金水寶膠囊聯合西藥對老年COPD穩定期患者外周血Treg表達的影響

黃　芪　黃　鴻　劉先玲

重慶三峽中心醫院老年科(萬州404000)

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金水寶膠囊聯合西藥對老年COPD穩定期患者外周血Treg表達的影響

黃芪黃鴻劉先玲

重慶三峽中心醫院老年科(萬州404000)

摘要目的：探討老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)穩定期患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+調節性T細胞(Treg)的比例及中成藥金水寶膠囊干預后的影響。方法：選擇在我院老年科住院部及門診的COPD穩定期患者76例，隨機分為治療組41例和對照組35例，兩組在對癥治療的基礎上，治療組加用金水寶膠囊、鹽酸氨溴索片口服，1個療程為4周，對照組僅加用鹽酸氨溴索片口服，用流式細胞儀檢測兩組在治療前后外周血中Treg表達比例的變化，并且選擇同期30例體檢正常的老年人作為健康組。結果：病例組的外周血Treg比例在治療前均高于健康組(P<0.05)，治療組的外周血Treg比例在治療后低于對照組(P<0.05)。結論：Treg細胞在老年COPD發病過程中有重要作用，中藥干預能改善穩定期COPD老年患者體內存在免疫功能紊亂或異常。

主題詞肺疾病，慢性阻塞性/中西醫結合療法金水寶膠囊老年人

慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease，COPD)的發病機制與遺傳易感性、氧化/抗氧化、氣道炎癥等有關，但至今任未真正闡明。T細胞中可以抑制免疫應答反應的細胞群包括CD4+CD25+Foxp3+調節性T細胞(Treg)[1-2]，向下調節CD4+、CD25+T細胞活化與增殖能力，從而免疫負調節功能。在機體內環境穩態中的作用，維持、過激免疫應答及改善自身免疫等。本研究通過檢測中藥治療前后外周血中Treg的水平表達變化，從而探討中藥改善老年患者體內存在免疫功能紊亂或異常狀態的重要性。

臨床資料選擇2014年3月至2015年8月間在我院老年科收治住院和門診隨訪的老年COPD穩定期患者共76例作為病例組，隨機分為治療組41例，其中男23例，女18例，年齡62～86歲平均70.7±6.8歲；對照組35例，其中男19例，女16例，年齡60～82歲平均68.6±7.1歲。選擇同期在我院體檢中心體檢正常的老年人30例為健康組，其中男17例，女13例，年齡63～80歲，平均66.7±5.7歲。臨床納入標準：診斷《慢性阻塞性肺疾病診治指南》(2007年修訂版)中關于穩定期的診斷標準[3]。中醫標準《中醫內科常見病診療指南-中醫病證部分》“肺脹病”進行，穩定期分為：肺脾氣虛證、肺腎氣虛證、肺腎氣陰兩虛證，穩定期以喘息、氣短，乏力或自汗，動則加重為主要表現，臨床辨證大多數符合肺腎氣虛證的特點[4]。

治療方法兩組在一般的對癥處理、護理、氧療等方面相同。針對慢性咳嗽咳痰等癥狀祛痰鎮咳等常規治療；針對氣短呼吸困難等癥狀支氣管擴張劑，必要時加用糖皮質激素。兩組在院期間均長期低流量吸氧以改善氧飽和度。治療組加用金水寶膠囊(成分：發酵蟲草菌粉(Cs-4)，國藥準字：Z108900。0.33g/顆，3顆/次，3次/d)、鹽酸氨溴索片(30mg/次，3次/d)口服，1個療程為4周，對照組僅加用鹽酸氨溴索片口服。

觀察指標Treg的測定：Foxp3及淋巴細胞亞群的測定采用FACS Calibur流式細胞儀(美國，BD)進行檢測。各組受試者均于清晨空腹狀態下使用抗凝負壓真空采血管收集外周靜脈血3mL，使用淋巴細胞分離液分離的靜脈血外周單個核細胞(PMBC)，且標本1h內進行。所使用之單克隆抗體(抗CD4-PerCP、CD25-FITC和各陰性對照IgG)均使用美國BD公司產品，所使用之Foxp3-PE染色緩沖液均美國eBioscience公司產品。取兩支潔凈試管，加入分離后標本液100uL，其次，加入抗人CD4-PerCP/CD25-FITC抗體及各自陰性同型對照IgG各10uL，混勻，避光放置30min(室溫)；加入紅細胞裂解液，避光孵育，用PBS清洗，離心棄上清；然后加入1mL固定/破膜應用液，搖勻避光孵育15min；加入1mL破膜緩沖液，室溫靜置20min，離心棄上清；最后，各試管中均加入5uL的抗Foxp3-PE單抗及各自陰性同型對照IgG，搖勻，4℃避光靜置30min，用2mL破膜緩沖液清洗3遍，分別離心，棄掉上清，加入500uL PBS(4℃預冷)后搖勻上機，以FAC Sort流式細胞儀分選細胞、在所得到的FSC-SSC點圖上選擇理想淋巴細胞群，以Cell Quest軟件分析所得數據，記錄熒光抗體染色陽性細胞的百分比結果。

