外周血microRNA-155-5p的表達與急性冠脈綜合征相關性研究*

陜西省人民醫院心血管內三科(西安 710061)

楊禹娟△　張偉靖　邢　坤　田　剛△▲

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外周血microRNA-155-5p的表達與急性冠脈綜合征相關性研究*

陜西省人民醫院心血管內三科(西安 710061)

楊禹娟△張偉靖邢坤田剛△▲

摘要目的：探討ACS患者外周血中miRNA-155-5p的水平及其與冠脈病變嚴重程度的關系。方法：收集ACS患者45例，其中不穩定性心絞痛(UAP)、非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)和ST段抬高型心肌梗死(STEMI)各15例，收集同期行選擇性冠脈造影術示正常者15例作為對照組；根據美國心臟病協會規定的冠脈血管圖像分段評價標準和Gensini 積分系統對冠狀動脈病變嚴重程度進行定量分析；用Real-time PCR法檢測miRNA-155-5p的水平。結果：與健康對照組比較，UAP組、STEMI組、NSTEMI組血液中miR-155-5p 的相對表達量顯著下降(P<0.05)。采用Spearman 秩相關檢驗，miRNA-155-5p的表達與Gensini 評分成負相關(r=-0.678，P=0.000)。 結論：ACS患者外周血中miRNA-155-5p的水平明顯低于正常對照組，miRNA-155-5p的表達與冠脈病變嚴重程度呈負相關。

主題詞心絞痛，不穩定性/診斷心絞痛，不穩定性/血液@microRNA-155-5p

最新研究證實：急性炎癥反應可以導致粥樣斑塊不穩定，致使其破裂，從而導致血栓形成，是誘發急性冠脈綜合征(Acute coronary syndrome，ACS)的重要原因[1～3]。MicroRNA-155(miRNA-155)是一個典型的多功能microRNA，其參與調控B 、T 淋巴細胞和樹突狀細胞的分化，從而對機體的免疫功能造成影響。MiRNA-155包括miRNA-155-5p和miRNA-155-3p兩個亞型。近年來的研究已證實：miRNA-155-5p在免疫反應、炎癥、腫瘤發生等過程中發揮了重要的作用[4]，但尚缺乏在冠心病尤其是ACS方面的研究結果。本研究通過觀察ACS患者外周血中miRNA-155-5p水平，以探討與冠狀動脈病變程度的關系。

對象與方法

1研究對象選擇2014 年7月至2015 年7 月在陜西省人民醫院心血管內三科住院并經冠脈造影檢查證實的ACS患者45例，同期冠脈造影正常的人群15 例作為對照組。診斷參照美國心臟病學會/美國心臟協會ACS 診斷標準，同時行冠狀動脈造影術檢查提示至少有1 支冠狀動脈狹窄程度≥70%。按照臨床癥狀及心電圖改變，將45例ACS患者分為不穩定型心絞痛組(UAP)、非ST段抬高型心肌梗死組(NSTEMI)、ST段抬高型心肌梗死組(STEMI)各15例。所有研究對象均排除嚴重腎臟疾病、嚴重肝臟疾病、自身免疫性疾病、惡性腫瘤、感染性疾病、外周動脈粥樣硬化性疾病、腦血管意外、器官移植術后及其他炎性疾病，并在半年內未發生過心梗者。

2研究方法入選患者于入院次日清晨空腹采靜脈血，酶法檢測空腹血糖(FPG)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C )、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)。將采取的血液加入含有EDTA抗凝劑的抗凝管中混合搖勻、保存備用。采用TaKaRa公司RNAiso Blood試劑盒提取總RNA。采用TaKaRa公司反轉錄試劑盒進行反轉錄，引物序列為：CTTAATGCTAATCGTGATAGGGGT。按照TaKaRa公司SYBR Premix Ex Taq試劑盒要求，在美國Applied Biosystems公司的7500 Real Time PCR儀器進行實時相對定量PCR 檢測，結果采用 Life Tech v20.6軟件分析。以U6作為參照基因，采用2-ΔΔCT方法進行相對定量分析，比較各組基因的表達量。依據1984年美國心臟病協會規定的冠脈血管圖像分段評價標準和Gensini冠脈評分系統將入選病例的冠脈造影結果進行評分[5]。病變部位的系數與狹窄程度的計分相乘，各個乘積相加的總和即為每位患者的Gensini評分。

