豬口蹄疫O型滅活疫苗不同組合免疫效果

許光勇，王朝軍，徐 利，盧紀和，趙曉旭，魯春剛，王林峰，蘇敬良，任曉明（.北京養豬育種中心，北京 0094；.中國農業大學動物醫學院，北京 009；.北京農學院動物科學技術學院，北京 006）

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豬口蹄疫O型滅活疫苗不同組合免疫效果

許光勇1，王朝軍1，徐 利1，盧紀和1，趙曉旭1，魯春剛1，王林峰1，蘇敬良2，任曉明3
（1.北京養豬育種中心，北京 100194；2.中國農業大學動物醫學院，北京 100193；3.北京農學院動物科學技術學院，北京 102206）

摘 要：試驗主要通過仔豬口蹄疫母源抗體消減規律來確定仔豬口蹄疫O型滅活疫苗首免日齡，選擇不同豬口蹄疫O型滅活疫苗進行組合免疫接種后，觀察其免疫抗體效價水平變化，從而評價不同疫苗組合的免疫效果，對養豬生產指導具有重要意義。

關鍵詞：O型口蹄疫；首免日齡；抗體效價；免疫效果；豬

口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒感染偶蹄動物，豬感染后以體溫升高，口腔黏膜、舌唇、鼻鏡、蹄肢及乳房皮膚發生水泡和潰爛為特征的一種急性、熱性、高度接觸傳染性疾病，且因其傳染性極強，故世界動物衛生組織（OIE）將其列為A類動物疫病，我國將其列為一類動物傳染病［1］。口蹄疫病毒共7個血清型，即O型、A型、亞洲Ⅰ型、南非1型、南非2型、南非3型和C型［2］，雖近兩年在我國偶有A型口蹄疫發生，但仍以O型口蹄疫為主要流行趨勢，因此防控重點應當放在O型口蹄疫。一旦豬場發生口蹄疫，造成損失主要表現在母豬流產和哺乳仔豬死亡。口蹄疫作為人畜共患病，確實對養殖業或人類健康造成威脅。當前，我國對豬口蹄疫預防與控制主要以疫苗免疫為主，結合隔離撲殺及生物安全建設為輔的綜合防控措施。對豬口蹄疫的防控，市場上有豬口蹄疫三價聯苗，但因其成本高，養豬業行情低迷不穩，故免疫O型口蹄疫滅活疫苗仍是主調。本試驗選用不同豬口蹄疫O型滅活疫苗進行組合，通過對抗體效價變化來評價不同組合的免疫效果，從而確定最優的免疫組合方式。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

前期選擇30頭26日齡斷奶仔豬，每窩2頭，共15窩；后期選擇120頭剛斷奶轉群的保育豬，每窩8頭，共15窩。試驗于北京養豬育種中心豬場完成。

1.2 試驗用疫苗與試劑盒

豬口蹄疫O型滅活疫苗（批號：4136049），記為疫苗I，由國內某公司提供；豬口蹄疫O型滅活疫苗（批號：5136005），記為疫苗II，由國內某公司提供；液相阻斷ELISA檢測試劑盒（批號：20150624101-1，20151016101-10），購自中國農業科學院蘭州獸醫研究所。

1.3 試驗處理

豬口蹄疫O型滅活疫苗首免時間確定試驗：挑選的30頭斷奶仔豬不免疫任何口蹄疫疫苗，分別于28日齡、35日齡、42日齡、49日齡、56日齡、63日齡和70日齡采血檢測口蹄疫O型抗體效價。

豬口蹄疫O型滅活疫苗不同組合免疫試驗：120頭保育豬平均分為（A～D）4組，于42日齡首次免疫豬口蹄疫O型滅活疫苗1 mL，四周后加強免疫一次2 mL。其處理如下。

