桂枝茯苓丸對子宮內膜異位癥患者MAPK、p-ERK和VEGF表達的影響

張燕，張玉梅，王雯智

(1.陜西省康復醫院 婦產科，陜西 西安 710065；2.陜西省人民醫院 婦產科，陜西 西安 710068)

桂枝茯苓丸對子宮內膜異位癥患者MAPK、p-ERK和VEGF表達的影響

張燕1Δ，張玉梅1，王雯智2

(1.陜西省康復醫院 婦產科，陜西 西安 710065；2.陜西省人民醫院 婦產科，陜西 西安 710068)

目的 探討桂枝茯苓丸對子宮內膜異位癥(endometriosis，EMT)患者血清絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、磷酸化細胞外信號調節激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase ,p-ERK)、血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表達的影響。方法 選取2015年3月～2016年5月陜西省康復醫院婦產科收治的126例EMT患者，將其隨機分為觀察組(n=63)和對照組(n=63)，2組均采用常規西藥進行治療，觀察組同時服用桂枝茯苓丸，2組均治療2個月。比較治療前后2組血清MAPK、p-ERK和VEGF、腫瘤相關抗原125(tumor related antigen 125,CA125)水平及機體激素水平變化。結果 治療結束后，觀察組血清MAPK、p-ERK、VEGF、CA125較對照組降低顯著(P<0.05)；觀察組患者血清促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)、雌二醇(estradiol ,E2)、孕酮(progesterone ,P)水平較對照組降低明顯(P<0.05)，黃體生成素(luteinizing hormone ,LH)水平在2組間差異無統計學意義；觀察組盆腔包塊直徑較治療前明顯降低，且顯著低于對照組(P<0.05)。觀察組治療總有效率96.82%與對照組84.13%差異顯著(P<0.05)。結論 桂枝茯苓丸能夠抑制MAPK、p-ERK蛋白活性，降低VEGF表達水平，阻斷細胞間信號傳導通路以及細胞因子與表面受體的結合，從而使細胞分裂和子宮內膜異常增殖得以控制。

子宮內膜異位癥；MAPK；p-ERK；VEGF；激素

子宮內膜異位癥(endometriosis，EMT)是婦科常見疾病，發病率高達10%～15%[1]。臨床表現為痛經、月經異常、不孕和盆腔包塊等。治療采取個體化手術治療是主要方法，但術后存在高復發率和低妊娠率等問題。常規藥物治療中大量激素的使用，也會產生子宮萎縮等副作用[2]。桂枝茯苓丸可改善局部組織血液流變性，調節患者內分泌，使垂體和卵巢性激素分泌水平降低，從而抑制內膜細胞增殖及異常脫落[3]。本文對EMT患者采用桂枝茯苓丸聯合西藥進行治療，探討其對患者絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPK)、磷酸化細胞外信號調節激酶(phospho-extracellular signal regulated kinase，p-ERK)和血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)水平的影響，分析其治療機制，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年3月～2016年5月陜西省康復醫院婦產科收治的EMT患者126例，所有患者于治療前進行血清學檢測，入選患者診斷符合《子宮內膜異位癥診斷和治療規范》標準[4](第14屆全國婦科腫瘤學會會議)。采用隨機、雙盲、平行對照法將患者分為觀察組(n=63)和對照組(n=63)。對照組年齡27～63歲，平均(44.58±8.63)歲；平均病程(5.47±2.36)年；美國生殖醫學協會子宮內膜異位癥分期(r-AFS)標準：Ⅰ～Ⅱ期47例、Ⅲ～Ⅳ期16例；痛經情況：輕度痛經或無痛經46例，中、重度痛經17例。觀察組年齡25～66歲，平均(44.15±9.24)歲；平均病程(5.52±2.68)年；r-AFS分期：Ⅰ～Ⅱ期48例、Ⅲ～Ⅳ期15例；痛經情況：輕度痛經或無痛經42例，中、重度痛經21例。2組患者年齡、平均病程、疾病分期及痛經程度等一般資料經比較無統計學差異。所有納入患者均簽署知情同意書并經醫院倫理會批準。

納入標準：月經周期正常且術前6個月內沒有服用過激素類藥物；無嚴重的心、肝、腎疾病及免疫系統疾病；育齡期婦女，無婦科急性炎癥及其他婦科腫瘤。排除標準：合并盆腔炎及不規則陰道出血者；對治療藥物過敏者；拒絕或中途停止本次研究者；妊娠患者。

