黃瓜CsERECTA基因的原核表達及其多克隆抗體制備

王琪琦，李玉紅*，胡亮亮，秦亞光，趙子瑤，陳　鵬

(1 西北農(nóng)林科技大學 園藝學院，陜西楊陵 712100；2 西北農(nóng)林科技大學 生命科學學院，陜西楊陵 712100)

黃瓜CsERECTA基因的原核表達及其多克隆抗體制備

王琪琦1，李玉紅1*，胡亮亮1，秦亞光1，趙子瑤1，陳鵬2

(1 西北農(nóng)林科技大學 園藝學院，陜西楊陵 712100；2 西北農(nóng)林科技大學 生命科學學院，陜西楊陵 712100)

摘要:ERECTA基因編碼一個富含亮氨酸重復序列結(jié)構(gòu)的絲/蘇氨酸類受體蛋白激酶，參與調(diào)控植物器官的形態(tài)建成，在株型控制及抗逆方面也有重要作用。該研究通過構(gòu)建帶有maltose binding protein(MBP)標簽的pET21a-CsERECTA融合蛋白原核表達載體，實現(xiàn)了在大腸桿菌(E. coli )BL21(DE3)中的高效表達，并對誘導表達的溫度、時間和IPTG濃度進行了優(yōu)化。利用鎳離子螯合層析純化得到MBP-CsERECTA融合蛋白，再用rTEV蛋白酶對其進行酶切，得到CsERECTA蛋白并制備了該蛋白的多克隆抗體。結(jié)果表明，黃瓜CsERECTA蛋白以可溶和包涵體 2 種形式表達，低溫有助于蛋白以可溶性形式大量存在。最佳誘導溫度為23 ℃，誘導時間為6 h，IPTG濃度為0.5 mmol·L-1。通過Western blot可檢測到黃瓜內(nèi)源的CsERECTA蛋白，說明制備的多可隆抗體具有較好的特異性。多克隆抗體的成功制備為進一步研究CsERECTA的功能奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞:黃瓜；CsERECTA基因；原核表達；多克隆抗體

ERECTA是一個編碼富含亮氨酸重復序列的類受體蛋白激酶基因[1]。植物ERECTA基因控制著植株生長發(fā)育的多個方面，比如地上部分器官的伸長、葉的生長、花序的發(fā)育和表皮的分化等[2]。由于ERECTA突變體是在Landsberg背景的擬南芥中發(fā)現(xiàn)的，其具有矮生的特性，便于培養(yǎng)和操作，因此目前常用作突變體分析和自然變異分析的背景材料[1]。……