結果

1四組患者一般資料比較見附表。健康對照組年齡、性別、收縮壓、舒張壓與UAP組、STEMI組、NSTEMI組之間比較無顯著性差異(P>0.05)； UAP組、STEMI組、NSTEMI組的TC、TG、LDL-C水平明顯高于對照組(P<0.05)；而HDL-C明顯低于對照組(P<0.05)。

附表　 四組患者一般資料比較±s)

注：*與健康對照組相比，P<0.05

2miR-155-5p 在ACS各組和健康對照組血液中的表達差異情況見圖1。通過Real-time PCR法檢測miR-155-5p 在UAP組、STEMI組、NSTEMI組和健康對照組血液中的相對表達水平，結果顯示：UAP組、STEMI組、NSTEMI組血液中miR-155-5p的相對表達量顯著低于健康對照組(P<0.05)。

3冠脈病變嚴重程度Gensini評分與血液中miR-155-5p表達水平的關系見圖2。評估冠脈病變的嚴重程度根據冠狀動脈造影結果采用 Gensini 評分方法，以 Gensini評分+1的自然對數(LN)為自變量，以血液中miR-155-5p 的相對表達水平為因變量，對冠脈病變嚴重程度及血液中 miR-155-5p的表達水平進行相關性分析。結果顯示：Gensini 評分+1的自然對數與血液中 miR-155-5p 的表達水平呈負相關(r=-0.678，P=0.000)。

圖1 miR-155-5p 在UAP、STEMI、NSTEMI和健康對照組血液中的表達差異

(注：*與對照相比，P<0.05)

圖2Gensini評分與血液中miR-155-5p 的表達水平的相關性關系

討論

冠心病(Coronary Heart Disease，CHD)是嚴重威脅人類健康的重大疾病，而ACS是其中生活質量最低、臨床癥狀最重、預后最差的類型，給社會帶來了沉重的疾病負擔, 因此對它的預防和治療始終是醫學界關注的重點。急性炎癥反應可以導致粥樣斑塊不穩定，致使其破裂，從而導致血栓形成，是誘發ACS發生的重要原因。

MiRNAs 被確定在心血管領域中是潛在的特異性標志物。最近的研究顯示炎癥與miRNAs具有相關性[6]。miRNA-155屬于miRNAs家族中的一員,是一種多功能的miRNA。已有資料表明：miRNA-155 在自身免疫性疾病、腫瘤發生等過程中發揮了重要的作用[7]，尚缺乏其在CHD尤其是ACS方面的研究。目前越來越多的研究發現：miRNA-155可以影響固有免疫和獲得性免疫過程，在T/B細胞的分化發育中發揮十分重要的作用，同時對免疫細胞進行監管[8]。miRNA-155可以通過抑制樹突狀細胞表面重要分子的表達，如T細胞活化及抗原遞呈、并組成T細胞介導的免疫應答抑制性通路[9]。在單核巨噬細胞，一些促炎因子可上調miRNA-155 的表達，參與了巨噬細胞泡沫化的形成[10]。進一步研究表明：miR-155-5p 可對氧化低密度脂蛋白產生的炎癥反應起到負反饋調節作用。以上研究均提示miR-155-5p可能在ACS的發生發展中扮演著重要的角色。

本研究顯示：在UAP組、STEMI組、NSTEMI組血液中miR-155-5p 的相對表達量顯著低于健康對照組。Gensini評分是一種評估冠脈病變嚴重程度的方法，其評分越高說明冠脈病變越嚴重。本研究顯示：Gensini 評分與血液中 miR-155-5p 的表達水平呈負相關，說明冠脈病變程度越嚴重，miR-155-5p 的表達水平也就越低，提示miR-155-5p參與了ACS的發生與發展，并且有可能是ACS的一種保護因子。但miR-155-5p如何通過調控炎癥反應參與ACS的發生發展尚需進一步研究。

參考文獻

[1]Pashun RA， Frishman WH. Therapeutic role of innovative anti-inflammatory medications in the prevention of acute coronary syndrome[J]. Cardiol Rev, 2015, 23(5):252-260.