1.2 方法

1.2.1 治療方法：2組患者均接受醋酸戈舍瑞林緩釋植入劑(AstraZeneca UK Limited，國藥準字J20120015)3.6 mg/次，1次/月，皮下注射。觀察組患者同時服用桂枝茯苓丸(6 g/丸)進行治療，1丸/次，2次/天。1個月/療程，2組均連續治療2個療程。

1.2.2 觀察指標及評定標準：治療前后采集患者空腹靜脈血4 mL，離心后取上清并分裝，于-80 ℃保存待測。采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測血清MAPK、p-ERK、VEGF水平，試劑盒均購自武漢博士德生物制劑有限公司，應用北京博歐實德生物技術有限公司的全自動酶標儀RT6000進行檢測。采用放射免疫法測定性激素水平黃體生成素(luteinizing hormone ,LH)、促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)、雌二醇(estradiol ,E2)及孕酮(progesterone ,P)水平，儀器為德國SIEMENS-IMMULITE 2000分析儀及配套試劑。采用化學發光法對血清CA125進行測定，儀器為德國羅氏診斷有限公司E170電化學免疫分析儀及配套試劑，其中陽性判斷標準為CA125≥35 U/mL。

2 結果

2.1 治療前后2組血清MAPK、p-ERK及VEGF表達水平比較 治療前2組患者血清MAPK、p-ERK、VEGF表達水平無差異；治療后2組患者血清MAPK、p-ERK、VEGF表達水平均較治療前顯著降低(P<0.01)，且觀察組明顯低于對照組(P<0.01)。見表1。

組別 例數時間MAPK(μg/mL)p?ERK(μg/mL)VEGF(ng/mL)對照組63治療前6 79±1 242 24±0 2233 09±3 35治療后5 65±1 48?1 58±0 27?19 27±3 53?觀察組63治療前6 86±1 212 26±0 234 26±3 19治療后4 23±0 83?#0 98±0 29?#7 28±2 25?#

*P<0.01，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.01，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.2 治療前后2組性激素水平比較 治療前2組患者體內FSH、LH、E2、P水平無明顯差異，治療后觀察組FSH、LH、E2、P水平及對照組FSH、E2、P水平均有明顯降低(P<0.05或P<0.01)，且2組間FSH、E2、P水平差異顯著(P<0.05或P<0.01)。見表2。

表2 2組血清激素水平比較±s)

*P<0.05，**P<0.01, 與治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，##P<0.01, 與對照組比較，compared with control group post-treatment

2.3 治療前后2組血清CA125水平和盆腔包塊直徑的比較 治療前2組血清CA125水平和盆腔包塊直徑無顯著性差異。治療后2組血清CA125水平和盆腔包塊直徑均有所降低，且觀察組明顯低于對照組(P<0.01)。見表3。

表3 治療前后2組血清CA125水平及盆腔包塊直徑比較±s)

*P<0.05，**P<0.01, 與治療前比較，compared with the same group pre-treatment；##P<0.01, 與對照組比較，compared with control group post-treatment

3 討論

EMT的發病機制尚未明確，目前臨床治療以消除病灶、緩解疼痛、減少和避免復發為主。腹腔鏡手術切除效果雖好，但其術后復發率高，難以清除所有病灶，且過度電凝卵巢，致使卵巢儲備功能減弱甚至出現卵巢早衰等情況，無法進行根治[5]。西藥主要為對癥治療及激素抑制治療，促性腺激素釋放激素激動劑(gonadotropin-releasing hormone agonist ,GnRH-a)是目前公認治療EMT最有效的藥物，通過垂體降調作用使卵巢分泌激素水平下降，但會出現肝腎功能損害、胃腸道反應及因激素水平降低引起的圍絕經期癥狀、骨質疏松等副作用[6]。EMT屬中醫“癥瘕”“血瘀”等范疇，主要由勞損氣血、七情抑郁以及手術創傷等造成氣血凝結引起，臨床多采用溫經散寒和活血化瘀法進行治療，中西醫結合能充分發揮各自的優勢，綜合提高治療效果[7]。《金匱要略》[8]早有記載桂枝茯苓丸可破瘀散結、消癰止痛，方中桂枝具有溫通血脈、宣通心陽、辛散瘀血等功效，茯苓可健脾祛痰行水，2者為君藥，白芍可輔以養血柔肝、緩急止痛，桃仁、丹皮均具有活血化瘀、散結之能效，適用于寒凝血瘀型患者[9-10]。

