1,25二羥維生素D3聯合脾氨肽口服凍干粉對哮喘CD4+CD25+T細胞、TGF-β1及VEGF影響研究

高志剛，袁永紅，詹建華，潘開宇

(杭州市蕭山區第一人民醫院 兒科，浙江 杭州 311200)

1,25二羥維生素D3聯合脾氨肽口服凍干粉對哮喘CD4+CD25+T細胞、TGF-β1及VEGF影響研究

高志剛Δ，袁永紅，詹建華，潘開宇

(杭州市蕭山區第一人民醫院 兒科，浙江 杭州 311200)

目的 探討1,25-二羥維生素D3聯合脾氨肽口服凍干粉對哮喘患者CD4+CD25+T細胞、TGF-β1及VEGF的影響。方法 收集56例支氣管哮喘患者，隨機分為對照組和實驗組，每組各28例，分別給予相應的藥物治療，治療結束后，對所有患者的靜脈血CD4+CD25+T細胞水平、血清TGF-β1、VEGF水平、ACT評分及肺功能情況進行檢測。結果 治療后，與對照組比較，實驗組患者靜脈血CD4+CD25+T細胞水平較高(P<0.05)；血清TGF-β1水平較高(P<0.05)；血清VEGF水平較低(P<0.05)；FEV1%、FEV1/ FVC值較高(P<0.05)；ACT評分較高(P<0.05)。結論 1,25-二羥維生素D3聯合脾氨肽口服凍干粉能夠顯著升高支氣管哮喘患者靜脈血CD4+CD25+T細胞水平及血清TGF-β1，降低血清VEGF水平，提高免疫力，改善肺功能和治療效果。

1,25二羥維生素D3；脾氨肽口服凍干粉；哮喘；CD4+CD25+T細胞；TGF-β1；VEGF

全世界約有3億哮喘患者[1]，發病率以每10年20%～50%的比率增長，我國約有1000萬～3000萬哮喘患者[2]，患病率為0.31%～3.38%，并且有不斷增加的趨勢。現有對哮喘的治療臨床多用布地奈德吸入療法，雖然糖皮質激素的作用比較明顯，但是其作用是非特異性的，長期使用可以引起機體一系列的代謝及內分泌的紊亂。隨著現代分子免疫學及遺傳學方面研究的進展，人們認為免疫因素在哮喘的發病過程中發揮重要作[3]，治療上加用免疫調節相關藥物可以取得更好的療效。研究顯示，脾氨肽佐治哮喘能更有效地控制哮喘癥狀[4]。本研究探討1，25-(OH)2-VitD3聯合脾氨肽口服凍干粉對哮喘患兒的影響。

1 資料與方法

1.1.1 臨床資料：收集杭州市蕭山區第一人民醫院兒科2013年12月～2015年7月的確診為支氣管哮喘的患兒56例。將所有患者按照隨機數字表分為實驗組和對照組，每組各28例患者，實驗組男性13例，女性15例，年齡5～10歲，平均年齡(7.14±0.91)歲，病程0.5～4.1年，平均病程(3.31±0.80)年；對照組男性14例，女性14例，年齡5～10歲，平均年齡(7.12±0.99)歲，病程0.6～4.2年，平均病程(3.20±0.78)年。2組患兒的年齡分布、性別組成、病程等一般臨床資料方面差異無統計學意義。

納入標準：符合《兒童支氣管哮喘的診斷及治療》[5]的5～10歲兒童，存在咳嗽、喘息、呼吸困難等臨床表現，并經X線等影像學檢查排除其他肺部感染及占位性病變。本研究獲得患者知情同意，且得到本院倫理委員會批準。排除標準：①近3個月內合并感染性疾病，應用任何類型或劑量的抗生素、糖皮質激素等治療的患兒；②合并先天性免疫功能缺陷或近期服用影響免疫功能的藥物的患兒；③存在心血管系統疾病或嚴重肝腎功能不全等基礎疾病的患兒。

1.2 方法

1.2.1 治療方法：所有患者均嚴格按照全球哮喘防治創議(GINA方案)治療。對照組患者給予1，25-二羥維生素D3 800 IU/d口服。實驗組患者在對照組基礎上給予脾氨肽口服凍干粉(商品名：復可托，浙江豐安生物制藥有限公司，國藥準字H1097021)4 mg，1次/天睡前涼開水沖服。1個月為1個周期，2組患者均治療2個周期。

1.2.2 血液指標檢測：酶聯免疫吸附(ELISA)法檢測血清轉化生長因子-β1(TGF-β1)、血管內皮生長因子(VEGF)水平，試劑盒購買于羅氏診斷產品上海有限公司；雙抗體蛋白夾心法檢測CD4+CD25+T細胞水平，試劑盒購買于羅氏診斷產品上海有限公司。DG5033A全自動酶標儀(華東電子)。

