SPARCL1在肝癌中的表達及其臨床意義

歐陽晗月　樂　勇　張永法　郭榮平　石　明

510060 中山大學腫瘤防治中心

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SPARCL1在肝癌中的表達及其臨床意義

歐陽晗月樂勇張永法郭榮平石明

510060 中山大學腫瘤防治中心

【摘要】目的探討SPARCL1表達與肝癌患者術后預后的關系。方法收集154例肝癌患者的術后石蠟切片標本、臨床病理資料及隨訪資料，采用免疫組化染色方法對石蠟切片組織中SPARCL1進行檢測。結果不同肝癌組織中SPARCL1的水平具有差異;SPARCL1表達下調與門脈癌栓、病理分化差、TNM分期晚和BCLC分期晚等惡性指標顯著相關;SPARCL1表達下調的肝癌患者其中位生存時間顯著縮短(40.6個月vs118.7個月，P=0.002)。結論SPARCL1在肝癌中表達下調，提示肝癌患者的預后不良。

【關鍵詞】肝癌；SPARCL1；預后

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:701～703)

SPARCL1(SPARC-like 1)是1種分泌至細胞外基質的多功能糖蛋白,其與SPARC、SMOC-2等成員共同組成SPARC家族[1]。目前人類多種腫瘤組織中發現SPARCL1水平下調，并預示著腫瘤進展，其中前列腺癌、腸癌組織的SPARCL1下調提示患者的不良預后[2-4]。目前國內尚無SPARCL1在肝癌的研究報道。本研究旨在探討肝癌組織中SPARCL1水平與臨床病理資料相關性和其對肝癌患者預后的影響。

1材料與方法

1.1研究對象

收集2001年至2005年間本院肝膽科行手術治療的原發性肝癌確診病例154例的臨床病理資料。入組標準：①首次就診診斷為原發性肝癌并未接受任何治療；②無腹腔積液及肝性腦病；③肝功能分級為Child-Pugh A級。臨床分期采用第七版TNM和巴塞羅那BCLC分期系統，病理分級則采用Edmondson-Steiner分級法。隨訪資料均來自于本院隨訪科，截止到2014年11月1日止，死亡87例，所有入組患者中位總生存時間為 49.9個月。入組患者的詳細資料見表1。

1.2主要試劑和儀器

免疫組化用SPARCL1兔抗人多克隆抗體一抗，購自美國abcam公司；免疫組化用鼠/兔通用二抗及DAB顯色系統等均購自丹麥Dako公司。

1.3主要步驟及結果判定

免疫組化主要步驟：脫蠟和水化后，依次經3%過氧化氫10 min、檸檬酸緩沖液高壓修復抗原10 min。滴加SPARCL1一抗4 ℃過夜，室溫平衡至少1 h。滴加二抗后于37 ℃孵育30 min。PBS漂洗后經DAB顯色約3 min。雙蒸水漂洗4次后蘇木精復染1 min，風干后封片。

表1　SPARCL1表達水平與肝癌臨床病理資料的相關性/例

結果判定：為了避免人為偏倚，我們采用Vectra-Inform分析系統對免疫組化染色結果進行自動標準化評分。具體如下：完成染色后的免疫組化片首先用Nuance VIS-FL多譜成像系統進行拍照和儲存，然后用InForm 2.0.1軟件進行分析，經過預先訓練的InForm 2.0.1軟件不僅可以準確區分腫瘤組織、癌旁組織和空白等不同組織，而且可以區分細胞質和細胞核。選取腫瘤癌巢區域的細胞質為目的檢測范圍，應用InForm 2.0.1軟件對目的區域每百萬像素上的DAB染色進行強度計算并打分，求和，可得到每張免疫組化染色片上的DAB染色總分，根據軟件計算結果，以中位數為分界點，將肝癌患者分為SPARCL1陰性表達和陽性表達兩組。

1.4統計學處理

全部數據應用SPSS 19.0軟件進行分析，χ2檢驗分析SPARCL1表達水平與肝癌患者臨床病理資料的相關性；不同SPARCL1水平肝癌患者的生存曲線采用Kaplan-Meier方法繪制，Log-Rank檢驗用于比較生存曲線間的差異。P<0.05認為有統計學意義。

2結果

2.1SPARCL1在肝癌組織的表達情況

免疫組化的結果顯示，肝癌組織中的SPARCL1信號均定位于細胞質，而且其在不同肝癌組織中的表達水平存在差異，根據上述結果判定方法及InForm軟件評分可將患者分為陰性表達組和陽性表達組。