有研究表明[11-12]腫瘤的發生發展與細胞內信號傳導通路密切相關，絲裂原活化蛋白激酶信號通路(MAPK通路)可將細胞外信號刺激傳遞至細胞內，當受到細胞因子及胞外壓力刺激時，MAPK激活MEK-2，進一步磷酸化激活成為p-ERK，p-ERK進入細胞核后，誘導相關基因的表達，最終導致細胞增殖。本研究結果顯示治療后2組患者MAPK、p-ERK均有所下降，且觀察組顯著低于對照組，表明桂枝茯苓丸抑制了細胞外信號調節激酶的合成與分泌，抑制了信號通路的傳導，從而阻止了異常增殖細胞在盆腹腔腹膜及器官內種植、生長、粘附。VEGF可促進組織血管的生成，為異位內膜的生長提供養分，同時VEGF能夠促進組織增殖分化，多種癌癥組織中均表現血清VEGF水平升高[13-14]。本研究應用桂枝茯苓丸干預后，觀察組VEGF水平有明顯降低，與僅激素治療的對照組相比差異顯著(P<0.05)。EMT是一種雌激素依賴性疾病，多數患者機體雌激素水平過高。本研究對服藥后患者的雌激素水平進行考察，結果顯示2組患者經治療后體內雌激素水平均有所降低，其中觀察組患者血清FSH、E2、P水平較對照組降低明顯(P<0.05)。說明GnRH-a及GnRH-a聯合桂枝茯苓丸均可降低患者雌激素水平，致使異位的內膜萎縮，聯合用藥效果更佳，FSH、LH、E2和P水平的降低，抑制了患者卵巢和垂體的功能，使殘存的子宮內膜異位病灶發生壞死而被吸收。CA125存在于胚胎腔上皮，在輸卵管內膜、子宮頸管內膜、胸膜及腹膜中均可檢出CA125，其在血清中表達的高低能夠反映腫瘤細胞的活性與浸潤能力。有研究表明[15]EMT患者血清中CA125較正常人顯著增加，且隨著病情嚴重程度而上升。本文研究結果顯示，經過治療，2組患者盆腔包塊直徑與血清CA125水平明顯降低，且觀察組降低更為顯著(P<0.05)。

綜上，EMT患者治療中加用桂枝茯苓丸，能夠抑制MAPK及p-ERK蛋白活性，降低VEGF表達水平，從而阻斷細胞間信號傳導通路以及細胞因子與表面受體的結合，使細胞分裂和子宮內膜異常增殖得以控制，但關于桂枝茯苓丸的具體作用機制以及藥理作用還有待進一步深入研究。

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(編校：王儼儼)

Effect of Guizhi Fuling pills on MAPK，p-ERK and VEGF levels in endometriosis

ZHANG Yan1Δ, ZHANG Yu-mei1, WANG Wen-zhi2

(1.Department of Obstetrics and Gynecology, Shaanxi Kangfu Hospital, Xi’an 710065, China; 2. Department of Obstetrics and Gynecology, Shanxi People’s Hospital, Xi’an 710068, China)

ObjectiveTo investigate the effect of Guizhi Fuling pills on the expressions of serum mitogen-activated protein kinase (MAPK), phosphorylated extracellular signal-regulated kinase (p-ERK) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in patients with endometriosis (EMT).Methods126 patients with EMs in Department of Obstetrics and Gynecology of Shaanxi Kangfu Hospital from March 2015 to May 2016 were randomly divided into observation group(n=63) and control group(n=63). The 2 groups were treated with conventional western medicine, and observation group were combined with Guizhi Fuling pill. Both groups were treated for 2 months. Before and after treatment, serum MAPK,p-ERK,VEGF, tumor related antigen 125 (CA125) and hormones between two groups were compared [re- and post- treatment.ResultsAfter treatment, the serum MAPK, p-ERK, VEGF and CA125 levels of observation group decreased significantly compared with control group (P<0.05). The serum follicle stimulating hormone(FSH), estradiol(E2)and progesterone(P)levels in observation group were significantly lower than those in control group(P<0.05). There was no difference between 2 groups on the level of luteinizing hormone(LH).The diameter of pelvic mass in observation group significantly reduced than before treatment，and significantly lower than the control group after treatment(P<0.05). The total effective rate of observation group96.82% and the control group 84.13% was significantly different(P<0.05).ConclusionGuizhi Fuling pill could inhibit protein activity of MAPK and p-ERK, reduce the expression of VEGF, block intercellular signaling pathway and connecting of cytokines with surface receptors, consequently, the cell division and the abnormal proliferation of the endometrium could be controlled.

endometriosis; MAPK; p-ERK; VEGF; hormone

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.07.41

張燕，通信作者，女，本科，主治醫師，研究方向：婦科、產科診斷與治療工作，E-mail：gaofeidoc888@163.com。

R711.71

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