劑均嚴(yán)格按照廠家說(shuō)明書(shū)保存和操作。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1流式檢測(cè)外周血中Th1/Th2細(xì)胞的比值和嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量和活化指標(biāo)采集RA病人和正常對(duì)照組EDTA抗凝的外周靜脈血，密度梯度離心法獲得PBMC。各組加入刺激劑PMA-lonomycin于37℃孵育4 h后，再加入阻斷劑BFA-monensin混勻，37℃孵育2 h。PBS洗滌后用染色液重懸，加入抗CD3和CD8抗體混勻，37℃孵育30 min。PBS洗滌后加入固定液混勻，37℃孵育15 min，再加入通透液混勻，1 500 r/min×6 min離心洗滌一次。棄上清，加入通透液和抗IL-4和IFN-γ抗體混勻，37℃孵育30 min。PBS洗滌重懸后用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。以CD3+CD8-標(biāo)記為CD3+CD4+T細(xì)胞。以IFN-γ和IL-4同型對(duì)照為標(biāo)準(zhǔn)設(shè)門確定Th1和Th2細(xì)胞亞群位置。采集RA病人和正常對(duì)照組EDTA抗凝的外周靜脈血，取200 μl加入CD203c及CD62L抗體混勻，37℃孵育30 min。再加入紅細(xì)胞裂解液混勻，避光放置15 min。1 500 r/min×6 min離心后PBS 洗滌一次并重懸細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。以CD203c和CD62L抗體的同型對(duì)照為標(biāo)準(zhǔn)設(shè)門識(shí)別嗜堿性粒細(xì)胞。結(jié)果以嗜堿性粒細(xì)胞表達(dá)CD203c和CD62L平均熒光強(qiáng)度(Median fluorescence intensity,MFI)的相對(duì)值表達(dá)。

1.2.2ELISA法檢測(cè)血清中IFN-γ和IL-4水平采集RA病人和正常對(duì)照組外周靜脈血4 ml，靜置后1 500 r/min×15 min離心后收集血清，-80℃凍存?zhèn)錂z。按照說(shuō)明書(shū)操作，最后用酶標(biāo)儀在450nm測(cè)定吸光度(OD)值。應(yīng)用Excel程序建立標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算血清IFN-γ及IL-4濃度。

1.2.3免疫印跡法檢測(cè)外周血中IgE型免疫復(fù)合物(IgE-CIC)水平采集RA病人和正常對(duì)照組外周靜脈血4 ml，靜置后1 500 r/min×15 min離心后收集血清，常規(guī)雙聚乙二醇(PEG 6000)法提取循環(huán)免疫復(fù)合物[7]。然后經(jīng)SDS-PAGE 電泳和轉(zhuǎn)膜后進(jìn)行免疫印跡染色，即5%封閉蛋白封閉2 h后加入抗人IgE-HRP(1∶800)4℃過(guò)夜。PBS洗滌后曝光。

2結(jié)果

2.1RA患者外周Th1/Th2細(xì)胞的比值及其與DAS28評(píng)分的相關(guān)性結(jié)果顯示，Th1/Th2細(xì)胞比值與DAS28呈線性正相關(guān)關(guān)系 (圖1A)。RA患者高活動(dòng)度組Th1/Th2細(xì)胞比值顯著高于低中活動(dòng)度組和對(duì)照組(圖1B)。

2.2RA患者血清IFN-γ和IL-4水平RA患者高活動(dòng)度組血清IFN-γ水平顯著高于低中活動(dòng)度組和對(duì)照組(圖2A)，而三組血清IL-4的水平則無(wú)顯著性差異(圖2B)。

2.4對(duì)照組與RA患者外周嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量和活化度的比較以CD203c陽(yáng)性識(shí)別外周嗜堿性粒細(xì)胞(圖3A、B)[8]，在流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)圖上，嗜堿性粒細(xì)胞主要分布于淋巴細(xì)胞的右上部分。通過(guò)檢測(cè)其CD203c和CD62L的表達(dá)水平，可分析其活化程度(圖3C、D)。

圖1　RA患者外周血Th1/Th2細(xì)胞的比值及其與DAS28評(píng)分的相關(guān)性Fig.1　Ratio of Th1/ Th2 cells in RA patients and its correlation with DAS28 scoreNote: The control group (n=22),low and medium activity RA group (n=33) and high activity RA group (n=29).*.P<0.05.

