拉米夫定聯合阿德福韋對乙型肝炎患者免疫應答與漿細胞樣樹突狀細胞功能變化的研究

陳曉春，黃昌靖

(1.浙江省衢州市人民醫院 感染科，浙江 衢州 324000，2.湖北工業大學 生物工程學院，湖北 武漢 430070)

拉米夫定聯合阿德福韋對乙型肝炎患者免疫應答與漿細胞樣樹突狀細胞功能變化的研究

陳曉春1Δ，黃昌靖2

(1.浙江省衢州市人民醫院 感染科，浙江 衢州 324000，2.湖北工業大學 生物工程學院，湖北 武漢 430070)

目的 探討拉米夫定聯合阿德福韋對乙型肝炎患者免疫應答與漿細胞樣樹突狀細胞功能變化的影響。方法 收集48例慢性乙型肝炎患者，隨機分為對照組和實驗組，每組各24例，在常規治療基礎上，對照組患者給予拉米夫定治療，實驗組在對照組基礎上給予阿德福韋治療，治療結束后，對所有患者的血清AST、ALT、IFN-α水平及外周血CD4+、CD8+T細胞、CD4+/CD8+、pDCs水平進行檢測。結果 治療后，與對照組比較，實驗組患者的外周血CD4+T細胞及CD4+/CD8+水平較高(P<0.05)；實驗組患者的血清IFN-α及外周血pDCs水平較高(P<0.05)；實驗組患者的血清AST、ALT水平較低(P<0.05)。結論 拉米夫定聯合阿德福韋能夠顯著提高乙型肝炎患者的免疫應答以及漿細胞樣樹突狀細胞功能，改善肝功能。

拉米夫定；阿德福韋；乙型肝炎；免疫應答；漿細胞樣樹突狀細胞功能

乙型肝炎由乙肝病毒(hepatitis B virus，HBV))引起的、以肝臟炎性病變為主并可引起多器官損害的一種傳染病[1]。本病屬于世界流行性傳染病，資料顯示，全球約有20億人已感染HBV，其中3.5億～4億人患有慢性肝臟感染，每年約有600萬人死于急性或慢性乙型肝炎[2]。而我國是乙型肝炎的高發區，目前有2000多萬慢性乙肝(chronic hepatitis B，CHB)患者，每年因乙肝相關疾病死亡的約有23.7萬人，其中有15.6萬人死于肝癌[3]，并且發病率呈逐年上升的趨勢。CHB具有傳染性，控制不良容易反復發作，進展為肝硬化，甚至肝癌，嚴重威脅患者生命。因此，早期合理有效的治療尤為重要。對于慢性乙型肝炎，臨床上尚無特異性的治療手段，主要使用拉米夫定、干擾素-α進行抗病毒治療，但是，拉米夫定長期應用容易出現病毒變異和臨床抗藥性[4]，干擾素的近期治療效果也不甚理想。阿德福韋屬于新型的核苷類抗病毒藥物，有研究顯示，阿德福韋對HBV野毒株和對拉米夫定耐藥的突變株均具有顯著的治療作用[5]。因此，本研究通過觀察治療前后患者血清谷草轉氨酶(aspartate aminotransferase，AST)、谷丙轉氨酶(Alanine transaminase，ALT)、干擾素-α(interferon-α，IFN-α)水平及外周血輔助性T細胞CD4(monoclonal antibody to CD4，CD4+)、輔助性T細胞CD8(monoclonal antibody to CD8， CD8+T)細胞、CD4+/CD8+、漿細胞樣樹突狀細胞(Plasma cell like dendritic cells，pDCs)水平的變化，探討拉米夫定聯合阿德福韋對患者免疫應答與漿細胞樣樹突狀細胞功能的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集浙江省衢州市人民醫院感染科2013年12月～2014年12月的確診為慢性乙型肝炎的患者48例，隨機分為實驗組和對照組。實驗組患者24例，男性15例，女性9例，年齡22～70歲，平均年齡(39.6±12.1)歲，平均病程(8.5±4.2)月。對照組患者24例，男性16例，女性8例，年齡24～68歲，平均年齡(38.7±11.6)歲，平均病程(8.9±4.1)月。2組患者的性別組成、年齡分布、平均病程等一般臨床資料差異無統計學意義，具有可比性，本實驗經本院倫理協會批準，患者簽署知情同意書。診斷及排除標準：診斷依據根據2010年中華醫學會肝病學分會制訂的《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》關于慢性慢性乙型肝炎的診斷標準[6]，并經實驗室檢查確診；排除標準：①乙肝病毒表面抗原(HbeAg)陰性；②合并其他慢性肝病、丙型肝炎、丁型肝炎、自身免疫性肝病等；③合并惡性腫瘤；④合并心力衰竭、腎功能不全等；⑤近期服用抗病毒藥物；⑥對研究中所涉及藥物過敏的患者。

