靈芝化學成分的研究

陳　玉, 劉　流, 牛艷芬

(中南民族大學 化學與材料科學學院，武漢 430073)

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靈芝化學成分的研究

陳玉, 劉流, 牛艷芬

(中南民族大學 化學與材料科學學院，武漢 430073)

摘要為研究靈芝的化學成分，利用溶劑提取法，對正、反相硅膠柱層析法和半制備高效液相色譜法對其進行了分離純化，并根據理化性質和現代波譜技術進行了結構鑒定.結果表明：從靈芝乙醇提取物分離得到的10個化合物，分別鑒定為antiquol C (1)、ganoderic acid Y (2)、7-oxo-ganoderic acid Z3 (3)、7-oxo-ganoderic acid Z (4)、ganoderic acid B9 (5)、ganoderic acid C2 (6)、3β,7β-dihydroxy-11,15,23-trioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid (7)、ergosterol (8)、5α,8α-epidioxyergosta-6, 22-dien-3β-ol (9)、6, 9-epidioxy-ergosta-7,22-dien-3β-ol (10)，其中化合物(1)為首次從該屬植物中分離得到.

關鍵詞靈芝；化學成分；三萜；甾體

靈芝(Ganodermalucidum)為多孔菌科赤芝或紫芝的干燥子實體，別名有萬年蕈、瑞草、秀草等，是我國一種傳統的的大型藥用真菌，屬于擔子菌綱(Basidiomycetes)多孔菌科(Polyporaceae)靈芝亞科(Ganodermatoideae)靈芝屬(Ganoderma)[1].傳統中醫認為靈芝具有補肝益氣、延年益壽的功效.近年來從靈芝中分離到三萜類化合物已有100種，其中三萜類化合物主要是高度氧化的羊毛甾烷衍生物[2].現代藥理研究表明：靈芝三萜類化合物具有抗腫瘤、抗病毒等作用[3].為了進一步深入了解其有效成分，本文對靈芝的三萜和甾醇成分進行了系統的研究.

1材料與方法

1.1儀器與試劑

核磁共振波譜儀(Bruker AM-400型, 布魯克公司)，高效液相色譜儀(Ultimate 3000半制備型, 美國戴安公司)，VWD，DAD檢測器，半制備型色譜柱為5C18-MS-II (250 mm×10 mm, 5 μm).

靈芝購于云南西雙版納，由云南西雙版納傣族自治州民族醫藥研究所趙應紅主任藥師鑒定為靈芝屬(Ganoderma)靈芝(G.Lucidum).50 μm反相材料ODS(日本YMC公司)；300～400目硅膠和硅膠H-TLC薄層預制板(青島海洋化工廠)，硫酸香草醛顯色劑(硫酸、香草醛、乙醇、水 分別為8 mL、0.5 g、10 mL、20 mL)，色譜甲醇(美國Tedia試劑公司)，其余試劑均為分析純，由國藥集團化學試劑有限公司和天津博迪化工有限公司生產.

1.2提取與分離

取靈芝粉碎后稱重1.4 kg，用95%乙醇室溫浸泡3次，每次24 h，合并3次提取液.真空抽濾得濾液，旋干濃縮，得提取物46.7 g.將此靈芝乙醇提取物經硅膠柱層析分離，用環己烷∶丙酮(50∶1→0∶1)梯度洗脫，TLC檢測后合并相同組分，共收集7個組分(Fr.A～G).Fr.B經過正、反相硅膠柱色譜分離得到化合物8(200 mg)和9(20 mg).Fr.D經過反復的正、反相硅膠柱色譜分離得到化合物1(10 mg)、2(22 mg)、3(19 mg)和4(30 mg).Fr.E經過反復的正相硅膠柱色譜分離得到化合7(6 mg).Fr.F經過反復的正、反相硅膠柱色譜和半制備HPLC得到化合物5(12 mg)、6(4 mg)、10(9 mg)，其結構式見圖1.