圖2　RA患者血清IFN-γ和IL-4水平的比較Fig.2　Serum levels of IFN-γ and IL-4Note: The control group (n=22),low and medium activity RA group (n=33) and high activity RA group (n=29).*.P<0.05，***.P<0.001.

RA患者高活動(dòng)度組和低中活動(dòng)度組CD203c陽(yáng)性嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；高活動(dòng)度組與低中活動(dòng)度組CD203c陽(yáng)性嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖4A)。RA患者高活動(dòng)度組和低中活動(dòng)度組嗜堿性粒細(xì)胞CD203c MFI均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；高活動(dòng)度組與低中活動(dòng)度組嗜堿性粒細(xì)胞MFI比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (圖4B)。RA患者高活動(dòng)度組嗜堿性粒細(xì)胞CD62L的MFI高于低中活動(dòng)度組和對(duì)照組，而低中活動(dòng)度組又高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (圖4C)。

圖3　流式細(xì)胞術(shù)中外周血嗜堿性粒細(xì)胞的識(shí)別和活化指標(biāo)的量化Fig.3　Detection of basophils and its activation markers in flow cytometryNote: A.Scattergram of peripheral blood;B.The abszisse abscissa is PE-CD203c,P1 gate representatives basophils population;C.The abszisse abscissa representatives fluorescence intensity of PE-CD203c;D.The abszisse abscissa representatives fluorescence intensity of APC-Cy7-CD62L.

圖4　對(duì)照組與RA患者外周嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量和活化度的比較Fig.4　Comparison of control group and RA patients with peripheral basophils quantities and activation degreesNote: The control group (n=22),low and medium activity RA group (n=33) and high activity RA group (n=29).**.P<0.01,***.P<0.001.

圖5　對(duì)照組和RA患者外周血循環(huán)IgE型免疫復(fù)合物水平Fig.5　Levels of IgE-CIC in serum of control and RA patientsNote: A.WB of IgE-CIC in the serum of control group and RA patients；B.Analysis of the WB results of IgE-CIC in the serum of control group (n=22),RA patients with low and medium activity group (n=33) and the high activity group (n=29)；***.P<0.001.

2.5RA患者血循環(huán)IgE型免疫復(fù)合物水平免疫印跡發(fā)現(xiàn)RA患者外周血循環(huán)內(nèi)存在高水平IgE型免疫復(fù)合物(IgE-CIC)，高活動(dòng)度組高于低中活動(dòng)度組和對(duì)照組(圖5A、B)。

3討論

首先，本研究應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Th1/Th2細(xì)胞的比例和ELISA法檢測(cè)血清IFN-γ和IL-4水平，結(jié)果均發(fā)現(xiàn)，RA患者外周以Th1應(yīng)答為主。基于本組入選病人病程(7.6±4.9年)較長(zhǎng)，且主要為中老年患者(49.5±1.5歲)，故推測(cè)其發(fā)病狀態(tài)主要處于發(fā)病的中晚期，符合文獻(xiàn)報(bào)道的長(zhǎng)期慢性RA則是以Th1應(yīng)答為主[2]。

