欖綠粗葉木水提物體外抗菌效果的初步探討

謝永華 王冠明 吳梅姐 溫揚敏

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欖綠粗葉木水提物體外抗菌效果的初步探討

謝永華 王冠明 吳梅姐 溫揚敏

【摘 要】目的：欖綠粗葉木水提物的體外抑菌活性。方法：運用藥敏實驗和最小抑菌濃度（MIC）檢測法測定金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、枯草牙胞桿菌、銅綠假單胞菌和大腸桿菌的抑菌直徑和MIC值。結果：金黃色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌對水提物高敏感，枯草牙胞桿菌為中敏感，而銅綠假單胞菌為低敏感。水提物對以上四種細菌的MIC分別為12.5mg/ml、12.5mg/ml、50mg/ml、100mg/ml。結論：欖綠粗葉木水提物對其中4種細菌有不同程度的抑菌效果。

【關鍵詞】欖綠粗葉木 水提物 藥敏實驗 MIC

作者單位：泉州醫(yī)學高等?？茖W校 泉州 362000

2015-12-11收稿，2016-01-07修回

欖綠粗葉木屬于茜草科、粗葉木屬的日本粗葉木的變種，為我國所特有的一種植物，主要產(chǎn)于江蘇、浙江、福建和貴州等地。有研究表明可以從粗葉木屬植物的根、莖中分離一些可以抗腫瘤與抗炎等效果的活性物質(zhì)。徐斌等研究表明羅浮粗葉木含有保護肝臟損傷的有效成分［1］。溫揚敏等研究證明欖綠粗葉木具有體外抑制人食管癌細胞增殖的作用［2］。欖綠粗葉木生命力強，且資源豐富。然而針對欖綠粗葉木的藥理研究的相關文獻很少。本次試驗擬對欖綠粗葉木的抗菌效果進行初步評價，為其生物學特性和臨床應用積累一些基礎研究資料。

1　材料與方法

1.1材料與設備 欖綠粗葉木購于福建省三明市寧化縣草藥市場，并經(jīng)泉州市林業(yè)局原動植物高級管理員林彥云先生鑒定。金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、枯草牙胞桿菌、銅綠假單胞菌和大腸桿菌購于上海川翔生物科技有限公司，LB固體培養(yǎng)基、LB液體培養(yǎng)基干、一次性細菌培養(yǎng)皿（上海生工），電熱恒溫培養(yǎng)箱，多功能粉碎機，冷凍干燥機（上海精宏），紫外分光光度計（島津）。

1.2實驗方法

1.2.1水提物的制備 欖綠粗葉藥材用中藥粉碎機粉碎后，稱取100g放入燒瓶，加5倍量蒸餾水。浸泡30min后，加熱煮沸1h，濾紙過濾。旋轉蒸發(fā)，濃縮，真空干燥至粉末，放置于冰箱中4℃保存。

1.2.2菌種的活化與菌液的制備［3］將供試菌種分別移接于相應的斜面培養(yǎng)基活化，37℃培養(yǎng)24h。將活化好的細菌，分別挑取單個菌落轉接于生理鹽水中制成細菌懸液。然后用0.5號麥氏比濁管作為標準，將每種菌液稀釋至1×108個/ml，作為實驗菌液備用。

1.2.3藥敏試紙片的制備 用定性濾紙做成5mm直徑的圓形濾紙片，高壓滅菌后烘干備用。稱取欖綠粗葉木水提物干粉，用無菌ddH2O配制成濃度分別有90mg/ml的水溶液，用0.22μm無菌濾膜過濾除菌。然后將無菌圓形濾紙片放入欖綠粗葉木水提物樣品溶液浸泡1h后，取出烘干。

1.2.4藥物敏感性實驗［4］無菌吸取方法1.2.2制作的各種細菌液體100μl放入無菌平皿中，再加入45℃的無菌固體培養(yǎng)基約10ml，混勻后置于水平無菌工作臺上冷卻，制作成含有相應細菌的平板。將方法1.2.3制作的藥敏試紙片貼于平板上，每個藥敏試紙間的間距≥20mm，并設陰性對照組。實驗平板置于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h。測定抑菌圈的大小。

結果評判標準：抑菌圈直徑為6～10mm為低敏感；抑菌圈直徑為11～15mm為中敏感；抑菌圈直徑為16～20mm為高敏感。

1.2.5最小抑菌濃度（MIC）的測定［5］制作含欖綠粗葉木水提物濃度分別為400、200、100、50、25、12.5mg/ml的細菌液體培養(yǎng)基。不同藥物濃度的細菌培養(yǎng)基分別接種一種細菌，于37℃培養(yǎng) 24h。不接種細菌的各藥物濃度的細菌培養(yǎng)基作為細菌空白對照組。各實驗組和空白對照組的培養(yǎng)液用紫外分光光度計測定吸光值。根據(jù)兩者的吸光值判斷欖綠粗葉木水提物的最小抑菌濃度（MIC）。

