尼莫司汀對三四期宮頸癌患者腫瘤組織中P53及SOX17表達的影響

侯麗紅，曹芳蕾，王愛娟

(1.錦州醫科大學附屬第三醫院 手術室，遼寧 錦州 121000；2.錦州醫科大學附屬第三醫院 婦科，遼寧 錦州 121000)

尼莫司汀對三四期宮頸癌患者腫瘤組織中P53及SOX17表達的影響

侯麗紅1Δ，曹芳蕾2，王愛娟2

(1.錦州醫科大學附屬第三醫院 手術室，遼寧 錦州 121000；2.錦州醫科大學附屬第三醫院 婦科，遼寧 錦州 121000)

目的 探究尼莫司汀對三四期宮頸癌患者腫瘤組織中P53及SOX17表達影響。方法 錦州醫科大學附屬第三醫院腫瘤科收治的三四期宮頸癌患者74例，根據隨機對照表分為對照組和治療組，其中治療組37例，對照組37例，2組患者入院后均進行常規入院檢查，實施常規治療；對照組基于每周期第1天吉西他濱1000 mg/m2靜脈滴注、順鉑75 mg/m2靜脈滴注，第8天給予吉西他濱1000 mg/m2靜脈滴注；試驗組在對照組的基礎上于第1、3、5周期的第1天給予注射用鹽酸尼莫司汀2～3 mg/kg。2組均以21 d為1個周期，重復6個周期。治療結束后對比分析2組臨床療效、腫瘤組織P53及SOX17表達情況、不良反應發生率以及隨訪復發率和死亡率。結果 試驗組總有效率為89.19%，顯著高于對照組的64.86% (P<0.05)，治療后與對照組相比，試驗組P53以及SOX17陽性表達率較高(P<0.05)。2組不良反應發率相比，差異無統計學意義；1年后隨訪試驗組復發率13.51%，死亡率5.41%；對照組復發率35.14%，死亡率21.62%，與對照組相比，試驗組復發率以及死亡率較低(P<0.05)。結論 尼莫司汀對三四期宮頸癌患者組織中P53及SOX17的基因表達具有調控作用，能夠抑制癌細胞的浸潤和轉移，改善臨床療效與預后，延長患者生存時間。

尼莫司汀；三四期宮頸癌；P53；SOX17

現代研究顯示，全球范圍內宮頸癌的年發病例高達50萬[1]，其中我國的年新增病例約為14萬。宮頸癌是臨床最常見的女性惡性腫瘤疾病，是我國惡性腫瘤導致女性死亡的主要原因[2]，尤其是宮頸癌三四期患者臨床用藥療效不佳，預后差。宮頸病變常導致宮頸上皮內瘤變再轉化為宮頸癌，這期間大約經過十余年，這十余年期間宮頸癌的癌前病變是能夠預防和治療的[3]。近年來研究顯示，宮頸癌患者呈年輕化趨勢，患病比例增高[4]，因此，針對宮頸癌深入了解其發病機制和運用靈敏有效的檢測手段刻不容緩。尼莫司汀是一種臨床常用抗癌藥物，可以通過細胞內DNA的烷化，促使DNA低分子化，從而到達抑制DNA合成的目的[5]，臨床應用于腦腫瘤、消化道癌、肺癌以及惡性淋巴瘤的治療。曾有研究顯示，P53以及SOX17蛋白表達與宮頸癌的生物學行為和癌癥預后有緊密聯系，宮頸癌患者SOX17的表達率遠低于正常宮頸組織[6]，宮頸癌組織p53陽性表達顯著上調[7]。因此本實驗就尼莫司汀對三四期宮頸癌患者組織中P53及SOX17表達影響進行研究分析，為闡明尼莫司汀在三四期宮頸癌臨床治療中的價值提供輔助依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2014年6月～2015年6月錦州醫科大學附屬第三醫院腫瘤科收治三四期宮頸癌患者74例，年齡 24～58歲，平均年齡(40.39±4.63)歲，其中腺癌37例，鱗狀上皮癌58例，腺癌10例，其余6例；三期宮頸癌患者55例，四期宮頸癌患者19；腫瘤分化程度G1、G2、G3分為是34例、24例、16例。采用隨機數字分配法，隨機分配為試驗組與對照組，其中試驗組37例，年齡25～58歲，平均年齡(41.09±4.62)歲，腺癌19例，鱗狀上皮癌11例，腺癌6例，其余1例；三期宮頸癌患者28例，四期宮頸癌患者9；腫瘤分化程度G1、G2、G3分為是17例、11例、9例；對照組37例，年齡24～56歲，平均年齡(39.69±4.51)歲，腺癌18例，鱗狀上皮癌10例，腺癌4例，其余5例；三期宮頸癌患者27例，四期宮頸癌患者10；腫瘤分化程度G1、G2、G3分為是17例、13例、7例。2組患者年齡、疾病分期和疾病類型等一般資料均相仿，差異無統計學意義，具有可比性。