嗜堿性粒細(xì)胞的活化后可釋放大量的活性介質(zhì)(組胺、白三烯、細(xì)胞因子等)[9]，進(jìn)而介導(dǎo)組織損傷[10]，同時(shí)表面標(biāo)志物CD203c、CD63和CD11b等表達(dá)上調(diào)[10,11]。本研究以CD203c和CD62L為活化標(biāo)記探討RA患者嗜堿性粒細(xì)胞活化情況[8]。結(jié)果發(fā)現(xiàn)活動(dòng)期RA患者外周嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量顯著降低，活化程度顯著升高。將RA患者根據(jù)DAS28評(píng)分劃分為低活動(dòng)度、中活動(dòng)度和高活動(dòng)度組，由于低活動(dòng)度組例數(shù)較少，因此我們將低活動(dòng)度與中活動(dòng)度組合并與高活動(dòng)度組進(jìn)行比較后發(fā)現(xiàn)RA患者活動(dòng)度越高，外周血中嗜堿性粒細(xì)胞的活化程度越高，即嗜堿性粒細(xì)胞的活化水平與疾病活動(dòng)度相關(guān)。提示，嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量和活化程度有望作為評(píng)估RA疾病活動(dòng)度的新指標(biāo)。已報(bào)道，嗜堿性粒細(xì)胞位于外周血循環(huán)中，較少遷移至其他組織器官但其表達(dá)黏附分子CD62L(一種淋巴歸巢受體)[12,13]，可介導(dǎo)淋巴細(xì)胞通過(guò)高靜脈內(nèi)皮細(xì)胞向次級(jí)淋巴組織器官遷移[14]。同時(shí)有文獻(xiàn)報(bào)道，在以Th2應(yīng)答為主的Lyn-/-狼瘡樣小鼠外周血嗜堿性粒細(xì)胞CD62L表達(dá)上調(diào)，同時(shí)在其脾臟和淋巴結(jié)均可見(jiàn)嗜堿性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)[12]，提示CD62L可能介導(dǎo)外周血嗜堿性粒細(xì)胞向次級(jí)淋巴組織器官遷移。本研究結(jié)果提示，在RA患者中，CD62L可能介導(dǎo)活化的嗜堿性粒細(xì)胞向次級(jí)淋巴組織器官或者關(guān)節(jié)滑膜等炎癥部位遷移導(dǎo)致外周血嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量減少，仍需要檢測(cè)RA患者次級(jí)淋巴組織和炎癥部位，如關(guān)節(jié)滑膜中嗜堿性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)情況。

嗜堿性粒細(xì)胞可通過(guò)IgE依賴或非IgE依賴途徑活化[5]，但在RA發(fā)病中活化機(jī)制尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究用PEG沉淀試驗(yàn)[7]發(fā)現(xiàn)RA患者血清中含高水平的IgE型免疫復(fù)合物。也有同行報(bào)道，IgE型免疫復(fù)合物在RA患者體內(nèi)存在，特別是合并有重度關(guān)節(jié)炎和血管炎的患者體內(nèi)更為普遍[15-17]。IgE型抗核抗體在RA病人血清中以免疫復(fù)合物的形式存在[18]，并且這些免疫復(fù)合物可以激活嗜堿性粒細(xì)胞[13]。在RA患者外周血和關(guān)節(jié)液中可檢測(cè)到包含IgE抗體的IgE-CIC[19-21]，且IgE-CIC陽(yáng)性的RA患者疾病活動(dòng)度高于陰性的RA患者[21]。此外，IgE-CIC還可活化多種炎癥效應(yīng)細(xì)胞，如肥大細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞等[19,23]，促進(jìn)RA疾病的進(jìn)展。另有報(bào)道，瓜氨酸化蛋白和IgE型抗瓜氨酸化蛋白抗體(ACPA)形成的免疫復(fù)合物可通過(guò)與FcεRI受體交聯(lián)活化RA患者的嗜堿性粒細(xì)胞[24]。

綜上所述，RA患者外周血嗜堿性粒細(xì)胞高度活化、數(shù)量顯著減少，可能會(huì)遷徙至次級(jí)淋巴組織和炎癥部位，對(duì)抗外周Th1應(yīng)答失衡，有望為RA的防治提供新的線索。

參考文獻(xiàn)：

[1]Schulze-Koops H,Kalden JR.The balance of Th1/Th2 cytokines in rheumatoid arthritis [J].Best Pract Res Clin Rheumatol,2001,15(5):677-691.

