雷珠單抗對新生血管性青光眼患者血清、房水IL-6及VEGF水平的影響

張怡，蔣姝樂，柳婷，杜爾罡

(1.浙江省中醫藥大學附屬第一醫院 眼科，浙江 杭州 310006；2.廣西中醫藥大學 醫學系，廣西 南寧 530200)

雷珠單抗對新生血管性青光眼患者血清、房水IL-6及VEGF水平的影響

張怡1Δ，蔣姝樂1，柳婷2，杜爾罡1

(1.浙江省中醫藥大學附屬第一醫院 眼科，浙江 杭州 310006；2.廣西中醫藥大學 醫學系，廣西 南寧 530200)

目的 雷珠單抗對新生血管性青光眼患者血清、房水白細胞介素-6(IL-6)及血管內皮生長因子(VEGF)水平影響。方法 收集浙江省中醫藥大學附屬第一醫院眼科新生血管性青光眼患者66例，隨機分為實驗組與對照組，各33例。對照組局部給予阿托品、糖皮質激素等常規治療，采用全視網膜光凝術(panretina/photocoagulation，PRP)；實驗組在對照組基礎上給予雷珠單抗注射液，2組均治療4次。比較治療前后2組患者血清及房水IL-6、VEGF及眼壓變化。結果 治療后2組患者的血清及房水IL-6、VEGF水平降低，眼壓降低(P<0.05)，與對照組相比，實驗組血清及房水IL-6、VEGF水平較低，眼壓較低(P<0.05)。結論 雷珠單抗能夠有效治療新生血管性青光眼，降低眼壓，推測其機制可能與降低新生血管性青光眼患者血清及房水IL-6、VEGF水平有關。

雷珠單抗；新生血管性青光眼； IL-6；VEGF

新生血管性青光眼 (neovascular glaucoma,NVG)是一種常見的繼發性青光眼,常繼發于糖尿病性視網膜病變、視網膜中央靜脈阻塞和視網膜缺血綜合征[1]。本病臨床上可分為3期，即虹膜紅變期、開角型青光眼期及閉角型青光眼期，其中虹膜新生血管化的進展變化最大，可在幾天之內完全粘閉房角，也可數年之內保持穩定不累及房角，病情發展不可預測。目前臨床上醫者多采用全視網膜光凝(panretina/photocoagulation，PRP)術進行治療[2]。但常規藥物和手術的成功率較低，效果不理想[3]。雷珠單抗(ranibizumab)是第2代人源化抗血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)重組鼠單克隆抗體片段,能與所有活性形式的VEGF-A結合,防止其與VEGFR1及VEGFR2結合[4]，能有效抑制血管生成。本研究通過觀察雷珠單抗對新生血管性青光眼患者血清白細胞介素-6(interleukin-6，IL-6)，VEGF水平及眼壓的影響，以期為雷珠單抗治療新生血管性青光眼提供可靠的臨床依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2014年1月～2015年7月于浙江省中醫藥大學附屬第一醫院眼科確診為新生血管性青光眼的患者66例，其中男性38例，女性28例，年齡34～70歲，病程1～3個月。按照患者就診的先后順序分為實驗組和對照組，實驗組33例，男性16例，女性17例，年齡37～65歲，平均年齡(48.23±5.96)歲；對照組33例，男性22例，女性11例，年齡34～70歲，平均年齡(52.01±5.90)歲。2組患者在年齡、性別、病程等一般情況上比較差異無統計學意義，具有可比性。納入標準：①所有患者符合中華醫學會眼科學分會青光眼學組《中國青光眼臨床工作指南》中關于新生血管性青光眼的診斷標準[5]；②對研究中使用的藥物無過敏史且患者非過敏體質；③患者年齡在34～70歲之間；④于治療前的1個月內未使用過治療新生血管性青光眼的藥物；⑤患者自愿參加本次研究，了解手術危險，簽署知情同意書，并獲得本院倫理協會批準。排除標準：①患者依從性差，不配合治療者；②處于青光眼晚期需采取摘除法；③合并嚴重的心、腦血管疾病、肝腎功能衰竭及其他的眼科疾病等；④合并其他嚴重的血液系統疾??；⑤哺乳或妊娠期婦女及嬰兒；⑥對研究中所涉及藥物過敏；⑦患者存在玻璃體及房前出血等情況。

