輔助性T細(xì)胞因子在不穩(wěn)定型心絞痛發(fā)病機(jī)制中的作用*

陳興　鐘赟　 徐米清　許博裳　宮雅南　黃淑妍　肖新懷　羅輝遇

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輔助性T細(xì)胞因子在不穩(wěn)定型心絞痛發(fā)病機(jī)制中的作用*

陳興①鐘赟①徐米清①許博裳①宮雅南①黃淑妍①肖新懷①羅輝遇①

【摘要】目的：探討血漿1型輔助性T細(xì)胞/2型輔助性T細(xì)胞（Th1/Th2）失衡在不穩(wěn)定型心絞痛（UAP）發(fā)病中的作用。方法：選擇2012年6月-2014年6月本院收治的20例UAP患者和20例穩(wěn)定型心絞痛（SAP）患者，另選取20例健康體檢者作為對(duì)照組。采用酶法檢測(cè)血清甘油三酯和總膽固醇等生化指標(biāo)，ELISA試劑盒檢測(cè)Th1細(xì)胞因子干擾素-γ（IFN-γ）和Th2細(xì)胞因子白介素4（IL-4）的血漿蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：對(duì)照組和SAP組患者的血漿IFN-γ和IL-4蛋白濃度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與對(duì)照組和SAP組相比，UAP組血漿IFN-γ水平和Th1/Th2比值均明顯升高，而IL-4水平明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：UAP患者Th1細(xì)胞活性升高，Th2細(xì)胞活性降低，Th1/Th2亞群失衡可能在UAP的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。

【關(guān)鍵詞】心絞痛；不穩(wěn)定型；輔助性T細(xì)胞；細(xì)胞因子

①?gòu)V州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院廣東廣州510260

First-author’s address：The Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University，Guangzhou 510260，China

不穩(wěn)定型心絞痛（UAP）是指介于穩(wěn)定型心絞痛（SAP）與急性心肌梗死之間的心肌缺血癥候群，是活動(dòng)性冠狀動(dòng)脈硬化斑塊突然破裂、血栓形成、冠脈狹窄加重的結(jié)果。近年的研究表明，炎癥和免疫反應(yīng)可能是易損斑塊破裂的關(guān)鍵因素，輔助性T細(xì)胞（Th）、自然殺傷細(xì)胞和細(xì)胞毒性細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞參與了動(dòng)脈粥樣斑塊形成和發(fā)展［1-3］。Th主要包括Th1和Th2兩種功能不同的亞群，正常狀態(tài)下，Th1和Th2處于動(dòng)態(tài)平衡中，而Th1/Th2失衡已被證實(shí)與多種炎癥及變態(tài)反應(yīng)性疾病密切相關(guān)［4-5］。本研究選擇Th1、Th2分泌的細(xì)胞因子干擾素-γ（IFN-γ）和白細(xì)胞介素-4（IL-4）作為主要檢測(cè)指標(biāo)，研究Th1/Th2亞群失衡與UAP發(fā)病的關(guān)系。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2012年6月-2014年6月本院門(mén)診或住院收治的冠心病患者40例，均曾行冠狀動(dòng)脈造影或冠狀動(dòng)脈CT血管造影檢查明確冠心病診斷。其中，SAP患者20例，男11例，女9例，年齡48～70歲，符合加拿大心血管協(xié)會(huì)SAP分級(jí)Ⅱ或Ⅲ級(jí)診斷標(biāo)準(zhǔn)；UAP患者20例，男10例，女10例，年齡53～70歲，符合Braunwald分級(jí)Ⅱ或Ⅲ級(jí)，入院前24h內(nèi)曾出現(xiàn)靜息性胸痛，心電圖檢查顯示一過(guò)性ST段壓低或T波倒置，血清肌鈣蛋白陰性。排除糖尿病、心源性休克、自身免疫性疾病、腫瘤、嚴(yán)重肝腎功能不全及嚴(yán)重感染患者，排除就診時(shí)甘油三酯和總膽固醇水平異常升高者。另隨機(jī)入選20例健康體檢者作為對(duì)照組，年齡、性別與冠心病患者均衡。所有研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)。各組研究對(duì)象在性別、年齡、空腹血糖（BG）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平方面比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1　各組一般資料比較

1.2方法

1.2.1一般資料通過(guò)問(wèn)卷調(diào)查法獲得所有研究對(duì)象的性別、年齡等一般資料。

1.2.2生化指標(biāo)患者均采集此次就診時(shí)的空腹血液標(biāo)本，采用酶法檢測(cè)BG、TC、TG、HDL-C和LDL-C。

1.2.3血漿IFN-γ和IL-4采集患者血樣后，離心收集血漿，檢測(cè)前儲(chǔ)存于-80℃冰箱，待所有研究對(duì)象血樣收集完畢后，采用ELISA試劑盒法（武漢博士德公司）檢測(cè)各組患者血漿IFN-γ和IL-4表達(dá)水平，操作步驟按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0軟件對(duì)所得結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用（±s）表示，多組均數(shù)比較采用方差分析，多組均數(shù)的兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