[2]Gerli R,Bistoni O,Russano A,etal.In vivo activated T cells in rheumatoid synovitis.Analysis of Th1- and Th2-type cytokine production at clonal level in different stages of disease [J].Clin Exp Immunol,2002,129(3):549-555.

[3]Raza K,Falciani F,Curnow SJ,etal.Early rheumatoid arthritis is characterized by a distinct and transient synovial fluid cytokine profile of T cell and stromal cell origin [J].Arthritis Res Ther,2005,7(4):784-795.

[4]Aarvak T,Chabaud M,Thoen J,etal.Changes in the Th1 or Th2 cytokine dominance in the synovium of rheumatoid arthritis (RA):a kinetic study of the Th subsets in one unusual RA patient [J].Rheumatology,2000,39(5):513-522.

[5]王超，潘慶軍，馮永民，等.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血Th1細(xì)胞自噬相關(guān)標(biāo)記物的表達(dá)[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志,2013,29(8):816-818.

[6]Felson DT,Anderson JJ,Boers M,etal.American College of Rheumatology preliminary definition of important in rheumatoid arthritis[J].Arthritis Rheum,1995,6:727-735.

[7]Meretey K,Bohm U,Falus A,etal.Radioimmune double PEG precipitation technique for detecting complexed IgE [J].J Immunol Methods,1979,26:223-228.

[8]Ocmant A,Peignois Y,Mulier S,etal.Flow cytometry for basophil activation markers:the measurement of CD203c up-regulation is as reliable as CD63 expression in the diagnosis of cat allergy [J].J Immunol Methods，2007,320(1-2):40-48.

[9]鄧真真,潘慶軍,劉華鋒,等.嗜堿粒細(xì)胞CD63和CD203c表達(dá)及其與組胺釋放關(guān)系的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代免疫學(xué),2014,34(3):246-249.

[10]Peter V.Basophil activation antigens:molecular mechanisms and clinical implications [J].The Open Allergy J,2010,3:52-59.

[11]Abuaf N,Rostane H,Rajoely B,etal.Comparison of two basophil activation markers CD63 and CD203c in the diagnosis of amoxicillin allergy [J].Clin Exp Allergy,2008,38(6):921-928.

[12]Charles N,Hardwick D,Daugas E,etal.Basophils and the T helper 2 environment can promote the development of lupus nephritis [J].Nat Med,2010,16(6):701-707.

[13]Wimazal F,Ghannadan M,Muller MR,etal.Expression of homing receptors and related molecules on human mast cells and basophils:a comparative analysis using multi-color flow cytometry and toluidine blue/immunofluorescence staining techniques [J].Tissue Antigens,1999,54(5):499-507.

[14]Girard JP,Springer TA.High endothelial venules (HEVs):specialized endothelium for lymphocyte migration [J].Immunol Today,1995,16(9):449-457.

[15]De Clerck LS,Struyf NJ,Bridts CH,etal.Humoral immunity and composition of immune complexes in patients with rheumatoid arthritis with special reference to IgE-containing immune complexes [J].Clin Exp Rheumatol,1989,7(5):485-492.

[16]Meretey K,Falus A,Erhardt CC,etal.IgE and IgErheumatoid factors in circulating immune complexes in rheumatoid arthritis [J].Ann Rheum Dis,1982,41(4):405-408.

[17]De Clerck LS,Westedt ML,Cats A,etal.IgE deposition in normal skin of patients with rheumatoid arthritis in relation to clinical and laboratory findings [J].Ann Rheum Dis,1985,44(11):772-777.

[18]Permin H,Wiik A.The prevalence of IgE type antinuclear antibodies in rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus [J].Acta Pathol Microbiol Scand C,1978,86(5):245-249.

[19]De Clerck LS,Struyf NJ,Bridts CH,etal.Activation of inflammatory cells by immune complexes containing IgE in serum and synovial fluid of patients with rheumatoid arthritis:a study using flow cytometric analysis [J].Ann Rheum Dis,1991,50(6):379-382.