納入標準：診斷符合《2011年NCCN宮頸癌臨床實踐指南》[8]中宮頸癌的診斷標準：①患者出現陰道排液、陰道出血、尿頻、便秘、下肢腫痛和貧血等癥狀；②其中三期宮頸癌細胞侵犯到陰道的下1/3，甚至侵犯骨盆腔，患者常出現雙腎積水；四期癌細胞侵犯生殖器官，癌播散超過真骨盆，甚至侵潤膀胱黏膜和直腸黏膜，嚴重者發生遠程轉移，出現惡病質；③經宮頸刮片以及陰道鏡檢查等實驗室檢查證實為宮頸癌；患者年齡均>18歲，為自愿參與本研究，并由本人簽署知情同意書。

排除標準：①曾接受免疫抑制劑治療的患者，近1個月實施重大手術患者；既往內分泌史，營養狀態差，消耗性疾病患者；②對輸液以及術中用藥產生特異性反應，導致過敏性休克或心肺功能抑制的患者；③傳染血源性肝炎、艾滋病以及其他血液傳染性疾病，嚴重心、肝、腎等多臟器功能異常，合并其他惡性腫瘤、神經系統疾病。

1.2 方法

1.2.1 治療方法：2組患者入院后均進行常規入院檢查，實施維持電解質平衡、抗病毒、吸氧等常規治療，對照組給予每周期第1天注射用鹽酸吉西他濱(國藥準字H20123341，山東羅欣藥業股份有限公司)1000 mg/m2靜脈滴注、順鉑注射液(國藥準字H20030675，南京制藥廠有限公司)75 mg/m2靜脈滴注，第8天給予注射用鹽酸吉西他濱1000 mg/m2靜脈滴注；試驗組在對照組的基礎上于第1、3、5周期的第1天給予注射用鹽酸尼莫司汀(國藥準字H20059251，海南通用康力制藥有限公司)2～3 mg/kg。2組均21 d/周期，重復6個周期。若病情進展或患者發生嚴重副反應，醫護人員適量給予止吐藥物以及注射用重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(國藥準字S20003015，上海海濟醫藥生物工程有限公司)。

1.2.2 觀察指標

①療效判定按參考文獻《實體瘤療效評價標準(RECIST)指南》[9]的方法進行評價，完全緩解(complete remission，CR)為治療后觀察病灶均完全消失，患者陰道排液、出血、尿頻、便秘、下肢腫痛和貧血等癥狀均消失；部分緩解率(partial remission ，PR)為治療后病灶最大直徑之和至少降低≥50%維持4 w，患者臨床癥狀均顯著改善；穩定(steady disease，SD)為病灶最大直徑之和至少降低30%～50%維持4 w，患者臨床癥狀部分緩解；疾病進展(progression of disease ，PD)為臨床癥狀和體征無改善或惡化?？傆行?完全緩解率+部分緩解率率+穩定率。

②患者均取腫瘤組織進行活檢，實施熒光定量RT-PCR法進行對各個患者組織內P53及SOX17 mRNA的表達進行檢測，制作細胞蠟塊，進行脫水以及石蠟包埋處理。采用由上海滬震實業有限公司提供的濃縮型兔抗人P53及SOX17多克隆抗體以及由深圳子科生物科技有限公司提供的二步法免疫組化廣譜檢測試劑盒，免疫組織化學法染色，選擇2組的陽性和陰性組織相，采用XSP-63XDV倒置熒光顯微鏡進行200倍和400倍的顯微照相，閱片醫師對制成的免疫組化片結果進行判讀，尋找染色清晰、陽性細胞分布廣的區域，并于每張切片中隨機選擇5個不同視野，每個視野內不低于200個細胞數，按照顯示的陽性細胞占有率以及著色深淺程度進行結果判定。其中陽細胞占有率低于5%標記為0分，陽細胞占有率5%～25%標記為1分，陽細胞占有率26%～50%標記為2分，陽細胞占有率51%～75%標記為3分，陽細胞占有率超過75%標記為4分。