1.2 方法

1.2.1 治療方法：所有患者均給予戒煙、戒酒、糾正電解質與酸堿平衡、低脂飲食、限制鈉鹽及水分攝入等常規治療，2組患者均隔2周治療1次，總治療4次。對照組采用全視網膜光凝術，患眼首先用復方托品酰胺(別名復方托吡卡胺滴眼液，北京雙鶴現代醫藥技術有限責任公司，國藥準字H11021793)散瞳，鹽酸丙美卡因滴眼液(蘇州工業園區天龍制藥有限公司，國藥準字H20084062)麻醉后置于裂隙燈前，調整患部位置，放置全視網膜鏡，設置波長532 nm，能量330 mW，曝光時間0.2 s，近黃斑血管弓的后極部光斑直徑200 μm，中周邊部300 μm，光斑強度3級,光凝范圍為視盤上、下、鼻側1 PD以外，顳側上、下血管弓及黃斑中心凹顳側2 PD以外至赤道部區域，以出現明顯灰白色的Ⅲ級輕中度光斑為準，每2個光斑之間間隔1個光斑直徑，每次光凝400～500點，術后雙氯芬酸鈉滴眼液(江蘇祥瑞藥業有限公司，國藥準字H20067166)滴眼，每天4次，連續4 d(美國科醫人Lumenis spectra 激光機)。實驗組在對照組治療的基礎上，患者玻璃體內加注雷珠單抗注射液(Novartis Pharma Schweiz AG，注冊證號：S20110085)0.05mL(1.25 mg)，每天4次，連續4 d。

1.2.2 觀察指標及方法：所有患者均于治療前后采集清晨空腹靜脈血2 mL，加入肝素抗凝后立即低溫離心后取得血清。IL-6測定采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附測定(ELASA)法，試劑盒由上海北諾生物科技有限公司生產，所用儀器為FX-6MG酶聯免疫光譜分析儀； VEGF測定采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附測定(ELASA)法，試劑盒由北京健平金星生物科技有限公司生產。檢測方法嚴格按照試劑盒說明書進行，并嚴格按照儀器操作規程操作和質控。眼壓檢測方法：所有患者均運用非接觸式眼壓計測量眼壓，囑患者雙眼同時注視前方，睜大眼睛注視儀器內紅色指示點，并告知測量時有輕微氣流噴出，避免瞬目及后退，根據患者高度調節電動桌適當高度，調整患者眼角約與額頭架旁標示同一高度，檢查者調整儀器操縱桿并對焦，按測量鍵進行測量，連續3次取平均值，測量結束后，打印結果。房水樣本采集：開瞼后，以無菌1 mL一次性塑料針管接9號針頭，在角膜緣內1 mm前房穿刺，2～5 s內從中央瞳孔區抽吸，不觸及虹膜、晶狀體及角膜內皮，獲得未稀釋前的房水0.2 mL，標本移至已消毒并硅化的0.5 mL Eppendorf管，放入液氮中，然后放到-80 ℃的冰箱中。

2 結果

2.1 治療前后2組患者血清及房水IL-6水平比較 治療后2組患者的血清及房水IL-6水平與治療前相比均降低(P<0.05)，與對照組比較，實驗組患者的血清及房水IL-6水平較低(P<0.05)。見表1。

表1 治療前后2組患者血清及房水IL-6水平比較

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.2 治療前后2組患者血清及房水VEGF水平比較 治療后2組患者的血清及房水VEGF水平與治療前相比均降低(P<0.05)，與對照組比較，實驗組患者的血清及房水VEGF水平較低(P<0.05)。見表2。

表2 治療前后2組患者血清及房水VEGF水平比較

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.3 治療前后2組患者的眼壓比較 治療后2組患者的眼壓與治療前相比均降低(P<0.05)，與對照組比較，實驗組患者的眼壓較低(P<0.05)。見表3。