1.2.3 肺功能及ACT評分檢測：采用HI-101肺功能檢測儀(北京裕天醫療技術)，分別于治療前后對患者第1秒用力呼氣容積占預計值百分比( FEV1% )以及FEV1/ FVC值；根據哮喘控制測試(ACT評分)表[6]，在治療前后對患者進行評分，來評估對哮喘病情的控制情況：未控制：≤19分，部分控制：20～24分，控制良好：≥25分。

2 結果

2.1 治療前后2組患者血CD4+CD25+T細胞及TGF-β1水平比較 治療后2組患者ACT、血CD4+CD25+T細胞水平及TGF-β1水平均明顯改善，與對照組比較，實驗組患者ACT、血CD4+CD25+T細胞水平及TGF-β1水平較高(P<0.05)。見表1。

表1 治療前后2組患者ACT 、CD4+CD25+T、TGF-β1水平比較

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.2 治療前后2組患者血清VEGF水平比較 治療后2組患者的血清VEGF水平均明顯下降，與對照組比較，實驗組患者血清VEGF水平明顯降低(P<0.05)。見表2。

組別 例數時間VEGF(pg/mL) 對照組28治療前261 54±30 95治療后175 34±20 17?實驗組28治療前253 44±32 54治療后102 43±12 33?#

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.3 治療前后2組患者的FEV1%、FEV1/ FVC值比較 治療后2組患者的肺功能均明顯改善，與對照組比較，實驗組患者的FEV1%、FEV1/ FVC值明顯升高(P<0.05)。見表3。

組別 例數時間FEV1%FEV1/FVC(%)對照組28治療前64 71±7 2952 84±6 32治療后77 54±11 02?65 56±8 36?實驗組28治療前64 36±7 3752 58±6 85治療后89 74±10 28?#72 15±9 47?#

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

3 討論

支氣管哮喘的發生與遺傳因素、性別、肥胖、種族、變應原暴露、呼吸道感染、空氣污染、社會環境等因素有關，其中環境因素是哮喘發生發展的重要原因[7]，其發病機制尚未完全明確，免疫相關機制是目前研究的熱點。研究認為[8]，哮喘患者在受到過敏原刺激后，B7和CD28細胞結合，激活T淋巴細胞細胞，產生氣道免疫炎癥反應；外周血中存在組成性的不依賴抗原刺激的Th1異常表達，Th1/Th2合成分泌失衡，機體免疫功能受損，刺激炎癥相關細胞因子的產生，是哮喘發病的基礎；氣道炎癥反應反復、慢性發作，刺激細胞外基質聚集、新生血管生成、平滑肌細胞增殖，并最終形成氣道重塑，導致氣道阻塞和非特異性氣道高反應。脾氨肽口服凍干粉是一種免疫體調節劑，含有多種免疫調節因子和氨基酸，用于免疫缺陷、免疫功能低下、自身免疫功能紊亂等疾病的治療，已有研究顯示[9]，對小兒哮喘具有較好的療效，并能調節患兒免疫功能平衡,其能夠通過免疫信息傳遞、淋巴細胞活化及受體調節等3個環節來發揮作用；通過加強T淋巴細胞的殺傷效應、協同效應、增強效應和復制效應，來提高機體的免疫功能，從而發揮排斥抗原性改變的自身細胞及抗細菌、霉菌和病毒性細胞內感染的作用。1，25-(OH)2-VitD3是維生素D3的活性形式，維生素D具有免疫調節作用，能夠降低細胞通透性，減少過敏物質透過損傷氣道上皮細胞，對哮喘患者氣道起到保護作用。

結果發現，實驗組患者靜脈血CD4+CD25+T細胞水平及TGF-β1與對照組比較明顯升高(P<0.05)，證實了1，25-(OH)2-VitD3聯合脾氨肽口服凍干粉能夠改善患者的免疫功能。CD4+CD25+T細胞分為效應性T細胞和調節性T細胞兩種，調節性T細胞是具有免疫調節及免疫耐受介導作用的調節細胞，由胸腺合成分泌，具有免疫抑制和免疫無能性功能。CD4+CD25+T調節性T細胞與哮喘的發生關系密切。TGF-β1具有調節細胞生長和分化的作用，能夠促進損傷氣道的修復，抑制炎癥細胞表達，減輕氣道炎癥，還對Th2具有促進和抑制雙重作用，具有免疫調節功能。

本研究結果顯示，實驗組患者血清VEGF水平與對照組比較明顯降低(P<0.05)，表明1，25-(OH)2-VitD3聯合脾氨肽口服凍干粉能夠防止哮喘患者的氣道重構。氣道重構是指哮喘患者的氣道、平滑肌不可逆性的增厚，是氣道功能減退的基礎。VEGF屬于血小板生長因子家族，能夠促進血管內皮細胞增殖、生長，促進新生血管形成，對上皮細胞的生長也有促進作用。在支氣管哮喘發生過程中，VEGF能夠刺激嗜酸性粒細胞活化、趨化以及新生血管形成來增強氣道炎癥反應，同時使呼吸道粘膜血管化、通透性增加，加速血管重構過程。FEV1%降低與呼氣性的呼吸困難有關，是反映兒童支氣管哮喘嚴重程度的重要指標[11]，實驗組患者的FEV1%、FEV1/ FVC是氣道阻塞的肺量測定，比值越小，提示肺功能越差。本研究結果顯示，與對照組比較明顯升高(P<0.05)，表明1，25-(OH)2-VitD3聯合脾氨肽口服凍干粉能夠提高哮喘患者的肺功能。

