CRISPR/Cas9介導靶向敲除擬南芥GGB基因突變體的鑒定

雷建峰，徐新霞，李　月，代培紅，劉　超，劉曉東*

(1新疆農業大學 農學院，新疆農業大學農業生物技術重點實驗室，烏魯木齊830052；2新疆巴州農業技術推廣中心，新疆庫爾勒841000)

CRISPR/Cas9介導靶向敲除擬南芥GGB基因突變體的鑒定

雷建峰1，徐新霞2，李月1，代培紅1，劉超1，劉曉東1*

(1新疆農業大學 農學院，新疆農業大學農業生物技術重點實驗室，烏魯木齊830052；2新疆巴州農業技術推廣中心，新疆庫爾勒841000)

摘要:GGB是抗旱負調控基因。為了獲得擬南芥ggb突變體材料，構建了以擬南芥U6啟動子驅動GGB sgRNA的CRISPR/Cas9基因組編輯載體。將構建好的編輯載體利用農桿菌介導的浸花法轉化野生型擬南芥。對轉基因后代GGB基因的測序結果分析發現，在靶位點處有缺失4個堿基和增加1個T堿基的2種突變體產生。分別對野生型擬南芥和上述2種ggb突變體進行半定量RT-PCR分析結果顯示，突變體材料中幾乎檢測不到GGB基因表達，說明獲得了GGB基因敲除突變體。對野生型和ggb突變體葉片失水率、耐旱表型及單株種子量的測定結果表明，與野生型相比，擬南芥GGB基因突變后，葉片失水率顯著減少，抗旱性明顯增強，而單株種子量卻并沒有改變。研究表明，GGB是一種理想的作物分子育種的候選靶基因，獲得的突變體為今后從農作物中克隆的GGB同源基因進行功能互補驗證提供了有用的遺傳材料。

關鍵詞:擬南芥；CRISPR/Cas9；GGB；基因敲除；失水率

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