TRAF6基因表達與非小細胞肺癌EGFR突變患者臨床EGFR-TKIs治療療效的關系

胡卉華 許 凌 徐海鵬 林 根 王 強 何志勇 林 動 林景輝（福建省腫瘤醫院胸部腫瘤內科，福建 福州 350000）

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TRAF6基因表達與非小細胞肺癌EGFR突變患者臨床EGFR-TKIs治療療效的關系

胡卉華 許 凌 徐海鵬 林 根 王 強 何志勇 林 動 林景輝
（福建省腫瘤醫院胸部腫瘤內科，福建 福州 350000）

【摘要】目的 探討TRAF6表達與EGFR突變NSCLC患者EGFR-TKIs治療療效的相關性。方法 對64份NSCLC病理組織標本分別進行免疫組化檢驗，測定TRAF6及NF-κB-p65表達，觀察其相關性并分析對遠近期預后療效的影響。結果 TRAF6基因擴增后，NF-κB-p65活化率明顯提高，但近期總有效率與PFS顯著降低，組間比較差異具有統計學意義（P<0.05）。結論 TRAF6基因擴增與NF-κB組成性活化具有正相關性，可影響EGFR突變NSCLC患者EGFR-TKIs治療的遠近期療效。

【關鍵詞】非小細胞肺癌；EGFR-TKIs；TRAF6；NF-κB

目前，表皮生長因子受體絡氨酸激酶抑制劑（EGFR-TKIs）被認為是表皮生長因子受體（EGFR）活性突變非小細胞肺癌患者基金項目：福建省衛生廳青年課題2013-2-8；國家臨床重點專科建設項目資助

（NSCLC）的有效治療方式[1]，本研究針對EGFR突變NSCLC患者開展腫瘤壞死因子受體相關因子6（TRAF6）檢驗，分析TRAF6與核因子-κB（NF-κB）組織性活化、EGFR-TKIs治療近期療效及無進展生存時間（PFS）的相關性，報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料：選取2010年1月至2012年1月本院收治的NSCLC患者64例，其納入標準為：①組織病理診斷獲得確診，均為腺癌，并將其手術切除病理組織標本作為實驗材料；②存在EGFR活性突變；③手術前均未給予EGFR-TKIs治療。64例患者中男性36例，女性28例，年齡46～74歲，平均（59.6±4.9）歲。

1.2 方法：鼠抗人TRAF6單克隆抗體（SANTA CRUZ）、研究試劑包括鼠抗人NF-κB-p65單克隆抗體（CST）、免疫組化試劑盒（VECTOR）。采用免疫組化法測定TRAF6與NF-κB-p65表達，常規免疫組化染色，陰性對照為PBS替代一抗，內參照陽性對照為淋巴細胞陽性染色。免疫組化試劑A液中加入3% H2O2，孵育10 min，PBS沖洗；B液孵育10 min，加入一抗待檢，加入二抗孵育10 min，PBS沖洗；D液孵育10 min，PBS沖洗，DAB顯色，蘇木素襯染。TRAF6測定標準為：陽性細胞染色程度為無染色計1分、輕度染色計2分、中度染色計3分、高度染色計4分，染色細胞數量占比≤25%計1分，占比為26%～50%計2分，占比為51%～75%計3分，占比＞75%計4分，合計分值2分為陰性，3～5分為弱陽性，4～6分為陽性，7～8分為強陽性。NF-κB-p65測定標準為：陽性細胞染色程度為無染色計0分，強度低于內參照染色計1分，強度相似于內參照染色計2分，強度高于內參照染色計3分，陽性染色細胞數量＞50%且染色程度評分為2～3分為組織性活化。

1.3 療效標準：臨床近期療效參照RECIST1.1評價標準，包括完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、病變穩定（SD）與病變進展（PD），其中CR+PR為總有效率，PFS為EGFR-TKIs治療首日至病情進展與死亡的時間。

