黃芪注射液對Ⅲ期胃癌的療效及對機體免疫功能的影響

趙為民　劉　林　方　法　楊新輝　王海江

(新疆醫科大學附屬腫瘤醫院胃腸外科,烏魯木齊,830011)

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黃芪注射液對Ⅲ期胃癌的療效及對機體免疫功能的影響

趙為民劉林方法楊新輝王海江

(新疆醫科大學附屬腫瘤醫院胃腸外科,烏魯木齊,830011)

摘要目的:觀察黃芪注射液對Ⅲ期胃癌的療效,并探討其對機體免疫功能的影響。方法:將我院2008年1月至2010年11月60例Ⅲ期胃癌患者隨機分為對照組和觀察組,并將同期30例健康體檢者設為健康對照組。2組Ⅲ期胃癌均接受胃癌根治術,并在術后常規給予化療,以30 d為1個療程,觀察組在常規治療基礎上加用黃芪注射液30 mL加入0.9%氯化鈉溶液250 mL中靜脈滴注,1次/d,連續治療30 d。治療結束后2組胃癌患者的生活質量(Karnofsky評分)及累積生存率。檢測3組患者外周血Th1、Th2細胞百分比變化。結果:1)黃芪注射液可以明顯提高Ⅲ期胃癌患者的生活質量,同時提高患者的累積生存率。2)胃癌患者Th1/Th2比值明顯低于健康對照組,經過治療后2組患者Th1/Th2比值均有所下降,其中觀察組下降的趨勢更明顯(P<0.05)。結論:Ⅲ期胃癌患者體內出現CD4+T細胞平衡失調,黃芪注射液可以通過糾正CD4+T細胞的水平達到提高患者生活質量的目的。

關鍵詞Ⅲ期胃腫瘤;黃芪注射液;Th1/Th2

胃癌具有極高的臨床發病率,其死亡率亦是高居癌癥死因第2位,是人類生命健康的主要殺手。多數癌癥患者確診時已處于中晚期,早期胃癌患者術后5年生存率接近90%[1],而中晚期胃癌患者目前尚未達到根治目標,因此如何提高中晚期胃癌患者術后生存率一直是胃癌臨床研究的熱點話題。近年來中醫以其抗癌效應較強、安全性良好的優勢被醫學界所重視。黃芪具有補益氣血的功效,是諸多醫家治療癌癥術后的良藥。黃芪注射液是由黃芪中提取的有效成分精制而成,我們在臨床實踐研究中發現黃芪注射液可以提高癌癥患者的生活質量,為了進一步探討其作用機制,本團隊進行了一系列研究,具體情況報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料將2008年1月至2010年11月60例Ⅲ期胃癌(根據第7版TNM分期)且接受胃大部分切除術者納入研究,所有患者均為本院初次就診并經組織病理學確診。60例患者隨機分為對照組和觀察組,每組各30例,2組患者的病理類型、組織分級、年齡、病程等一般情況比較差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。同時選擇同期健康體檢者30例設為健康對照組。本研究方案經過醫院倫理學委員會審查批準,所有受試對象均知情同意。

1.2納入、排除及剔除標準納入標準:1)年齡<75歲且為初治患者;2)Karnofsky評分≥70;3)組織病理學確診的胃癌,并參照FIGO分期標準處于IIIa期至IIIc期者;4)無心、腦、腎等重大臟器疾病者,且無轉移;5)簽署知情同意書者。

排除及剔除標準:1)不符合上述標準者;2)具有免疫缺陷性疾病者;3)出現嚴重并發癥者;4)治療過程不予合作者。

1.3治療方法所有患者均接受胃大部分切除術后接受常規化療,亞葉酸鈣200 mg/m2,氟脲苷15 mg/kg,奧沙利鉑130 mg/m2,以30 d為1個療程。與此同時,觀察組患者加用黃芪注射液30 mL配0.9%氯化鈉溶液250 mL靜脈滴注,1次/d,連續治療30例。

1.4觀察指標治療結束后2組胃癌患者的生活質量(Karnofsky評分)及累積生存率。檢測3組患者外周血Th1、Th2細胞百分比變化。

1.5流式細胞檢測

1.5.1主要試劑與儀器RPMI 1640培養基(美國Thermo公司)、胎牛血清(美國Thermo公司);人淋巴細胞分離液(天津市灝洋生物制品科技有限責任公司);佛波酯(PMA)、離子霉素(Ion美國Sigma公司)、布雷桿氏菌素A(BFA美國eBiosclence公司)、破膜劑,酶標儀,流式染色緩沖液CD4-FITC、IFN-γ-PE流式抗體(均購自美國eBiosclence公司)、Transwell小室(0.1 μm北京樂博生物技術有限公司、流式細胞儀(Partec GmbH德國產品型號:YZB/GEM 946-40)。