③實驗中陰性對照為陰性，陽性對照為陽性時，證實檢測結果可信。陽性：腫瘤細胞內存在強的顆粒狀包漿染色，呈棕黃或紫藍色染色，并排除已知染色因素，具體分為以下幾種：巨噬細胞內顏色較淡的胞漿點狀染色；神經來源細胞，如神經細胞以及神經節細胞；腺狀上皮染色以及浸潤的淋巴細胞；排除出現正常黏膜內以及壞死組織區域的背景染色。陰性：腫瘤內未發現強的顆粒狀胞漿染色。按照視野內顯示的染色程度進行評分：陰性為0分，顏色顯示為淡黃色或藍色為1分，中度黃色或藍色染色為2分，顯示為棕黃或紫藍色染色標記為3分?？傇u分=陽性細胞數分值×染色強弱分值，其中總分低于1分為陰性表達(-)，≥1分為陽性表達(+)。

④患者治療后6個月隨訪，囑其回醫院進行復診并記錄復發例數并計算復發率，計算死亡率，即死亡患者占總人數的比例。

⑤不良反應事件參考《國際腫瘤化療藥物不良反應評價系統——通用不良反應術語標準4.0版》[10]進行評定。

2 結果

2.1 臨床療效 試驗組總有效率為89.19%，顯著高于對照組的64.86%，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組患者療效比較[n(%)]

*P<0.05，與對照組比較，compared with control group

2.2 三四期宮頸癌組織中P53以及SOX17的表達 治療后與對照組相比，試驗組P53以及SOX17陽性表達率較高(P<0.05)。見表2、圖1。

表2 2組患者P53以及SOX17半定量判定結果[n(%)]

*P<0.05，與對照組比較，compared with control group

圖1 三四期宮頸癌患者腫瘤組織中P53及SOX17的蛋白表達(×400)Fig.1 Expressions of P53 and SOX17 in patients with cervical carcinoma stage Ⅲ-Ⅳ(×400)

2.3 安全性以及預后評價 試驗組白細胞減少3例，血小板減少2例，貧血1例，惡心嘔吐4例，頭暈1例，總不良反應發生率為29.73%(11/37)；對照組白細胞減少2例，血小板減少2例，貧血3例，惡心嘔吐6例，頭暈3例，總不良反應發生率為43.24%(16/37)；2組不良反應率相比，差異無統計學意義。

1年后隨訪試驗組復發率13.51%(5/37)，死亡率5.41%(2/37)；對照組復發率35.14%(13/37)，死亡率21.62%(8/37)，與對照組相比，試驗組復發率以及死亡率較低(P<0.05)。

3 討論

我國女性宮頸癌的患病率僅次于智利等宮頸癌高發國家的患病率[11]。文獻報道以及臨床研究等對于宮頸癌的發病原因尚未明確，這造成了本病治療的困難性，臨床針對于早期宮頸癌患者采用手術切除加化療的方法，但針對于三四期宮頸癌無有效治療方案，此階段的患者均存在轉移，更多醫療人員選擇化療以改善臨床癥狀，延長生存期。尼莫司汀是一種嘧啶亞硝脲類抗腫瘤藥物，曾有研究人員[12]通過對腦膠質瘤小鼠，進行研究發現尼莫司汀對小鼠腦膠質瘤具有很廣的抗腫瘤譜；此外對宮頸癌小鼠進行實驗研究發現，尼莫司汀的抗腫瘤活性較強[13]，有延長生存時間效果。本研究顯示，試驗組總有效率為89.19%，顯著高于對照組的64.86% (P<0.05)；與對照組相比，試驗組復發率以及死亡率較低(P<0.05)。能夠客觀反映患者治療結束后，尼莫司汀有效改善三四期宮頸癌患者預后，在疾病控制方面明顯優于常規治療，明顯改善預后，延長患者的生存期。