2.2SPARCL1表達水平與肝癌患者臨床病理資料的關系

根據上述分組方法將患者分為陰性組和陽性組，用卡方檢驗方法分析肝癌組織標本SPARCL1的表達水平與患者各項臨床病理指標的關系。結果顯示SPARCL1低表達與門脈癌栓、病理分化差、BCLC分期晚、TNM分期晚等惡性指標存在顯著負相關關系，而與性別、年齡及肝功能等指標無明顯相關性。

2.3肝癌組織SPARCL1表達水平與肝癌預后的關系

生存分析顯示，SPARCL1 陽性表達的肝癌患者其中位生存時間為118.7個月，而陰性表達患者僅為40.6個月，兩者之間差異具有統計學意義(圖1，P=0.002)。

圖1　SPARCL1表達水平與肝癌患者生存曲線圖

3討論

肝細胞癌是全球最常見的惡性腫瘤之一，其發病率和死亡率呈逐年上升趨勢[5]。近年來，盡管肝癌的診療手段已取得巨大進展，仍有超過一半的患者就診時已處于肝癌晚期而無法接受根治性治療，有機會行手術切除和肝移植治療的初診患者僅占30%左右。對于接受根治性手術治療的肝癌患者，由于復發和腫瘤轉移率高，其術后5年生存率也僅為50%左右[6-7]。因此深入探討肝癌發病機制，尋找與肝癌患者預后密切相關的分子標志物，對臨床工作中判斷肝癌患者的預后和進一步完善肝癌的治療將具有十分重要的意義。

SPARCL1是1個單拷貝基因,定位于人類染色體4q22-25區段，該區段已被發現在人類多種腫瘤中發生缺失，提示SPARCL1可能是該區段的重要抑癌基因之一[8-10]。Bendik等學者最早在非小細胞肺癌和腸癌腫瘤組織發現SPARCL1水平發生下調[11]；Hu等學者通過體外、體內實驗發現SPARCL1能抑制腸癌細胞的增殖、遷移和侵襲，并促進腸癌細胞發生間質-上皮轉化,并進一步地通過多中心的研究顯示SPARCL1與腸癌患者的良好預后有關[3]；Hurley等學者研究發現SPARCL1可通過與Ⅰ型膠原結合，阻斷RHOC途徑，從而抑制前列腺癌細胞的轉移，其表達水平與前列腺癌患者預后相關[4]。也有少量文獻報道SPARCL1可作為腫瘤相關的血管內皮細胞的一種標記物[12]。總之，SPARCL1在人類腫瘤中的作用尚有待進一步的研究。

我們通過免疫組化染色的方法發現在肝癌組織中，SPARCL1的信號均定位于胞質，而且，其水平在不同的肝癌組織中具有差異。根據InForm軟件評分進行分組和分析發現，SPARCL1的下調與門脈癌栓、病理分級高、BCLC分期晚、TNM分期晚等惡性臨床病理指標密切相關。進一步生存分析結果顯示SPARCL1陰性的肝癌患者，其生存時間顯著地低于SPARCL1陽性的患者(118.7個月vs 40.6個月;P=0.002)。本研究表明SPARCL1參與了肝癌的發生和發展，其表達水平發生下調與肝癌的侵襲性和惡性程度增加顯著相關，提示其具有腫瘤抑制的功能。同時，SPARCL1也是提示肝癌患者預后的標志物。

參考文獻

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(編輯：吳小紅)

Expression of SPARCL1 in Primary Hepatocellular Carcinoma and Its Clinical Significance

OUYANGHanyue,LEYong,ZHANGYongfa,etal.

CancerCenterofSunYat-senUniversity,Guangzhou,510060

【Abstract】ObjectiveTo explore the expression of SPARCL1 in resectable human hepatocellular carcinoma(HCC)and investigate the clinical role of SPARCL1 in HCC.Methods154 specimens of HCC patients after resection and their clinicopathological data were collected.The expression levels of SPARCL1 in tumor were detected by immunohistochemistry(IHC)method.ResultsThe expression level of SPARCL1 in different HCC tissues had difference,and negative expression level of SPARCL1 was closely correlated with portal vein tumor invasion,pathological differentiation,BCLC staging and TNM staging.The overall survival of patients with SPARCL1 negative expression was significantly shorter(40.6 months vs 118.7 months,P=0.002).ConclusionNegative expression of SPARCL1 predicts bad prognosis in HCC patients.

【Key words】SPARCL1;Hepatocellular Carcinoma;Prognosis

基金項目：國家自然科學基金項目(81272639)；高校基本科研基金項目(13ykzd24)；中山大學5010計劃項目(2007043)

通訊作者：石明

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.05.002

中圖分類號：R735.7

文獻標識碼：A

文章編號：1001-5930(2016)05-0701-03

(收稿日期2015-04-07修回日期 2016-03-15)