與對(duì)照組和SAP組比較，UAP組Th1相關(guān)細(xì)胞因子IFN-γ血漿濃度和Th1/Th2比值均明顯升高，而Th2相關(guān)細(xì)胞因子IL-4濃度明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。對(duì)照組與SAP組比較，血漿IFN-γ和IL-4濃度及Th1/Th2比值差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2　各組血漿Th1和Th2相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平比較（±s）

表2　各組血漿Th1和Th2相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平比較（±s）

*與對(duì)照組比較，P＜0.05；△與SAP組比較，P＜0.05

組別　IFN-γ（ng/L）　IL-4（ng/L）　Th1/Th2對(duì)照組（n=20）45.01±28.35　296.18±137.54　0.17±0.09 SAP組（n=20）58.70±30.02　275.42±100.87　0.23±0.13 UAP組（n=20）84.87±13.99*△　221.06±35.15*△　0.39±0.08*△

3　討論

不穩(wěn)定型心絞痛（UAP）是一種高危心臟事件，與不穩(wěn)定性粥樣斑塊密切相關(guān)。動(dòng)脈粥樣硬化是冠心病的病理生理學(xué)基礎(chǔ)，但動(dòng)脈粥樣硬化斑塊如何由穩(wěn)定變?yōu)椴环€(wěn)定的機(jī)制尚不明確。近年的研究表明，動(dòng)脈粥樣斑塊破裂幾乎總是與炎癥共存，動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中含有單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞，這提示炎癥免疫系統(tǒng)的變化與動(dòng)脈粥樣斑塊病變進(jìn)展密切相關(guān)［6-9］。由于炎癥和免疫反應(yīng)與糖尿病、高脂血癥等多種冠心病合并癥密切相關(guān)，本研究排除了糖尿病等自身免疫性疾病患者以及高脂血癥或血脂控制不達(dá)標(biāo)的冠心病患者［10-13］。患者一般資料顯示，各組患者性別、年齡、血糖、血脂比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），以此避免高血糖、高血脂等已知因素對(duì)炎癥指標(biāo)的影響。

動(dòng)脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病，活化的T淋巴細(xì)胞，尤其是CD4+Th細(xì)胞可能存在于動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展的各個(gè)階段。CD4+Th細(xì)胞是人體內(nèi)重要的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，主要包括Th1和Th2兩種功能不同的細(xì)胞亞群。Th1主要分泌IFN-γ、IL-2、IL-12等，主要介導(dǎo)細(xì)胞免疫，參與介導(dǎo)細(xì)胞毒和局部炎癥有關(guān)的免疫應(yīng)答；Th2細(xì)胞主要分泌IL-10、IL-4、IL-5等，主要介導(dǎo)體液免疫，可避免Th1的過(guò)度活化。目前研究表明，Th亞型在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化病變中發(fā)揮重要作用。Methe等［14］對(duì)比研究了SAP患者、急性冠脈綜合征（ACS）患者、無(wú)先兆性心肌梗死患者和正常對(duì)照者的血漿Th1、Th2表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ACS患者的Th1水平與穩(wěn)定型心絞痛（SAP）和無(wú)先兆性心肌梗死比較明顯升高，而Th2水平在各組中無(wú)明顯差異，由此認(rèn)為T(mén)h1的激活可能導(dǎo)致了病變的不穩(wěn)定。Mostafazadeh等［15］篩選了31例UAP患者、27例SAP患者和24例正常對(duì)照者，研究發(fā)現(xiàn)正常對(duì)照人群Th2相關(guān)細(xì)胞因子IL-10水平明顯高于其他各組冠心病患者，而IFN-γ和IL-4在各組患者中均無(wú)明顯差異。韓淑芳等［16］收集了40例ACS患者和18例SAP患者的外周血，檢測(cè)外周血中Th1、Th2相關(guān)細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2的濃度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ACS患者Th1相關(guān)細(xì)胞因子水平高于SAP患者，而Th2相關(guān)細(xì)胞因子水平低于SAP患者，提示Th1/Th2亞群失衡可能參與了ACS的發(fā)生。由此可見(jiàn)，Th1、Th2細(xì)胞因子變化可能與急性冠脈事件相關(guān)，但在其相關(guān)因子表達(dá)水平、發(fā)揮作用方面仍存在較大分歧。