圖1　化合物1～10的結構式Fig.1　Chemical structures of compound 1-10

2結果

2.1結構鑒定

化合物1：白色粉末，分子式為C30H48O,1H-NMR (400MHz, C5D5N)：δH5.61(1H, d,J=5.6 Hz, H-7), 5.44(1H, d,J=5.6 Hz, H-11), 5.27(1H, t,J=7.0 Hz, H-24), 3.51(1H, dd,J=8.4, 7.1 Hz, H-3), 1.71(3H, s, H-26), 1.66(3H, s, H-27), 1.24(3H, s, H-28), 1.16(3H, s, H-19), 1.12(3H, s, H-29), 1.02(3H, s, H-30),1.00(3H, d,J=5.2 Hz, H-21), 0.71(3H, s, H-18).13C-NMR(100 MHz, C5D5N)數據見表1.以上數據與文獻報道基本一致[4]，故鑒定化合物1為antiquol C.

化合物2：白色粉末，分子式C30H46O3,1H-NMR(400MHz, C5D5N)：δH5.61(1H, d,J=4.8 Hz, H-7), 5.44(1H, d,J=5.6 Hz, H-11), 5.23(1H, m, H-24), 3.50(1H, dd,J=8.6, 6.9 Hz, H-3), 2.15(3H, s, H-27), 1.25(3H, s, H-29), 1.17(3H, s, H-19), 1.13(3H, s, H-28), 1.03(3H, s, H-30), 1.00(3H, d,J=6.4Hz, H-21), 0.70(3H, s, H-18).13C-NMR(100 MHz, C5D5N)數據見表1.以上數據與文獻報道基本一致[4]，故鑒定化合物2為ganoderic acid Y.

化合物3：白色粉末，分子式為C30H46O5,1H-NMR(400MHz, C5D5N)：δH6.35(1H, m, H-24), 4.98(1H, d,J=5.6 Hz, H-15), 3.57(1H, dd,J=11.6, 4.4 Hz, H-3), 2.12(3H, s, H-27), 1.72(3H, s, H-19), 1.24(3H, s, H-29), 1.19(3H, s, H-18), 1.15(3H, s, H-28), 1.12(3H, s, H-30), 1.01(3H, d,J=5.2 Hz, H-21).13C-NMR(100 MHz, C5D5N)數據見表1.以上數據與文獻報道基本一致[5]，故鑒定化合物3為7-oxo-ganoderic acid Z3.

化合物4：白色粉末，分子式為C30H46O4,1H-NMR(400MHz, C5D5N)：δH6.13(1H, m, H-24), 3.47(1H, dd,J=10.8, 6.0 Hz, H-3), 2.14(3H, s, H-27), 1.17(3H, s, H-19), 1.14(3H, s, H-29), 1.12(3H, s, H-28), 1.08(3H, s, H-30), 1.023H, d,J=6.0 Hz, H-21), 0.72(3H, s, H-18).13C-NMR(100 MHz, C5D5N)數據見表1.以上數據與文獻報道基本一致[6]，故鑒定化合物4為7-oxo-ganoderic acid Z.

化合物5：白色粉末，分子式為C30H46O7.1H-NMR(400MHz, C5D5N)：δH4.92(1H, dd,J=8.8, 6.4 Hz, H-15), 4.86(1H, br d,J=6.4 Hz, H-7), 3.56(1H, dd,J=11.6, 4.8 Hz, H-3), 3.48(1H, dt,J=13.6,3.6 Hz, H-1), 3.34(1H, m, H-25), 3.15(1H, dd,J=17.6, 8.8 Hz, H-24), 3.01(1H, br d,J=17.6Hz, H-12), 2.64～2.58(1H,m, H-12), 2.64～2.58(1H, m, H-24), 2.39(1H, dd,J= 16.0, 9.6, H-22), 2.17～2.08(2H, m, H-16), 2.201H, m, H-20), 2.15(1H, m, H-6), 2.08～1.93(2H, m, H-2), 2.01(1H, m, H-5), 1.83(1H, m, H-6), 1.78(1H, m, H-17), 1.62(3H, s, H-30), 1.44(1H, m, H-1), 1.37(1H, d,J=7.2Hz, H-27), 1.35(3H, s, H-28), 1.30(3H, s, H-19), 1.14(3H, s, H-29), 0.99(3H, d,J=6.8 Hz, H-21), 0.97(3H, s, H-18).13C-NMR(100 MHz, C5D5N)數據見表1.以上數據與文獻報道基本一致[7]，故鑒定化合物5為ganoderic acid B9.

