補陽還五湯對小鼠腦出血后腦組織含水量的影響*

常　盼　單海燕　張明陽　張　亮　楊柳青

西安醫學院第二附屬醫院(西安 710038)

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·實驗研究·

補陽還五湯對小鼠腦出血后腦組織含水量的影響*

常盼單海燕△張明陽▲張亮◇楊柳青

西安醫學院第二附屬醫院(西安 710038)

摘要目的：通過研究中醫益氣活血方補陽還五湯對小鼠腦出血腦組織含水量，進一步探討益氣活血中藥作用于腦出血的作用機制。方法：將健康雄性ICR小鼠，隨機分為以下五組： 假手術組、出血組、出血+益氣組、出血+活血組、出血+補陽還五湯組，利用紋狀體注射膠原酶IV建立小鼠腦出血模型，假手術組和出血組以蒸餾水灌胃，出血+益氣組、出血+活血組和出血+補陽還五湯組分別灌服補陽還五湯益氣組分、活血組分及補陽還五湯全方藥物。分別在造模結束后24 h和72 h取材，通過干濕重法檢測腦組織含水量。結果：益氣組、活血組和補陽還五湯組都可以減低小鼠腦出血后24 h 和72 h腦出血基底節區的水腫含量。結論：補陽還五湯主要作用于基底節區以降低其對腦水腫的影響。

主題詞腦出血/中醫藥療法動物實驗小鼠 @補陽還五湯

腦出血(Intracerebral hemorrhage)是一種嚴重危害人類健康的腦血管疾病， 具有較高的發病率、致殘率和病死率[1]。六個月的幸存率只有20%[2]。腦出血的發病率是每年每10萬人口中有10～30人發生腦出血，在世界范圍內，每年有2百萬該病發生[3]。目前，腦出血的治療仍沒有突破性進展。關于腦出血后的大腦損傷機制非常復雜，由于血腫周邊的腦水腫是腦出血后最嚴重的繼發性損傷之一，它的發生和發展是導致腦出血病情發展和惡化的重要原因之一[4-5]。補陽還五湯是我國的傳統醫學名方，具有補氣活血通絡之功效，本實驗通過紋狀體注射膠原酶構建腦出血模型小鼠，觀察補陽還五湯方劑對腦出血腦水腫的影響，腦水腫檢測采用五分法，旨在探討中藥方劑補陽還五湯對腦出血的作用機制，為進一步新藥開發精煉處方提供實驗依據。

1材料與方法

1.1實驗動物與分組健康雄性ICR小鼠74只，體重25～30g，購于西安交通大學實驗動物中心，將動物隨機分為假手術組10只、出血組16只、出血組+益氣組16只、出血+活血組16只、出血+補陽還五湯組16只，假手術組和出血組以蒸餾水灌胃，出血組+益氣組、出血+活血組和出血+補陽還五湯組分別灌服補陽還五湯益氣組分、活血組分及補陽還五湯全方藥物，分別于造模灌胃24 h和72 h后取材。

1.2中藥制備全部生藥材從西安醫學院第二附屬醫院中藥房一次性選購，按以下比例進行煎制，益氣活血組：補陽還五湯全方(黃芪、當歸、赤芍、紅花、川芎、地龍、桃仁按20∶3∶3∶3∶2∶3∶3的比例)；益氣組：補陽還五湯益氣成分(黃芪按上述比例)；活血組：補陽還五湯活血成分(當歸、赤芍、地龍、川芎、桃仁、紅花按3∶3∶3∶2∶3∶3的比例)。用蒸餾水兩次水煎，濃縮為1．54，0．81，0.73g/mL，4℃保存備用。

1.3腦出血模型制備小鼠稱重后麻醉，剝離右側顱頂骨膜，固定于小鼠腦立體定位儀上，用顱骨鉆刺一小孔，微量進樣器于左側紋狀體內注射膠原酶IV，深度為3.5 mm，于5 min內均勻注入后，留針5 min，然后拔針。

1.4試劑和儀器膠原酶Ⅶ(collagenaseIV)購于Sigma公司，鼠腦定位儀購于北京眾實科技有限公司。

1.5腦水腫的測定腦水腫的程度可以用腦組織含水量來表示。具體方法如下，小鼠出血后分別在24 h和72 h斷頭取腦后，迅速取出腦組織，去除嗅球和腦干，放于水平面，然后沿正中線切開，分離腦皮質和紋狀體。小腦作為參考標準也予以測重。分離得到五部分腦組織：傷側及對側腦皮質，傷側及對側紋狀體，小腦。迅速將腦組織放到電子精密天平上稱重得到腦組織的濕重，并記錄，隨后，將腦組織放入100℃的烘箱內，24 h或72 h后取出腦組織并測量干重。腦組織含水量(%)的計算方法如下：(濕重-干重)/濕重×100。

2結果

2.1腦出血24 h后腦組織含水量變化出血組與假手術組相比，基底節區腦組織含水量都明顯增加，而在皮質、對側皮質，對側基底節和小腦區域，出血各組與假手術組腦組織含水量無統計學意義。出血+補陽還五湯組與出血+生理鹽水組相比，降低基底節腦組織含水量，而出血+益氣組或出血+活血組與出血+生理鹽水組相比，均沒有降低腦組織含水量。詳見表1。

2.2腦出血72 h后腦組織含水量變化見表2。

表1　腦出血24 h后各組腦組織含水量變化情況

注：與假手術組相比，△P<0.05；與出血+生理鹽水組相比，▲P<0.05

表2　 腦出血72 h后各組腦組織含水量變化情況

注：與假手術組相比，△P<0.05；與出血+生理鹽水組相比，▲P<0.05

3討論

清代名醫王清任在《醫林改錯》中指出，補陽還五湯具有補氣活血通絡的功效，在中華醫學的運用中發揮積極的治療作用，尤其是在腦血管等氣虛血瘀相關疾病中具有重要作用，但一直缺乏有力的理論證據。