2　結 果

2.1藥物敏感性實驗結果 欖綠粗葉木水提物的抑菌效果見表1。結果表明，金黃色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌對欖綠粗葉木水提物高敏感，枯草牙胞桿菌對水提物中敏感，銅綠假單胞菌對其低敏感，而對大腸桿菌無抑制效果。

表1　欖綠粗葉木水提物的藥敏實驗

2.2欖綠粗葉木水提物的最低抑菌濃度（MIC） 欖綠粗葉木水提物的MIC的檢測結果見表2。欖綠粗葉木水提物對金黃色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌的 MIC 為12.5mg/ml， 顯示了欖綠粗葉木水提物對這兩種細菌有較好的抑制效果。對枯草牙胞桿菌的MIC為50mg/ml；對銅綠假單胞菌的MIC為100mg/ml；對大腸桿菌的MIC為400mg/ml。這一實驗結果可以和藥物敏感性實驗結果相吻合。

表2　欖綠粗葉木水提物的MIC值

3　討 論

粗葉木屬植物主要分布于我國南方各省?！缎氯A本草綱要》記載粗葉木植物在我國民間被用來治療“濕熱黃疸”［6］。文獻報道福建寧化縣治平畬族鄉(xiāng)當?shù)厝罕妼⒘_浮粗葉木植物用來治療黃疸并消除患者的疲勞乏力等癥狀［7］。《全國中草藥匯編》記載粗葉木屬植物具有祛風勝濕、行氣活血、強筋健骨等功效。欖綠粗葉木是一個變種的粗葉木屬植物，故推測其可能具有一定的抗炎藥效。

金黃色葡萄球菌是常見的臨床致病菌之一，可引起化膿感染。肺炎克雷伯菌是院內(nèi)感染敗血癥中的一種重要病原菌。由于抗生素的大量使用，已使得部分細菌發(fā)生變異進而誘發(fā)其耐藥性的產(chǎn)生。研究人員發(fā)現(xiàn)了一種具有多重耐藥性的肺炎克雷伯菌，可以有效地分解抗生素，致使感染患者抵抗力低［8］。為此，運用中草藥為尋找抗生素的替代藥物開辟一條新的途徑。本研究表明欖綠粗葉木水提物對金黃色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌具有較好的抑菌活性。

參考文獻

1 徐斌，謝志春，林新勤，等.羅浮粗葉木醇提物治療鴨乙型肝炎的實驗研究［J］.現(xiàn)代預防醫(yī)學，2010，37（14）：2710～2712.

2 溫揚敏，萬端靜，謝永華，等.欖綠粗葉木莖甲醇提取物對人食管癌EC-9706細胞增殖的影響及其機制探討［J］.山東醫(yī)藥，2015，55（40）：11～13.

3 盧添林，黃夢姣，程悅，等.普洱茶水提物體外抑菌效果研究［J］.現(xiàn)代預防醫(yī)學，2015，42（2）：313～315.

4 張雁，李健雄，丘銀清，等.苦瓜水提物抑菌作用的初步探討［J］.食品工業(yè)科技，2009，12（29）：104～105.

5 姚淑敏.蘆薈提取物抑菌作用的研究［J］.食品科學，2002，23（4）：137～139.

6 胡恩，陳清容，陳坤全.治療黃疸的民間良藥黃痧藥［J］.中國民間療法，2006，2（14）：33.

7 陳坤全，胡恩，陳清容.關于福建寧化黃痧藥原植物的研究［J］.海峽藥學，2005，17（4）：103～104.

8 劉婧嫻，俞靜，劉瑛.產(chǎn)碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐藥基因及流行病學研究進展［J］.中國感染與化療雜志，2015，15（1）：91～96.

/（編審：張善堂）

Antimicrobial effect of aqueous extract from lasianthus lancilimbus in vitro

Quanzhou Medical College，Quanzhou 362000，China
XIE Yong-hua，WANG Guan-ming，WU Mei-jie，et al

Abstract:Objective:To study the antimicrobial effect of aqueous extract from lasianthus lancilimbus in vitro. Methods:The antimicrobial activity and MIC of Staphylococcus aureus，Klebsiella pneumoniae，Bacillus subtilis，Pseudomonas aeruginosa and Escherichia coli were determined by drug sensitive test and minimal inhibitory concentration（MIC）.Results:Staphylococcus aureus and Klebsiella pneumoniae were highly sensitive to aqueous extract，Bacillus subtilis was sensitive，while Pseudomonas aeruginosa was low sensitive， which MICs were 12.5mg/ mL，12.5mg/ml，50mg/ml and100mg/ml respectively.Conclusions:aqueous extract of lasianthus lancilimbus can inhibit the above 4 kinds of bacteria in vitro.

Key Words:Lasianthus lancilimbus；Aqueous extract；Drug sensitive test；MIC

【中圖分類號】R285

【文獻標識碼】A

【文章編號】1671-8054（2016）02-0145-02

基金項目：泉州市科技計劃重點項目（編號：2013Z112）

作者簡介：謝永華，男，碩士研究生