治療結果確定各組的基本資料包括各組的性別、年齡、淋巴細胞以及CD4+CD25+細胞的比例間差異均無統計學意義(P>0.05)，但病例組在治療前的CD4+CD25+Foxp3+細胞比例與健康組的差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1　各組治療前外周血中調節性T細胞的比例分布

注：與健康組比較，△P<0.05

治療后病例組間調節性T細胞比例的比較兩組受檢者外周血中淋巴細胞、CD4+/CD25+細胞比例，治療組與對照組的差異無統計學意義(P>0.05)，但CD4+CD25+Foxp3+細胞比例，治療組與對照組的差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2　病例組治療后血清中調節性T細胞的比例分布

注：與對照組比較，△P<0.05

討論中醫認為COPD的發病機理以正氣虧虛和呼吸道防御能力下降，而調節性T細胞(regulatory T cell， Treg)是一類有負性調節功能的T細胞亞群，但目前對其發生、成長及遷移等機制尚未真正闡明，其具有免疫功能和免疫抑制的特性。Treg在人和小鼠的外周血及淋巴組織中大約占到CD4+T細胞的5%～10%左右(胸腺內自然發育成熟的天然Treg(nTreg)和誘導性調節T細胞(iTreg))。nTreg大多數為CD4+/CD25+Treg，主要在預防病理性自身免疫反應方面發揮功能。除了CD4、CD25之外，CD4+/CD25+Treg表面還表達有叉狀頭/翅膀狀螺旋轉錄因子(Foxp3)，Foxp3持續作用于Treg，在效應T細胞上低表達，作為特異表達的轉錄因子，是CD4+/CD25+Treg生長、活化、發揮作用的關鍵，常常作為鑒定或篩選的標志[5]。機體免疫異常則容易受到邪氣侵犯而發病，出現咳喘，積液成痰，隨著病情的發展，又常累及其他臟器，如肺病及脾，肺虛及腎，三臟相互虛損，痰濁、水飲、淤血交替為患最終發展成“肺脹”[6-7]。

本文中老年COPD穩定期的患者，與健康組相比，其外周血中CD4+/CD25+Foxp3+調節性T細胞的比例均明顯升高，這表明Treg參與老年COPD的發病，另外老年人免疫系統功能異常或紊亂也導致其較普通人易得慢性感染性疾病，細胞免疫特別是調節性T細胞在COPD的產生、發展中發揮著重要作用[8]。而給予中藥干預治療后，治療組的外周血Treg比例明顯低于對照組，說明COPD肺腎氣虛證者補腎益肺，納氣定喘冬蟲夏草麥角菌科《本草從新》，具精氣，補虛，實腠理，止咳祛痰，研究表明它含有核苷類、多糖類、氨基酸、微量元素、維生素等活性成分，具有調節免疫、抗菌、抗病毒、保肝護腎等藥理作用。COPD是可防可控的疾病，只是目前尚無治愈的辦法，積極預防和提高療效、延緩病情的進展成為COPD防治的關鍵所在，正與中醫“未病防病、既病防變、瘥后防復”的理念不謀而合。通過盡早使用中醫藥進行干預，在COPD穩定期調整體質狀態，做到“正氣存內、邪不可干”，利于減少COPD急性發作。

參考文獻

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[5]張改華，吳娟，李建英，等. NT-ProBNP、CRP及動脈血氣檢測在慢性阻塞性肺疾病急性加重期合并肺動脈高壓中的臨床意義[J].陜西醫學雜志，2014，43(10)：1386-1388.

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(收稿2016-01-23；修回2016-02-21)

【中圖分類號】R563.9

【文獻標識碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7369.2016.07.036