1.2 方法

1.2.1 治療方法：根據臨床用藥指南，2組患者均常規給予肝保護以及對癥治療，在此基礎上，對照組患者給予拉米夫定片(安徽貝克生物制藥有限公司，國藥準字H20103618)100 mg，1次/天口服；實驗組患者在對照組治療的基礎上給予阿德福韋酯片(江蘇天士力帝益藥業有限公司，國藥準字H20080365)10 mg，1次/天口服。2組患者均治療1年。

1.2.2 血清指標采集：治療前后，所有研究對象均采集空腹12小時后靜脈血5 mL，通過離心機分離血清，采用OLYMPUSAU5400全自動生化分析儀，通過速率法檢測血清中丙氨酸氨基轉移酶(ALT)及門冬氨酸氨基轉移酶(AST)水平；采用美國BioTek Synergy H1全功能酶標儀，嚴格按照試劑盒說明操作，通過酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清中干擾素α(IFN-α)水平。

1.2.3 細胞學檢測：治療前后，采集所有患者空腹靜脈血3 mL，置于抗凝管中，采用貝克曼庫爾特Gallios流式細胞儀。檢測外周血中CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD4+/CD8+比值及漿細胞樣樹突狀細胞(pDCs)水平

2 結果

2.1 治療前后2組患者外周血CD4+、CD8+T細胞及CD4+/CD8+水平比較 治療后2組患者的外周血CD4+T細胞及CD4+/CD8+水平與治療前比較均明顯升高，與對照組比較，實驗組患者的外周血CD4+T細胞及CD4+/CD8+水平明顯較高(P<0.05)；治療后2組患者的外周血CD8+T細胞水平與治療前比較差異無統計學意義。見表1。

表1 治療前后2組患者外周血CD4+、CD8+ T細胞及 CD4+/CD8+水平比較

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.2 治療前后2組患者血清IFN-α及外周血pDCs水平比較 治療后2組患者的血清IFN-α及外周血pDCs水平與治療前比較均明顯升高，與對照組比較，實驗組患者的血清IFN-α及外周血pDCs水平明顯較高(P<0.05)。見表2。

表2 治療前后2組患者血清IFN-α及外周血pDCs水平比較±s)

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.3 治療前后2組患者血清AST、ALT水平比較 治療后2組患者的血清AST、ALT水平與治療前比較均明顯降低，與對照組比較，實驗組患者的血清AST、ALT水平明顯較低(P<0.05)。見表3。

組別 例數時間ASTALT對照組24治療前98 85±11 58147 98±21 05治療后43 67±6 21?56 34±8 04?實驗組24治療前99 73±12 48148 65±21 22治療后32 75±4 35?#47 38±6 41?#