[2] Baruch A, Van Bruggen N, Kim JB,etal. Anti-inflammatory strategies for plaque stabilization after acute coronary syndromes[J]. Curr Atheroscler Rep, 2013, 15(6): 327.

[3]王學懂, 侯靜波. 炎癥反應在斑塊穩定性中的作用[J]. 心血管康復醫學雜志, 2012, 21(2): 218-220.

[4]Mashima R. Physiological roles of miR-155[J]. Immunology，2015, 145(3):323-333.

[5]He LY, Zhao JF, Han JL,etal. Correlation between serum free fatty acids levels and Gensini score in elderly patients with coronary heart disease[J]. J Geriatr Cardiol, 2014, 11(1): 57-62.

[6]Heegaard NH, Carlsen AL, Skovgaard K,etal. Circulating extracellular microRNA in systemic autoimmunity[J]. EXS，2015，106:171-195.

[7]Faraoni I, Antonetti FR, Cardone J,etal. miR-155 gene：a typical multifunctional microRNA[J]. Biochim Biophys Acta，2009，1792(6):497-505．

[8]O'Connell RM, Kahn D, Gibson WS,etal. MicroRNA-155 promotes autoimmune inflammation by enhancing inflammatory T cell development[J]. Immunity， 2010，33(4):607-619.

[9]Mao CP, He L, Tsai YC,etal. In vivo microRNA-155 expression influences antigen-specific T cell-mediated immune responses generated by DNA vaccination [J]. Cell Biosci，2011，1(1):3.

[10]Huang RS, Hu GQ, Lin B,etal. MicroRNA-155 silencing enhances inflammatory response and lipid uptake in oxidized low-density lipoprotein-stimulated human THP-1 macrophages[J]. J Investig Med, 2010, 58(8):961-967.

(收稿：2016-02-28)

通訊作者▲

【中圖分類號】R541.4

【文獻標識碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.05.02

The correlation of peripheral blood levels of microRNA-155-5p and the severity of coronary artery disease in the patients with acute coronary syndrome

The Third Department of Cardiovascular Diseases, Shaanxi Provincial People’s Hospital(Xi’an 710061)Yang YujuanZhang WeijingXing Kunet al

ABSTRACTObjective: To explore the correlation of peripheral blood levels of microRNA-155-5p and the severity of coronary artery disease in the patients with acute coronary syndrome. Methods: A total of 45 ACS patients were divided into unstable angina groups (UAP), non ST segment elevation myocardial infarction groups (NSTEMI) and ST elevation myocardial infarction (STEMI) groups. Another 15 healthy individuals served as controls. According to results of coronary angiography, Gensini score was calculated to quantize the severity of coronary arterial stenosis. Real-time PCR assay was used to detect the concentration of microRNA-155-5p in peripheral blood of the ACS patients. Results: Compared with the control groups, the level of miRNA-155-5p in unstable angina groups, non ST segment elevation myocardial infarction groups and ST elevation myocardial infarction groups were significantly decreased (P <0.05). Spearman rank correlation test showed that the Gensini score of ACS patients was positively correlated with microRNA-155-5p (r=-0.678，P=0.000). Conclusion: The level of miRNA-155-5p in peripheral blood of patients with ACS is significantly lower than that in control group and was negatively correlated with the severity of coronary arterial stenosis in ACS groups.

KEY WORDSAngina,unstable/diagnosisAngina,unstable/blood@ miRNA-155-5p

*陜西省自然科學基礎研究計劃項目(2014JM4185)

△西安交通大學第一附屬醫院心內科