A組：42日齡首次肌肉注射疫苗I，劑量1 mL；70日齡再次免疫疫苗I，劑量2 mL。B組：42日齡首次肌肉注射疫苗I，劑量1 mL；70日齡再次免疫疫苗II，劑量2 mL。C組：42日齡首次肌肉注射疫苗II，劑量1 mL；70日齡再次免疫疫苗I，劑量2 mL。D組：42日齡首次肌肉注射疫苗II，劑量1 mL；70日齡再次免疫疫苗II，劑量2 mL。A-D組分別于首免前1 d、首免后21 d、二免后21 d、二免后42 d和二免后90 d采血檢測口蹄疫O型抗體效價并觀察過敏反應。

1.4 試驗方法

口蹄疫O型抗體效價測定均采用液相阻斷ELISA檢測試劑盒（LB-ELISA），具體操作完全按照試劑盒說明書進行。

2 數據統計與分析

檢測結果數據用EXCEL進行統計分析處理。

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3 試驗結果

試驗日期：2015年7月6日至2015年8月19日（第1階段）；2015年8月26日至2015年12月24日（第2階段）。

2015年7月6日從15窩中挑選30頭26日齡斷奶仔豬，每窩2頭，編號為N1-N30。該30頭試驗仔豬不免疫任何口蹄疫疫苗，分別于28、35、42、49、56、63和70日齡采血檢測口蹄疫O型抗體效價，試驗期間未出現死亡，其檢測結果統計如表1。

該試驗場母豬群免疫口蹄疫O型滅活疫苗，每年3次，劑量2 mL/頭。由表1可知，仔豬口蹄疫O型母源抗體隨時間推移呈現下降趨勢，在42日齡時合格率降至50%，63日齡以后母源抗體完全消失。依照仔豬口蹄疫O型母源抗體變化情況，42日齡確定為口蹄疫O型滅活疫苗首次免疫時間。

2015年8月10日挑選120頭斷奶仔豬，每窩8頭，共15窩，平均分為4組，分別編號為A1-A30、B1-B30、C1-C30和D1-D30，于2015年8月27日仔豬42日齡首次免疫口蹄疫O型滅活疫苗1 mL，4周后二免2 mL，疫苗具體組合使用見上述試驗處理部分。分別于首免前1 d、首免后21 d、二免后21 d、二免后42 d和90 d采血檢測口蹄疫O型抗體效價，免疫疫苗后試驗豬只未出現過敏反應。A-D組試驗豬口蹄疫O型抗體效價結果見表2～表5。

表1 仔豬口蹄疫O型母源抗體效價變化情況

試驗過程中A組死亡1頭，2頭由于溶血棄用。由表2可知，仔豬在42日齡和70日齡注射疫苗I后，其口蹄疫O型抗體水平并未上升，口蹄疫抗體合格率較低，免疫效果不佳。

試驗過程中B組死亡1頭，1頭由于血樣溶血棄用。由表3可知，仔豬在42日齡注射疫苗I后21 d，其口蹄疫抗體合格率僅有35.71%；70日齡再次注射疫苗II后21 d，其口蹄疫抗體合格率明顯上升，但到130日齡后合格率有所下降。

由表4結果可知，仔豬在42日齡注射疫苗II后21 d，其口蹄疫抗體合格率僅有26.67%；70日齡再次注射疫苗I后21 d，其口蹄疫抗體合格率有所上升，但到130日齡左右時合格率僅為26.67%。

表2 A組仔豬注射疫苗前后抗體效價

4 討論

口蹄疫O型滅活疫苗首免時間確定試驗階段，所選30頭斷奶試驗仔豬未注射免疫任何口蹄疫疫苗，基礎母豬群采取每年3次普免方式，所用疫苗為疫苗II。斷奶仔豬在未免疫任何口蹄疫疫苗條件下，其口蹄疫母源抗體呈現下降趨勢，在42日齡時口蹄疫O型母源抗體合格率下降至50%，在63日齡口蹄疫O型母源抗體完全消失，說明口蹄疫O型母源抗體最長可持續九周時間，并確定口蹄疫O型滅活疫苗首免時間為42日齡。該階段試驗能夠科學準確地知道仔豬口蹄疫O型母源抗體效價水平和消長變化規律，即可避免首次免疫口蹄疫疫苗時間過早，使疫苗與母源抗體相互抵消，降低疫苗免疫效果，又能避免首次免疫時間過晚，出現免疫空白期，給豬群帶來感染風險。該階段試驗為口蹄疫免疫程序制定或優化提供科學有效的理論依據。