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

3 討論

近年來，隨著我國乙肝疫苗接種的不斷普遍，CHB的發病情況雖然得到一定控制，但發病率及死亡率仍不斷上升，居于各種傳染病之首，給患者帶來很大的痛苦。CHB臨床主要表現為畏食、乏力、腹脹、惡心、肝區疼痛等[7]，嚴重者可出現肝脾腫大、黃疸、肝區疼痛，引發脂肪肝、肝硬化、肝癌等嚴重并發癥，危及患者生命。本病主要通過血液、母嬰、性接觸等途徑傳播，其發病與HBV在機體內持續復制和機體免疫清除功能障礙兩個要素有關，所以，抗病毒是CHB最主要的治療手段。抗病毒藥物種類較多，但單藥應用臨床療效并不理想，抗病毒藥物聯合應用目前已成為臨床研究熱點之一[8]。拉米夫定是雙脫氧核苷類似物，能夠競爭性的抑制HBV病毒DNA鏈的合成和延長，減少HBV復制，起到抗病毒的作用。拉米夫定治療CHB需要長期應用才能實現理想治療作用，但是，隨著用藥時間的延長很容易出現病毒耐藥[9]。阿德福韋是新型的腺嘌呤核苷類似物，能夠與腺苷酸競爭性摻入病毒DNA鏈，抑制DNA聚合酶，從而抑制病毒復制，同時可以刺激機體的免疫反應，具有較強的抗病毒作用。有研究顯示[10]，拉米夫定耐藥慢性乙型肝炎患者采用阿德福韋和拉米夫定聯合治療有效。所以，在本實驗中，筆者通過觀察患者治療前后免疫應答與漿細胞樣樹突狀細胞功能的變化，探討拉米夫定聯合阿德福韋對慢性乙肝患者的治療效果及作用機理。

本研究結果發現，實驗組患者的外周血CD4+T細胞及CD4+/CD8+水平與對照組比較明顯較高，證實了拉米夫定聯合阿德福韋能夠提高患者的免疫功能。T淋巴細胞是構成機體免疫系統的主要部分，能夠反應機體的免疫狀態，在CHB患者體內，CD4+T細胞能夠促進B淋巴細胞產生抗體，清除HBV；CD8+T細胞能夠識別病毒與肝細胞結合形成的復合物，對肝細胞產生破壞，有報道稱，體內高水平的病毒載量導致持續低下的T淋巴細胞反應[11]，使得血清CD4+T細胞水平、CD4+/CD8+比值降低，免疫功能下降。

pDCs是一種天然抗原提呈細胞，能夠合成釋放大量IFN-α。IFN-α能夠誘導細胞合成抗病毒蛋白，抑制乙肝病毒的復制，發揮廣譜抗病毒作用。有研究顯示，在CHB患者體內pDCs數量和功能都有所降低[12]。本研究結果顯示，實驗組患者的血清IFN-α及外周血pDCs水平與對照組比較明顯較高(P<0.05)，表明拉米夫定聯合阿德福韋能夠能夠提高pDCs功能，恢復機體抗病毒效應。所以，實驗組患者的血清AST、ALT水平與對照組比較明顯較低(P<0.05)，患者的肝功能得到恢復。

本實驗通過48例慢性乙型肝炎患者血清AST、ALT、IFN-α水平及外周血CD4+、CD8+T細胞、CD4+/CD8+、pDCs水平的檢測結果進行分析，證實了拉米夫定聯合阿德福韋能夠顯著提高乙型肝炎患者的免疫應答以及漿細胞樣樹突狀細胞功能，改善肝功能，對臨床有指導意義，在下一步研究中，將進行分子機制方面研究，為本實驗所反映的現象做出進一步論證和分析。

[1] 李鳴，陳利鋒，趙映前，等.益氣解毒法治療慢性乙肝病的研究進展[J].湖北中醫藥大學學報，2013，15(5)：72-74.

[2] 王恩成，唐琳，王健，等.拉米夫定治療慢性乙型肝炎YMDD變異研究進展[J].實用醫學雜志，2013，29(18)：2937-2938.