化合物6：白色粉末，分子式為C30H46O7.1H-NMR(400MHz, C5D5N)：δH5.26(1H, br t,J=8.0 Hz, H-15), 4.99(1H, dd,J=10.0, 8.4 Hz, H-7), 3.54(1H, dd,J=11.2, 4.4 Hz, H-3), 3.31(1H, m, H-25), 3.13(1H, m, H-1), 3.09(1H, m, H-24), 3.02(1H, br d,J=15.2Hz, H-12), 2.70(1H,J=15.2Hz, H-12), 2.57(1H, m, H-22), 2.56(1H, m, H-24), 2.41(1H, m, H-6), 2.31(1H, m, H-22), 2.18(1H, m, H-20), 2.14～1.94(2H, m, H-16), 1.98(1H, m, H-6), 1.92(2H, m, H-2), 1.91(1H, m, H-17), 1.55(3H, s, H-18), 1.53(3H, s, H-28), 1.37(1H, d,J=6.8Hz, H-27), 1.29(3H, s, H-30), 1.19(1H, m, H-5), 1.15(1H, m, H-1), 1.12(3H, s, H-29), 0.98(3H, d,J=6.0 Hz, H-21).13C-NMR(100 MHz, C5D5N)數據見表1.以上數據與文獻報道基本一致[8]，故鑒定化合物6為ganoderic acid C2.

化合物7：白色粉末，分子式C30H42O7.1H-NMR(400MHz, C5D5N)：δH5.98(1H, s, H-16), 5.14(1H, dd,J=9.6, 8.4 Hz, H-7), 3.53(1H, dd,J=7.2, 4.8 Hz, H-3), 3.26(1H, m, H-1), 3.13(1H, m, H-12), 3.12(1H, m, H-24), 3.10(1H, m, H-20), 3.09(3H, d,J=7.2 Hz, H-27), 2.95(1H, dd,J=17.7, 4.4 Hz, H-22), 2.82(1H, dd,J=17.2, 6.4 Hz, H-22), 2.73(1H,J=16.0 Hz, H-12), 2.69(1H, m, H-25), 2.56(1H, dd,J=17.2, 4.4 Hz, H-24), 2.36(1H, dd,J=13.2, 7.6 Hz, H-6), 1.92(2H, m, H-2), 1.87(1H, m, H-6), 1.48(3H, s, H-18), 1.41(3H, s, H-19), 1.29(3H, s, H-28), 1.25(1H, m, H-1), 1.18(1H, m, H-5), 1.11(3H, s, H-29), 1.10(3H, d,J=7.2 Hz, H-21).13C-NMR(100 MHz, C5D5N)數據見表1.以上數據與文獻報道基本一致[9]，故鑒定化合物7為3β,7β-dihydroxy-11,15,23-trioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid.

化合物8：白色粉末，分子式C28H44O,1H-NMR(400MHz, C5D5N)：δH5.73(1H, dd,J=6.4, 2.0 Hz, H-6), 5.52(1H, dd,J=5.6, 2.8 Hz, H-7), 5.29(1H, m, H-23), 5.25(1H, m, H-22), 3.97(1H, m, H-3), 1.11(3H, d,J=6.4 Hz, H-21), 1.06(3H, s, H-19), 1.00(3H, d,J=7.2 Hz, H-28), 0.90(3H, d,J=6.8 Hz, H-27), 0.89(3H, d,J=6.8 Hz, H-26), 0.69(3H, s, H-18).13C-NMR(100 MHz, C5D5N)數據見表1.以上數據與文獻報道基本一致[10]，故鑒定化合物8為ergosterol.