表3 治療前后2組患者的眼壓比較

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

3 討論

新生血管性青光眼最常繼發于視網膜中央靜脈阻塞、糖尿病視網膜病變等視網膜缺氧性疾病某些引起視網膜缺氧的疾病[6]，本病用一般的抗青光眼藥物及濾過性手術治療，效果不理想。IL-6作為一種多功能細胞因子，主要由血管內皮細胞、纖維母細胞、單核巨噬細胞、T淋巴細胞等分泌，具有調節免疫應答[7]、促進造血功能的作用。IL-6等炎性分子可由低氧所誘導，作為血管生成因子參與了新生血管免疫球蛋白的形成，人體血液中的氧主要以2種方式存在,一種是氧合血紅蛋白,另一種是血液中的溶解氧，增加組織供氧量,最終減少缺血缺氧,使紅細胞的活性增高[8]，新生血管性青光眼是一種難治性青光眼,其主要由于視網膜的廣泛缺血所致[9]，缺血進而會引起相對性缺氧，造成局部低氧環境。雷珠單抗是針對VEGF所有亞型的人源化全長單克隆抗體[10]，能有效降低血管通透性以及抑制血管生成，有較好的穿透力，能夠直達患處，在玻璃體中的利用率較高，對于新生血管性青光眼的治療具有良好的效果。本研究結果顯示，與對照組比較，實驗組患者的血清及房水IL-6水平較低(P<0.05)，證明了雷珠單抗可以有效抑制新生血管性青光眼患者的炎癥反應，并抑制新生血管的生成。

研究結果發現，經治療后實驗組患者的血清及房水VEGF水平更低，證實了雷珠單抗能夠抑制新生血管的生成[10]。VEGF又稱血管通透因子[11]，是一種特異性作用于內皮細胞的血小板源性蛋白，也是血管發生和血管生成過程中重要的調控因子，具有促血管增生和增強血管通透的功能，為目前研究較多的血管因子，也是所知功能最強、作用最直接的血管形成促進因子。有動物研究表明[12]，大鼠在低氧環境中飼養，誘導產生視網膜新生血管，VEGF mRNA 和蛋白的表達在新生血管發生前升高，在新生血管退行后下降，說明了VEGF與新生血管性青光眼血管的新生存在較為密切的相關性，可作為判定藥物療效的標準之一。

眼壓是眼內容物對眼球壁施加的均衡壓力，正常人的眼壓穩定在一定范圍內，保證屈光間質發揮最大光學性能的同時維持了眼球的正常形態，正常眼壓的范圍為10～21 mmHg(1.47～2.79kPa)[13]。眼壓是診斷青光眼的重要依據，在一般情況下，房水生成率，房水排出率及眼內容物的體積三者保持著一種動態平衡，但青光眼可以使房水通道受阻，導致眼壓升高。本研究結果顯示，在治療后，2組患者的眼壓均有所下降(P<0.05)，說明治療均有效果，但與對照組患者相比，實驗組患者下降的更明顯(P<0.05)，證明了雷珠單抗臨床療效更為顯著。

本實驗通過對66例新生血管性青光眼患者血清及房水IL-6、VEGF以及眼壓水平的檢測結果進行分析，證實了雷珠單抗能夠顯著降低新生血管性青光眼患者的臨床療效。在下一步研究中，本課題組將進行分子機制方面研究，為本實驗所反映的現象做出進一步論證和分析。

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(編校：王儼儼)

Effect of ranibizumab on serum and aqueous humor levels of IL-6 and VEGF in neovascular glaucoma patients

ZHANG Yi1Δ, JIANG Shu-le1, LIU Ting2, DU Er-gang1

(1. Department of Ophthalmology, The First Hospital Affiliated to Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310006, China; 2. School of Medicine, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310006, China)

ObjectiveTo investigate the effect of ranibizumab on the serum and aqueous humor levels of IL-6 and VEGF in neovascular glaucoma patients.Methods66 neovascular glaucoma patients from our hospital were selected and randomly divided into the control group and experimental group with 33 cases in each group. The control group were treated by atropine, glucocorticoid and panretina/photocoagulation (PRP). The experimental group were treated on the basis of the control group with monoclonal antibody injection. Two groups were treated for four times. The aqueous IL-6, VEGF and intraocular pressure were tested and compared pre-and post-treatment.ResultsCompared with pre-treatment in two groups, the IL-6 and VEGF levels in serum and aqueous humor were lower (P<0.05), the intraocular pressure were lower(P<0.05). Compared with the control group post-treatment,the IL-6 and VEGF levels in serum and aqueous humor were lower(P<0.05),the intraocular pressure were lower(P<0.05).ConclusionThe results suggest that the mechanism may be related to the decrease of serum levels of IL-6 and VEGF in the serum and aqueous humor of the neovascular glaucoma patients.

ranibizumab; neovascular glaucoma; IL-6; VEGF

浙江省中醫藥科技計劃項目(2015ZA086)

張怡，通信作者，女，碩士，主治醫師，研究方向：白內障、眼底病等，E-mail：zhangyihz000@163.com。

R775

A

1005-1678(2016)02-0151-03