[20]Van Offel JF,De Clerck LS,Kersschot IE.Cholesterol crystals and IgE-containing immune complexes in rheumatoid pericarditis [J].Clin Rheumatol，1991,10(1):78-80.

[21]De Clerck LS,Struyf NJ,Bridts CH,etal.IgE-containing immune complexes in synovial fluid of patients with rheumatoid arthritis [J].Clin Rheumatol,1990,9(2):176-181.

[22]Bartholomew JS,Evanson JM,Woolley DE.Serum IgE anti-cartilage collagen antibodies in rheumatoid patients [J].Rheumatol Int,1991,11(1):37-40.

[23]Permin H,Wiik A,Djurup R.Phagocytosis by normal polymorphonuclear leukocytes of immune complexes from serum of patients with Felty′s syndrome and rheumatoid arthritis with special reference to IgE immune complexes [J].Acta Pathol Microbiol Immunol Scand C,1984,92(1):37-42.

[24]Schuerwegh AJ,Ioan-Facsinay A,Dorjée AL,etal.Evidence for a functional role of IgE anticitrullinated protein antibodies in rheumatoid arthritis [J].Proc Natl Acad Sci USA,2010,107(6):2586-2591.

[收稿2015-08-25修回2015-09-15]

(編輯倪鵬)

Relationships between basophil and disease activity and imbalance of Th1 responses in rheumatoid arthritis patients

TANGPei,CHENQiu-Hua,LUJie，LANQiao-Fen,LIAOHuan-Jin,CHENYan-Wen,LIShang-Mei,WUPing,LIUHua-Feng,XIETong,PANQing-Jun.

ClinicalResearchCenter&DepartmentofRheumatologyandImmunology，AffiliatedHospitalofGuangdongMedicalCollege,Zhanjiang524001，China

[Abstract]Objective:To investigate the activation state of peripheral basophil from RA patients and its mechanism,and the relationship between disease activity and imbalance of Th1/Th2 response.Methods: Flow cytometry was employed to test the ratio of Th1/Th2 cell and the number of basophil and its activation state in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from rheumatoid arthritis (RA).ELISA was used to measure serum levels of IFN-γ and IL-4.Western blot was employed to detect serum circulating immune complexes containing IgE (IgE-CIC).Results: The ratio of Th1 to Th2 cell have a low linear correlation with the DAS28 score.Serum levels of IFN-γ in patients with RA was significantly higher than the control group,and correlated with the disease activity,but not IL-4.Levels of basophil of RA patients was significantly reduced compared with the control group,and highly activated (high expression of CD203c and CD62L).The presence of high levels of IgE-CIC in RA patients,but not in control group.Conclusion: Peripheral basophil of RA patients that were highly activated and significantly reduced,may migrate to secondary lymphoid tissues and sites of inflammation to against the imbalance of Th1 response,which may provide new clues for the prevention and treatment of RA .

[Key words]Rheumatoid arthritis;Basophil;Th1 cells;IFN-γ;IL-4

doi:10.3969/j.issn.1000-484X.2016.05.022

作者簡(jiǎn)介：唐培(1989年-)，女，碩士，主要從事自身免疫性疾病發(fā)病機(jī)制的研究。通訊作者及指導(dǎo)教師：謝彤(1967年-),男，碩士，主任醫(yī)師，主要從事風(fēng)濕免疫性疾病防治研究，E-mail:xt1234@163.com。潘慶軍(1978年-),男，博士，副教授，主要從事風(fēng)濕免疫性疾病發(fā)病機(jī)制研究，E-mail:stilwapan@gmail.com。

中圖分類號(hào)R593.22

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號(hào)1000-484X(2016)05-0702-05

①本文受國(guó)家自然科學(xué)基金(81471530)和廣東省自然科學(xué)基金(S2013010011568)資助。

②同時(shí)供職于武漢大學(xué)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，武漢430060。