[3] 張明.慢性乙型肝炎患者48例臨床分析[J].臨床合理用藥雜志，2012，5(11)：39.

[4] 吳虹，郭秋蘭，孫艷萍，等.阿德福韋酯聯合胸腺肽α1治療拉米夫定耐藥慢性乙型肝炎臨床觀察[J].中國藥物與臨床，2010，10(2)：218-219.

[5] 郭華，程時德.阿德福韋酯聯合拉米夫定對拉米夫定耐藥的HbeAg陰性慢性乙肝患者的療效觀察[J].中國生化藥物雜志，2010，31(6)：414-416.

[6] 中華醫學會肝病學分會，中華醫學會感染病學分會.慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)[J].中華肝臟病雜志，2011，19(1)：13-24.

[7] 高健，王桂平，趙春燕，等.慢性乙肝患者抗病毒治療血清IL-10、IL-12、sIL-2R、TNF水平變化的臨床觀察[J].河北醫藥，2013，35(14)：2132-2133.

[8] 柳志原(綜述)，肖寒(審校).慢性乙型肝炎抗病毒藥物聯合治療研究進展[J].現代醫藥衛生，2015，(2)：212-215.

[9] 焦記麗.拉米夫定耐藥患者變異類型檢測及乙型肝炎病毒基因丙氨酸轉氨酶水平分析[J].山西醫藥雜志，2014，(10)：1206-1207.

[10] 趙文莉，賀新祥，胡勤明，等.阿德福韋酯聯合拉米夫定治療拉米夫定耐藥慢性乙型肝炎[J].中國藥師，2014，(10)：1741-1743.

[11] 陳月，陳洪濤，吳詩品，等.阿德福韋酯對慢性乙型肝炎患者外周血樹突狀細胞和淋巴細胞亞群的影響[J].廣東醫學，2010，31(1)：72-74.

[12] 唐余燕，李丹，余永勝，等.漿細胞樣樹突狀細胞(pDCs)在慢性乙肝中的研究進展[J].中國臨床藥理學與治療學，2012，17(9)：1062-1066.

(編校：譚玲)

Effect of lamivudine combined with adefovir on changes of immune response and plasmacytoid dendritic cell function in patients with hepatitis B

CHEN Xiao-chun1Δ, HUANG Chang-jing2

(1.Department of Infectious Diseases, Quzhou People’s Hospital of Zhejiang Province, Quzhou 324000, China; 2.Institute of Biological Engineering, Hubei University of Technology, Wuhan 430070, China)

ObjectiveTo analysis the effect of lamivudine combined with adefovir on changes of immune response and plasmacytoid dendritic cell function in patients with hepatitis B.Methods48 patients who were diagnosed with chronic hepatitis B were randomly divided into experimental group and control group,24 cases in each group.On the basis of conventional treatment, patients in the control group

lamivudine therapy, patients in the experimental group were treated with adefovir on the basis of the control group, after the treatment, the serum levels of AST,ALT,IFN-α and peripheral blood CD4+, CD8+T cells, CD4+/CD8+and pDCs levels were detected in all patients.ResultsAfter treatment, compared with control group,the peripheral blood level of CD4+T cells and CD4+/CD8+were higher in the experimental group,and the difference was statistically significant (P<0.05);the serum level of IFN-α and peripheral blood level of pDCs were higher in the experimental group (P<0.05);the serum levels of AST and ALT were lower in the experimental group (P<0.05).ConclusionThe lamivudine combined with adefovir can significantly improve the immune response and the function of plasma cell like dendritic cells in patients with hepatitis B, improve liver function.

lamivudine; adefovir; hepatitis B; immune response; plasmacytoid dendritic cell function

浙江省中醫藥科技計劃項目(2007CB199)

陳曉春，通信作者，女，主治醫師，本科，研究方向：肝炎結核及感染性疾病，E-mail：zjchenxiaochun@163.com。

R978.1

A

1005-1678(2016)02-0125-03