本實驗通過對56例支氣管哮喘患者進行分析，1，25-二羥維生素D3聯合脾氨肽口服凍干粉能夠顯著升高支氣管哮喘患者靜脈血CD4+CD25+T細胞水平及血清TGF-β1，降低血清VEGF水平，提高免疫力。

[1] 王星， 蘇長海， 蘇伊新. 影響慢性阻塞性肺疾病和哮喘患者吸入劑使用因素的研究[J]. 中國醫院用藥評價與分析， 2015，15(2)：275-277.

[2] 鄭鳳霞. 吸入型糖皮質激素在支氣管哮喘中的臨床應用及研究近況[J]. 中華肺部疾病雜志：電子版， 2013，4(6)：82-84.

[3] 王學亮， 周傳麟， 卞明菊. 金水寶膠囊對支氣管哮喘患者幾種免疫細胞因子的影響[J]. 中華肺部疾病雜志 (電子版)， 2015， 8(2)： 59-60.

[4] 畢文淼， 何志紅， 金穎， 等. 脾氨肽佐治支氣管哮喘對白細胞介素及肺功能的影響[J]. 臨床誤診誤治， 2015， 28(7)： 106-108.

[5] 陳育智. 兒童支氣管哮喘的診斷及治療[M]. 人民衛生出版社， 2010.

[6] 金玲玲， 林慧， 戴元榮. 呼氣峰流量日變異率及哮喘控制測試評分在哮喘病情監測中的作用[J]. 溫州醫科大學學報， 2015， 45(8)： 579-582.

[7] 招軒娜， 吳斌. 支氣管哮喘發病危險因素的研究進展[J]. 廣東醫學院學報， 2014， 32(5)： 703-705.

[8] 施筠， 王鳳鳴， 駱亞麗， 等. 塵螨變應性哮喘患兒外周血輔助性 T 淋巴細胞和調節性 T 淋巴細胞的表達及其臨床意義[J]. 中華實用兒科臨床雜志， 2013， 28(21)： 1619-1621.

[9] 梁美靜.脾氨肽口服凍干粉治療小兒支氣管哮喘的療效及對患兒免疫功能的影響觀察[J].臨床合理用藥雜志，2013，6(2)：70-71.

[10] 郭瑜修， 覃大烈， 李俊. 血清白細胞介素-33 與兒童支氣管哮喘的相關性分析[J]. 浙江臨床醫學， 2015， 17(9)： 1564-1565.

(編校：譚玲)

Effect of 1,25-(OH)2-VitD3 combined with spleen ammonia peptide oral freeze dry powder on CD4+CD25+T cells, TGF-β1 and VEGF in patients with asthma

GAO Zhi-gangΔ, YUAN Yong-hong, ZHAN Jian-hua, PAN Kai-yu

(Department of Pediatrics, The First People’s Hospital of Xiaoshan District of Hangzhou City, Hangzhou 311200, China)

ObjectiveTo analysis the effect of 1,25-(OH)2-VitD3 combined with spleen ammonia peptide oral freeze dry powder on CD4+CD25+T cells, TGF- β1 and VEGF in patients with asthma.Methods56 patients who were diagnosed with bronchial asthma were randomly divided into experiment group and control group, 28 cases in each group. Patients were given the appropriate drug treatment, after the treatment,the venous blood level of CD4+CD25+T cells, the serum levels of TGF-β1 and VEGF, the ACT score and pulmonary function were detected in all patients.ResultsAfter treatment, compared with control group,the venous blood level of CD4+CD25+T cells was higher in the experiment group(P<0.05);the serum TGF-β1 level was higher(P<0.05);the serum VEGF level was lower(P<0.05); the FEV1% and FEV1/ FVC were higher(P<0.05); the ACT score was higher(P<0.05).ConclusionThe 1,25-(OH)2-VitD3 combined with spleen ammonia peptide oral freeze dry powder can improve significantly the venous blood level of CD4+CD25+T cells and the serum TGF-β1 level, reduce serum VEGF level in patients with bronchial asthma, improve immunity, ameliorate lung function and treatment effect.

1,25-(OH)2-VitD3; spleen ammonia peptide oral freeze dry powder; asthma; CD4+CD25Tcells; TGF- β1; VEGF

高志剛，通信作者，男，本科，主治醫生，研究方向：小兒呼吸，E-mail：gaozhiganghz15@163.com。

R914

A

1005-1678(2016)02-0094-03