1.4 統計學方法：采用SPSS 19.0統計學軟件，計量資料以（±s）表示，行單因素方差檢驗，P<0.05為具有統計學意義。

2 結 果

伴隨TRAF6基因表達增強其NF-κB-p65活化率明顯提高（表1），但近期總有效率顯著降低（表2），自TRAF6陰性患者PFS為（24.3±3.7）個月，弱陽性患者PFS為（19.2±4.1）個月，陽性患者PFS為（12.8±3.3）個月，強陽性患者PFS為（8.4±2.9）個月（圖1）。其NF-κB-p65活化率與遠近期療效組間比較差異均具有統計學意義（P<0.05）。

表1 不同TRAF6表達患者NF-κB-p65活化及遠近期療效比較

表2 不同TRAF6表達患者近期療效比較[n（%）]

圖1 不同TRAF6表達患者PFS分布

3 討 論

目前，大量臨床研究均已證實EGFR活性突變是影響NSCLC患者采用EGFR-TKIs治療的有效預測分子標志物，其臨床治療有效率高達70%～80%，使得EGFR-TKIs在NSCLC患者臨床治療中受到廣泛認可[2]，部分報道已指出該種方式為EGFR活性突變NSCLC患者的一線治療方案[3]。但在EGFR-TKIs治療中NF-κB組成性活化會嚴重影響其預后療效，新近研究表示TRAF6為NF-κB中上游信號分子，且NSCLC患者經常存在TRAF6擴增情況，促使NF-κB組成性活化而影響EGFR-TKIs治療效果[4]。TRAF6主要為泛素連接酶，是NF-κB信號途徑中關鍵上游信號分子，對細胞質內諸多功能信號起到接頭作用，可決定細胞內功能信號開啟，介導信號分子活化從而影響NF-κB組成性活化[5-6]。王敏等[7]研究通過PCR技術擴增TRAF6截短體編碼基因，經熒光素酶報告表現TRAF6可增強NF-κB信號通路，從而影響NF-κB活化。 本次研究中針對64例EGFR突變NSCLC組織標本開展了TRAF6與NF-κB檢驗，通過結果觀察可見TRAF6表達增強后其NF-κB-p65活化率也顯著升高；同時，伴隨TRAF6表達逐漸增強患者的近期總有效率與PFS均顯著降低。證實TRAF6基因擴增與NF-κB組成性活化具有正相關性，可影響EGFR突變NSCLC患者EGFR-TKIs治療的遠近期療效，TRAF6基因擴增可作為EGFR-TKIs療效的不良預測因子。根據研究結果分析，筆者認為TRAF6基因可作為EGFR突變患者EGFR-TKIs臨床療效的重要不良預測因子，臨床開展EGFR-TKIs治療時可首先篩查TRAF6擴增情況，以積極促進NSCLC患者的臨床治療效果。

綜上所述，TRAF6基因擴增可增強NF-κB組成性活化，進而對EGFR突變NSCLC患者行EGFR-TKIs治療的遠近期療效均有影響。

參考文獻

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[2] 張龍富,張新.EGFR抑制劑在非小細胞肺癌中的應用[J].上海醫藥,2015,36(15):14-18.

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[4] 劉宇晶,劉暢,龍彥,等.非小細胞肺癌患者治療前后血清CEA和CYFRA21-1水平與EGFR突變及EGFR-TKI療效的關系[J].中華檢驗醫學雜志,2015,38(6):407-411.

[5] Liang YC,Wu HG,Xue HJ,et al.Resistance to Gefitinib of Human Lung Adenocarcinoma H1975 Cells[J]. of Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci,2013,33(6):845-851.

[6] Qin BM,Chen X,Zhu JD,et al.Identification of EGFR kinase domain mutations among lung cancer patients in China:implication for targeted cancer therapy[J].Cell Research,2005,15(3):212-217.

[7] 王敏,王曉輝,唐劉君,等.TRAF6截短體的構建及其對NF-κB信號通道的影響[J].安徽醫科大學學報,2011,46(11):1113-1116.

中圖分類號：R734.2

文獻標識碼：B

文章編號：1671-8194（2016）09-0029-02