IFN-γ是一種重要的前炎性細(xì)胞因子，主要由活化的Th1產(chǎn)生。它能夠通過(guò)促進(jìn)促炎相關(guān)基因表達(dá)，激活血液中單個(gè)核細(xì)胞靶向遷移至動(dòng)脈血管內(nèi)皮，活化巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞，誘導(dǎo)產(chǎn)生Th17等多種途徑，是參與動(dòng)脈粥樣硬化形成和發(fā)展過(guò)程中的關(guān)鍵步驟［17-18］。Whitman等［19］給予動(dòng)脈粥樣硬化易感的載脂蛋白E基因敲除鼠每日注射重組IFN-γ或安慰劑，30d后注射重組IFN-γ組小鼠動(dòng)脈硬化損傷面積達(dá)對(duì)照組的2倍，這進(jìn)一步證實(shí)了IFN-γ具有促動(dòng)脈粥樣硬化的作用。本研究結(jié)果顯示，UAP患者血漿IFN-γ濃度明顯高于對(duì)照組和SAP組，這表明在排除各干擾因素的前提下，UAP病變本身可能誘導(dǎo)Th1活性的明顯升高。IL-4是一種重要的抗炎細(xì)胞因子，可以通過(guò)抑制Th向Th1亞群分化而避免Th1的過(guò)度激活。Huber等［20］在研究輕度高脂飲食小鼠模型時(shí)發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，給予細(xì)胞因子IL-4可減少80%以上的動(dòng)脈條紋面積，IL-4可能通過(guò)抑制Th1細(xì)胞反應(yīng)阻止早期動(dòng)脈脂質(zhì)條紋的出現(xiàn)。本研究發(fā)現(xiàn)，UAP患者IL-4濃度明顯降低，提示Th2活性降低，對(duì)激活的Th1拮抗能力減弱，從而出現(xiàn)對(duì)Th1過(guò)度激活反應(yīng)的協(xié)同作用。同時(shí)，對(duì)照組和SAP組患者血漿IFN-γ、IL-4濃度水平及兩者比值均無(wú)明顯差異，這進(jìn)一步提示Th1/Th2失衡狀態(tài)可能反映動(dòng)脈粥樣斑塊的不穩(wěn)定狀態(tài)甚至斑塊破裂的過(guò)程，從而預(yù)示冠心病患者病情進(jìn)展，隨時(shí)可能出現(xiàn)急性冠脈事件。因此，在臨床實(shí)踐中可考慮將Th1/Th2失衡狀態(tài)作為冠狀動(dòng)脈易損斑塊的標(biāo)記物之一，早期篩查識(shí)別UAP高危患者，可有利于臨床醫(yī)師及早對(duì)其進(jìn)行合理的危險(xiǎn)分層，有利于高危患者早期得到有效干預(yù)，從而降低病死率，改善患者預(yù)后。

綜上所述，Th1/Th2失衡可能與冠狀動(dòng)脈粥樣斑塊性質(zhì)有關(guān)，與易損斑塊的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，可能在UAP的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。同時(shí)，應(yīng)注意到冠心病發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，干擾因素眾多，本研究入選患者數(shù)量有限，Th1/Th2失衡的實(shí)際臨床應(yīng)用價(jià)值可能仍需在大樣本、長(zhǎng)期、隨機(jī)對(duì)照的臨床研究中進(jìn)一步探討。

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Effect of T Helper Cell Cytokines on Pathogenesis of Unstable Angina Pectoris

CHEN Xing，ZHONG Yun，XU Mi-qing，et al.
Medical Innovation of China，2016，13（13）：017-020

【Abstract】Objective：TodetecttheeffectofimbalanceofplasmaThelpercell（Th）1andTh2on pathogenesisofunstableanginapectoris（UAP）.Method：TwentypatientswithUAPandtwentypatientswith stableanginapectoris（SAP）admittedtoourhospitalfromJune2012toJune2014wererecruitedinthestudy，othertwentyadultsofhealthyexaminationasthecontrolgroup.Serumtriglyceride（TG），totalcholesterol（TC）andsomeotherbiochemicalindicesweredetectedbytheenzymemethod.Plasmaproteinexpressionsweremeasured forinterferon-γ（IFN-γ）ofTh1cytokineandinterleukin-4（IL-4）ofTh2cytokinebyenzymelinked immunosorbentassay（ELISA）.Result：Therewasnosignificantdifferenceonproteinconcentrationofplasma IFN-γandIL-4betweenthecontrolgroupandtheSAPgroup（P＞0.05）.Comparedtotheothertwogroups，patientsintheUAPgrouphadsignificantlyincreasedIFN-γconcentrationandratioofTh1/Th2，butdecreased IL-4concentration，thedifferenceswereallstatisticallysignificant（P＜0.05）.Conclusion：PatientswithUAP sufferfromupregulationofTh1activityanddownregulationofTh2activity，indicatingthatimbalanceofTh1and Th2mayplayanimportantroleintheUAPpathogenesis.

【Key words】Anginapectoris；Unstable；Thelpercell；Cytokine

*基金項(xiàng)目：廣東省廣州市中醫(yī)藥中西醫(yī)結(jié)合科研課題（20132A011031）；廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2013B021800198）

通信作者：陳興

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.13.005

收稿日期：（2016-01-15）（本文編輯：劉蕾）