1.5.2標本采集及細胞分離分別抽取健康對照組、對照組組及觀察組患者治療前后前臂外周抗凝血10 mL,用人淋巴細胞分離液提取外周血單核細胞(PBMC,1×106/mL)400 μL,均分為2份,置于含10%胎牛血清的RPMI 1640培養基中,用于Th1及Th2流式檢測。

1.5.3Th1、Th2細胞流式檢測方法加入刺激劑佛波醇乙酯(PMA)及離子霉素工作液,使其終濃度分別為50 ng/mL、1 μg/mL,置于37 ℃,5% CO2培養箱中培養4～6 h,再加入終濃度為2 μg/mL BFA,再次置于37 ℃,5% CO2培養箱中培養4 h,將培養皿中細胞收集至EP管,用預冷的磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗離心收集細胞,在4 ℃,500×g條件下離心3 min,摒棄上清液。再使用100 μL流式染色緩沖液重懸細胞30 min后加入CD4-FITC流式抗體各5 μL,避光4 ℃環境中孵育30 min,再加入流式染色緩沖液1 mL洗滌1次,在4 ℃,500×g條件下離心3 min,摒棄上清液,再加入600 μL破膜劑,避光4 ℃環境中孵育30 min后預冷PBS沖洗1次,再用100 μL破膜劑重懸細胞后加入2 μL藻紅蛋白標記的各T淋巴細胞亞群相對應的標記物(IFN-γ-PE、IL-4-APC),避光4 ℃環境中孵育30 min,再用1 mL破膜劑沖洗1次后使用預冷PBS 200 μL重懸細胞,操作按試劑盒說明書進行,采用流式細胞儀檢測各細胞。

2結果

2.1Karnofsky評分及生存率比較完成治療后2組胃癌患者Karnofsky評分均較治療前有所提高,其中觀察組提高的趨勢更為明顯(P<0.05)。對照組中位生存期40.23,觀察組為59.12,2組差異具有統計學意義(P<0.05)，見表1及圖1。

圖1　2組生存曲線比較

組別Karnofsky治療前治療后對照組63.87±2.5272.44±1.93觀察組62.91±3.6782.55±3.28t4.333.82P0.410.03

2.2黃芪注射液能顯著上調Ⅲ期胃癌患者外周血中Th1/Th2比值對不同治療組患者外周血進行流式細胞術檢測CD4+IFN-γ+及CD4+IL-4+結果顯示:2組Ⅲ期胃癌CD4+IFN-γ+均較健康對照組降低(|t|=4.19,P=0.002<0.05),且彼此間無統計學意義(|t|=3.92,P=0.228>0.05)。經過治療后2組Ⅲ期胃癌患者CD4+IFN-γ+細胞百分率均有所提升,但仍低于健康對照組(|t|=2.71,P=0.03<0.05),其中觀察組治療后CD4+IFN-γ+細胞百分率提高的幅度明顯高于對照組(|t|=5.18,P=0.016<0.05)。2組Ⅲ期胃癌患者治療前后CD4+IL-4-γ+細胞百分率均與健康對照組差異無統計學意義(P>0.05)。經過治療干預后Th1/Th2比值有所升高,其中觀察組升高的趨勢更明顯,具體見圖2、圖3。

圖2　3組CD4+IFN-γ+細胞百分率變化

圖3　3組CD4+IL-4+細胞百分率變化

3討論

化療是目前治療Ⅲ期胃癌術后的主要治療方式,但是化療藥物均具有明顯的不良反應,如骨髓抑制、外周神經毒性等,甚至可導致心腦血管事件發生,故部分患者因無法耐受不良反應而放棄化療甚至加速死亡[2-4],因此我們認為尋求可行的胃癌術后輔助治療方案具有重要的現實意義。