待首免時間確定后，采用不同疫苗組合進行注射免疫，注射不同試驗疫苗均未出現任何應激。從結果發現，A組2次均采用疫苗I注射免疫后，其抗體合格率不理想，無論是在首次免疫還是二免后，抗體效價都未得到提高，反而呈現逐步下降趨勢。B組首次注射疫苗I后，其抗體合格率有所下降，然后注射疫苗II后，抗體效價明顯上升，抗體合格率也明顯提高，二免后90 d抗體效價和抗體合格率均下降。C組首次注射疫苗II后，抗體效價下降，抗體合格率降低至26.67%，4周后注射疫苗I后，雖然抗體合格率有所升高，但仍不理想。D組首次注射疫苗II后，抗體效價同樣下降，抗體合格率為31.03%，再次注射疫苗II后，其抗體效價和抗體合格率逐步升高，并于二免后42 d達到79.31%，但在二免后90 d卻降至41.38%。

表3 B組仔豬注射疫苗前后抗體效價

表4 C組仔豬注射疫苗前后抗體效價

表5 D組仔豬注射疫苗前后抗體效價

A-D組首免前抗體合格率維持在相同水平，通過A組和B組比較，二免分別選擇不同疫苗，疫苗II二免后21 d抗體合格率高達78.75%，而疫苗I二免后21 d抗體合格率僅有14.81%，差異顯著，說明在加強免疫時，疫苗II的效果是好于疫苗I的。C組和D組比較，首次免疫均選擇疫苗II，而二免選擇不同疫苗，同樣發現二免疫苗II效果優于疫苗I，且二免選擇疫苗I其抗體合格率呈現下降趨勢，在二免后90 d抗體合格率分別為26.67%和41.38%，差異顯著。通過A組和C組比較，二免疫苗相同，首免疫苗分別為疫苗I和II，首免后21 d疫苗I和II免疫抗體合格率分別為33.33% 和26.67%。B組和D組比較，首免后21 d疫苗I和II免疫抗體合格率分別為35.71%和31.03%。另外，無論是何種組合免疫，在二免后90 d（約130日齡）其抗體效價和抗體合格率均處于較低水平。由此可見，首次免疫選擇疫苗I效果更佳，出現這樣結果極有可能是因為疫苗II中抗原含量比疫苗I中抗原含量要高，首次免疫時更大程度上中和了一部分母源抗體的結果，而四周后加強免疫所受母源抗體干擾較小，且后期飼養周期長，故疫苗II更適于加強免疫。

5 結論

通過不同試驗組結果對比可知，首次免疫可以選擇疫苗I或降低疫苗II免疫注射劑量，但是結合豬場成本考慮，首次免疫應該是選擇疫苗I最佳，因為疫苗I為零成本疫苗；而4周后加強免疫可選擇疫苗II接種。綜合分析A-D組得知，B組免疫效果應該是最佳的。

參考文獻

［1］ 許光勇，徐利，盧紀和，等.豬口蹄疫三價滅活疫苗免疫效果觀察［J］.養豬，2013（5）：110-112.

［2］ 謝慶閣.口蹄疫［M］.北京：中國農業出版社，2004：13-15.

基金項目：北京三元種業科技股份有限公司自立課題（課題編號SYZYZ20150005）

作者簡介：許光勇，男，江西金溪人，獸醫師，在讀博士研究生，主要從事規模化豬場生產管理和豬病防控研究。E-mail：vetbbsc@163.com

收稿日期：（2016-01-19）