化合物9：針狀結晶(甲醇)，分子式為C28H46O3,1H-NMR(400MHz, C5D5N)：δH6.55(1H, d,J=8.4 Hz, H-6), 6.35(1H, d,J=8.4 Hz, H-7), 5.31(1H, m, H-23), 5.22(1H, m, H-22), 4.43(1H, m, H-3), 1.05(3H, d,J=6.4 Hz, H-21), 0.98(3H, d,J=6.8 Hz, H-28), 0.91(3H, s, H-19), 0.89(3H, d,J=6.8 Hz, H-27), 0.88(3H, d,J=6.8 Hz, H-26), 0.79(3H, s, H-18).13C-NMR(100 MHz, C5D5N)數據見表1.以上數據與文獻報道基本一致[11]，故鑒定化合物9為5α,8α-epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol.

化合物10：白色粉末，分子式為C28H44O2,1H-NMR(400MHz, C5D5N)：δH6.36(1H, d,J=5.6 Hz, H-7), 6.10(1H, d,J=4.8 Hz, H-23), 5.77(1H, m, H-22), 4.87(1H, m, H-6), 4.35(1H, m, H-3), 1.56(3H, s, H-19), 1.08(3H, d,J=6.8 Hz, H-21), 0.97(3H, d,J=6.8 Hz, H-28), 0.88(3H, d,J=6.4 Hz, H-27), 0.87(3H, d,J=6.8 Hz, H-26), 0.67(3H, s, H-18).13C-NMR(100 MHz, C5D5N)數據見表1.以上數據與文獻報道基本一致[12]，故鑒定化合物10為6,9-epidioxy-ergosta-7,22-dien-3β-ol.

表1　化合物1～10的13C-NMR數據

3結語

通過對靈芝的系統分離，得到10種化合物，分別鑒定為antiquol C(1)、ganoderic acid Y(2)、7-oxo-ganoderic acid Z3(3)、7-oxo-ganoderic acid Z(4)、ganoderic acid B9(5)、ganoderic acid C2(6)、3β,7β-dihydroxy-11,15,23-trioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid(7)、ergosterol(8)、5α, 8α-epidioxyergosta-6, 22-dien-3β-ol(9)、6, 9-epidioxy-ergosta-7,22-dien-3β-ol(10)，其中化合物1為首次從該屬植物中分離得到，為進一步研究和開發該藥物提供了實驗基礎和理論依據.

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Chemical Constituents ofGanodermalucidum

ChenYu,LiuLiu，NiuYanfen

(College of Chemistry and Materials Science，South-Central University for Nationalities， Wuhan 430074，China)

AbstractTo study the chemical constituents ofGanodermalucidum, the constituents were isolated and purified by the silica gel column chromatography, ODS and semi-preparative HPLC.Their structures were elucidated on the basis of chemical and spectroscopic analysis. Ten compounds were isolated fromG.lucidumand identified as: antiquol C (1), ganoderic acid Y (2), 7-oxo-ganoderic acid Z3 (3), 7-oxo-ganoderic acid Z (4), ganoderic acid B9 (5), ganoderic acid C2 (6), 3β,7β-dihydroxy-11,15,23-trioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid (7), ergosterol (8), 5α,8α-epidioxyergosta-6, 22-dien-3β-ol (9), 6,9-epidioxy-ergosta-7,22-dien-3β-ol (10), among them compound 1 was isolated from the genusGanodermafor the first time.

KeywordsGanodermalucidum; chemical constituents; triterpenoids; steroids

收稿日期2015-09-23

作者簡介陳玉(1970-),女,副教授,博士,研究方向:天然藥物化學, E-mail: chenyuwh888@126.com

基金項目國家自然科學基金資助項目(31370379)

中圖分類號R914.4

文獻標識碼A

文章編號1672-4321(2016)02-0010-05