腦出血是是一種嚴重危害人體健康和生活質量的臨床常見腦血管疾病，具有較高的致死率和致殘率[1-3]。據文獻報告，腦出血后，除出血灶本身會造成的損傷外，還會出現一系列繼發性腦組織損傷，這些繼發性損傷與炎癥反應、血紅蛋白裂解產生的毒性物質、細胞壞死和凋亡、凝血素導致的凝血連鎖反應等病理生理機制有關，這些病理過程會引起腦水腫、腦實質內神經血管單元及血腦屏障的破壞，從而造成嚴重的神經損傷及遲發性死亡的發生[6-7]。為了減輕腦出血后的再次損傷對患者預后的影響，關于腦出血后腦組織損傷的病理生理學機制及對其治療手段的研究成為了近年來人們關注的熱點。前期有實驗發現補陽還五湯可以降低腦水腫程度[8]，但是具體作用機制不清楚，為此在本次研究中，我們通過將中藥方劑補陽還五湯作用在小鼠腦出血模型上，并采取將腦組織分為五個部分，分別檢測腦水腫含量的變化，結果發現，補陽還五湯在腦出血24 h和72 h可以緩解基底節區腦水腫程度，而對其他部分腦水腫含量沒影響，說明補陽還五湯主要作用于腦出血基底節區。為進一步研究活血化瘀中藥在腦水腫治療中的作用機制，本實驗我們將補陽還五湯其中的益氣成分和活血成分，分別觀察其對腦出血中腦組織中不同部位水腫的影響，結果發現補陽還五湯中的益氣和活血成分都有助于降低基底節區腦水腫程度。

綜上所述，說明補陽還五湯主要作用于腦出血基底節區，這為活血化瘀中藥治療腦出血提供基礎實驗依據。同時也為傳統中藥治療運用于實際臨床提供了理論支持。

參考文獻

[1]Egashira Y， Hua Y， Keep RF， et al. Intercellular cross-talk in intracerebral hemorrhage [J].Brain Res， 2015，1623：97-109.

[2]Adeoye O， Broderick， JP.Advances in the management ofintracerebral hemorrhage. NatRevNeurol[J].2010， 6(11)： 593-601.

[3]Xi G， KeepRF.Intracerebral hemorrhage： mechanismsand therapies. TranslStroke Res [J].2012， 3：1-3.

[4]XiG，KeepRF，HoffJT. Mechanisms of braininjury after intracerebral haemorrhage[J]. Lancet neurology， 2006， 5(1)：53-63.

[5]Adeoye O， Clark JF， Khatri P， et al. Do current animal models of intracerebral hemorrhage mirror the human pathology [J]. Translational stroke research， 2011， 2(1)：17-25.

[6]Laurite M，Dreier JP，Fabricus M，et al.Clinical relevance of cortical spreading depression in neurological disorders：migraine，malignant stroke，subarachnoid and intracranial hemorrhage，and traumatic brain injury[J].J Cereb Blood Flow Metab，2011，31(1)：17-35.

[7]林琇.腦出血后周圍組織繼發腦水腫病理機制研究進展[J].中國醫藥科學，2015，5(2)：33-35.

[8]孫皓，郭富強，王多姿， 等.補陽還五湯化裁對大鼠腦出血后腦水腫的影響[J].中國醫藥導報，2013，10(12)：22-26.

(收稿2016-03-16；修回2016-04-08)

The effect of Buyang Huanwu Decoction on brain water content afterintracerebral hemorrhage in mice

Second Affiliated Hospital of Xi’an Medical College(Xi’an 710038)

Chang PanShan HaiyanZhang Mingyanget al

ABSTRACTObjective： To investigate the effects of BuyangHuanwu Decoction ( BHD) from traditional Chinese drug on brain water content after intracerebral hemorrhage (ICH) in mice， further explore the possible therapeutic mechanism of traditional Chinese drug in intracerebral hemorrhage.Methods： Male ICR mice were randomly divided into sham operation group，ICH models group，qi-tonifyingtherapy group，stasis-eliminating therapy group，BHD therapy group.ICH model was established by intracerebral stereotactic injection of collagenaseIV．Sham group and the model group were given distilled water by intragastric administration.tonifyingqi group，eliminating stasis groupand BHD group were given the decoction of qi-tonifying herbs， the decoction of eliminating stasis herbs and BHD respectively.The brain water contents determination was evaluatedby dry/wet method at 24 h and 72 h after theoperation. Results：The decoction of qi-tonifying herbs， the decoction of eliminating stasis herbs and BHD can reduce the brain basal ganglia water contents after ICH in mice at 24 h and 72 h.Conclusion： BHD play a main rolein brain basal ganglia after ICH in mice.

KEY WORDSCerebral Hemorrhage/traditional Chinese medicine therapyAnimal ExperimentationMice @Buyang Huanwu Decoction

通訊作者：△蘇州市立醫院北區(蘇州215008)

【中圖分類號】R743.34

【文獻標識碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7369.2016.07.079

*國家自然科學基金(81301039)

中國博士后科學基金(152865)

陜西省教育廳專項科研資助項目(15JK1617)

蘇州市科技發展計劃項目 (SYSD2015119)

西安醫學院第二附屬醫院科研項目(16KY0102)

▲蘇州大學醫學部(蘇州215123)

◇西安航天總醫院(西安710100)