中醫學認為,化療藥物容易傷津耗氣,對機體的氣血、津液及五臟六腑均具有影響。黃芪屬于中藥經典的“補藥”,屬于“補藥之長”,具有補氣升陽、益衛固表、托毒生肌、利水消腫等功效,其有效成分黃芪總苷在體內動物模型[5]實驗中具有逆轉免疫抑制作用,因此被視為生物反應調節劑。根據目前臨床研究得知,免疫失調是腫瘤的主要病理特征之一,病原體持續刺激下CD4+T細胞分化成調節性T細胞和效應T細胞兩類,介導機體的免疫,同時還調控炎性反應的過程。正常機體Th1/Th2處于動態平衡的狀態,兩類Th細胞通過刺激分泌不同的細胞因子,形成一個龐大的細胞網絡,彼此交叉應答又相互制約。Th1及其相關細胞因子可對細胞產生毒性而發揮殺傷作用,同時介導細胞免疫應答,當Th1表達上調時細胞免疫應答處于明顯優勢,影響了機體的體液免疫應答。Th2及其主要表達的細胞因子通過促進機體抗體的生成而介導體液免疫,當Th2處于優勢時體液免疫較細胞免疫強勢,從而抑制了Thl細胞應答,導致腫瘤免疫逃逸。因此當表達優勢偏重于Th1或Th2時成為Th1/Th2漂移,Th1/Th2漂移的出現可促發腫瘤細胞逃逸機體免疫的監視,從而導致病情發展惡化[6-14]。

本研究通過流式檢測手段發現外周血Th1細胞百分率明顯較健康對照組下降,而Th2濃度表達并未發生明顯改變,Th1/Th2比值明顯下調,提示了中晚期宮頸癌患者外周血中有Th1介導的細胞免疫受到明顯抑制,Th1表達的偏移可能是宮頸癌患者機體腫瘤細胞逃逸免疫抑制的機制之一。同時有學者發現胃癌組織中Th1表達變化不明顯,Th1/Th2比值并未發生改變,這說明腫瘤逃逸現象在外周血表現的更為活躍,外周血發揮的抗腫瘤免疫明顯較微弱。有研究顯示當腫瘤患者體內Th2細胞逐漸向Th1細胞轉化后集體對腫瘤細胞的毒殺作用增強,同時降低了患者出現淋巴結轉移的發生率,這就說明了Th1/Th2比值的檢測是觀察腫瘤發展動向的良好指標。研究中我們對Ⅲ期胃癌術后患者進行治療干預,發現2種干預手段患者Th1細胞百分率均有所上調,因此Th1/Th2比值均有改善,其中聯合使用深度熱療的患者改善更為明顯,因此我們認為黃芪注射液的介入可調整Th1/Th2,促使其恢復Th1/Th2的表達平衡。

總之,我們認為在黃芪注射液可明顯改善Ⅲ期胃癌術后患者的生活質量,其機制可能與提高機體免疫防御作用有關。

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(2015-12-21收稿責任編輯：王明)

The Effect of Huangqi Injection on Stage III Gastric Carcinoma and its Function on Body's Immunity

Zhao Weimin,Liu Lin,Fang Fa,Yang Xinhui,Wang Haijiang

(GastrointestinalSurgeryDepartmentofTumorHospitalaffiliatedtoXinjinagMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

AbstractObjective:To observe the curative effect of Huangqi injection on stage III gastric cancer and its effects on the body's immune function.Methods:A total of 60 patients in stage III gastric carcinoma admitted in our hospital during January 2009 to January 2014 were randomly divided into the control group and the observation group.Also,30 cases of healthy people were recruited as healthy control group.Both of the two groups had received radical operation and took the conventional EOF scheme chemotherapy after surgery.The observation group was given Huangqi injection 30 mL with 250 mL 0.9% sodium chloride solution by intravenous drip on the basis of conventional treatment,1 time/ day,20 days.After treatment,compared the two groups in the aspects of quality of life (Karnofsky score),peripheral blood mononuclear cells,and the accumulative survival rate.Detected the peripheral blood Th1,Th2,and the cell percentage change of the three groups.Results:1) Huangqi injection could obviously increase the quality of life in the patients in stage III gastric cancer,and simultaneously increase the accumulative survival rate of the patients.2) Th1/Th2 ratio in the patients with gastric cancer was significantly lower than that of the healthy control group.However,Th1/Th2 ratio of the two groups both decreased after treatment,and the descending trend in the observation group was more obvious (P<0.05).Conclusion:For patients in stage III gastric carcinoma,CD4+T cells are abnormal and Huangqi injection can improve the quality of the patients' life by regulating the levels of CD4+T cells.

Key WordsStage III gastric carcinoma; Huangqi injection; Th1/Th2 ratio

基金項目:新疆衛生廳醫療衛生科研計劃項目(編號:2010075)

作者簡介:趙為民(1973.03—),男,研究生,副主任醫師,研究方向:胃腸腫瘤的診治,E-mail:misa2007@126.com 通信作者:王海江(1963.01—),男,博士,主任醫師,博士研究生導師,研究方向:胃腸腫瘤的診治,E-mail:doctor677@163.com

中圖分類號：R273

文獻標識碼：A

doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2016.06.011