P53基因是一種臨床常用的人體抑癌基因，可以預防腫瘤細胞突變轉移，還能夠促進正常細胞基因的修復，并參與機體內許多健康信號的傳遞。一旦機體出現細胞損傷，P53蛋白即立刻參與細胞的修復。現代研究顯示，P53陽性表達療效明顯高于陰性表達者，證實此基因與癌癥的發生發展具有重要的監測作用[14]。SOX17基因是SOX基因家族重要一員，參與各種生物細胞發育以及生物活性過程，其在血管生成、胚胎內胚層構成和干細胞分化調控等方面具有重要作用，SOX17基因于癌變過程中仍具有關鍵作用。在機體不同基因來源中，SOX17可受啟動子區甲基化的影響，使基因于此組織內表達減低，喪失其抑癌基因的功能，加速癌變的發生。在大部分宮頸癌組織內SOX17基因處于甲基化狀態，并與宮頸癌分化程度以及淋巴結轉移具有相關性[15]。曾有研究顯示[16]，宮頸癌中DNA甲基化促使乳腺癌細胞SOX17基因表達受抑制，對宮頸癌的預后判斷具有重要意義。本研究顯示，治療后與對照組相比，試驗組P53以及SOX17陽性表達率較高(P<0.05)，陰性表達率較低(P<0.05)。本實驗應用免疫組織化學法進行P53以及SOX17測試，結果表明證實尼莫司汀對三四期宮頸癌患者組織中P53及SOX17的基因表達具有調控作用，抑制腫瘤細胞DNA的復制作用。

本研究通過對本院腫瘤科收治三四期宮頸癌患者74例的病理染色臨床療效、P53及SOX17表達情況、不良反應發生率以及隨訪復發率和死亡率進行研究，證實了尼莫司汀對三四期宮頸癌患者組織中P53及SOX17的基因表達具有調控作用，能夠抑制癌細胞的侵潤和轉移，改善臨床療效與預后，對患者延長生存更有價值。

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(編校：王儼儼)

Effect of nimustine on tumor tissue P53 and SOX17 expressions in treating cervical carcinoma stage Ⅲ-Ⅳ

HOU Li-hong1Δ, CAO Fang-lei2, WANG Ai-juan2

(1.Operation Room, The Third Affiliated Hospital of Jinzhou Medical University, Jinzhou 121000, China; 2.Department of Gynecology, The Third Affiliated Hospital of Jinzhou Medical University, Jinzhou 121000, China)

ObjectiveTo investigate the effects of nimustine on tumor tissue P53 and SOX17 expressions in the treatment of patients with cervical carcinoma stage Ⅲ-Ⅳ.MethodsA total of 74 cases with cervical carcinoma stage Ⅲ-Ⅳ were collected and randomly divided into experimental group and control group with 37 cases in each group.Patients in both two groups were given regular examination and conventional treatment; patients in control group based on each cycle were given d1 gemcitabine 1000 mg/m2intravenous drip，cisplatin 75 mg/m2intravenous drip，d8 gemcitabine 1000 mg/m2intravenous drip; patients in experimental group were treated on the basis of the control group were given nimustine hydrochloride 2-3 mg/kg injection d1 of 1，3，5 cycle.Two groups with 21 days for a cycle，for a total of 6 cycles.After treatment, the 2 groups of clinical efficacy，P53 and SOX17 expressions，the incidence rate of adverse reactions and follow-up the recurrence rate and mortality were compared and analyzed.ResultsThe total effective rate of the experimental group (89.19%) was significant higher than the control group (64.86%) (P<0.05); after treatment, compared with control group, P53 and SOX17 positive expressions rate in experimental group were higher (P<0.05) .Compared the adverse reactions rate between 2 groups，there were no statistical significance difference; after 1 year follow-up, the recurrence rate of experimental group(13.51%) was lower than that of control group (35.14%)，the mortality rate of experimental group(5.41%) was lower than that of control group (26.12%) (P<0.05).ConclusionNimustine could regulate the P53 and SOX17 gene expressions in the treatment of cervical carcinoma stage Ⅲ-Ⅳ and inhibit invasion and metastasis of oncocytes，thus improve the clinical efficacy and prognosis and prolong survival time.

nimustine; cervical carcinoma stage Ⅲ-Ⅳ; P53 ;SOX17

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.07.22

侯麗紅，通信作者，女，本科，主治醫師，研究方向：婦科手術，E-mail：hlh19731973@163.com。

R737.33

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