變應性鼻炎患者血清抗交叉反應性糖類決定簇IgE水平與血清IgE水平和皮膚點刺試驗的關聯性分析

閆津津，馮珍如，王全桂，王美玲，閆存玲，李志艷，鄭新芝

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·論著·

變應性鼻炎患者血清抗交叉反應性糖類決定簇IgE水平與血清IgE水平和皮膚點刺試驗的關聯性分析

閆津津，馮珍如，王全桂，王美玲，閆存玲，李志艷，鄭新芝

鼻炎,變應性；抗交叉反應性糖類決定簇IgE；免疫球蛋白E；皮膚點刺試驗

閆津津，馮珍如，王全桂，等.變應性鼻炎患者血清抗交叉反應性糖類決定簇IgE水平與血清IgE水平和皮膚點刺試驗的關聯性分析[J].中國全科醫學，2016，19(21)：2499-2504.[www.chinagp.net]

YAN J J,FENG Z R,WANG Q G,et al.Correlation of anti-CCDIgE level with serum IgE level and skin prick test of patients with allergic rhinitis[J].Chinese General Practice，2016，19(21)：2499-2504.

吸入性變應原通過氣管進入人體，可引起包括鼻黏膜、氣管、皮膚等多器官的變態反應病，主要包括花粉、真菌、螨、寵物皮屑、昆蟲等，是一些相對較大、含有多種成分的顆粒，其中僅有一部分有抗原性，誘發機體發生變態反應的特異性抗原一般為含有糖基的蛋白質。結合皮膚點刺試驗(skin prick test，SPT)和血清特異性IgE(specific IgE，sIgE)檢測可極大提高變應原檢出率。由于存在相同或/和相似的抗原決定簇間的交叉反應，血清sIgE陽性對確定變應原較困難。根據國外相關報道，大多數交叉反應導致的假陽性不是因蛋白表位的交叉反應，而是由于機體產生的抗交叉反應性糖類決定簇IgE(anti-cross reactive carbohydrate determinants IgE，anti-CCDIgE)會結合與其有相同表位的變應原所導致的[1]。研究證實，膜翅目毒液和蜜蜂毒液之間的交叉反應大多是由N-糖基鏈(CCDs)引起的，而不是蛋白之間的交叉反應[1]。研究估計，15%～30%的變態反應病患者會產生針對糖基的sIgE，即anti-CCDIgE[2]。41%對花粉過敏的患者產生了針對糖基的sIgE即CCDs，而其SPT顯示為陰性[3]。本研究主要目的是調查anti-CCDIgE在變應性鼻炎患者中的表達情況，通過問診相關因素包括人口學和蜜蜂叮咬等情況，分析變應性鼻炎患者血清anti-CCDIgE表達情況與血清IgE水平和SPT結果的關聯性。

1　對象與方法

1.1納入與排除標準納入標準：變應性鼻炎患者主訴有變應性鼻炎病史或接觸常見變應原后出現相關變態反應病癥狀，SPT(推薦試驗)或/和sIgE陽性；非變應性鼻炎患者主訴變應性鼻炎病史不明顯、接觸常見變應原后無變態反應病相關癥狀，SPT和總IgE(total IgE，tIgE)均為陰性或tIgE升高明確為非變態反應病引起。排除標準：妊娠期女性；有系統性疾病，如糖尿病、惡性腫瘤、肝炎、自身免疫性疾病等；1個月內進

行過外科手術者。

1.2研究對象選取2012年1月—2013年7月北京大學第一醫院確診且符合納入標準的變應性鼻炎患者和非變應性鼻炎患者161例為研究對象。其中男71例，女90例；年齡3～82歲，平均年齡37.8歲；變應性鼻炎121例(變應性鼻炎組)，非變應性鼻炎40例(對照組)。本研究經倫理委員會審批通過(倫理批準號：2012[533])，患者均簽署知情同意書。

1.3主要儀器與試劑EUROBlotMaster免疫印跡法自動操作儀(德國歐蒙醫學實驗診斷股份公司)；抗特應性變應原(中國組合)IgE 10類檢測試劑盒(版本號：DP_3713_A_CN_C03，批準日期：2011年2月25日，德國歐蒙醫學實驗診斷股份公司)；佳能CanoScan LiDE 100掃描判讀系統〔佳能(中國)有限公司〕；ImmunoCAP250系統(賽默飛世爾有限公司-瑞典Phadia公司)；AllergoTM阿羅格吸入性變應原20類(東莞勁芳生物醫藥孵化器有限公司，見表1)。

1.4研究方法

1.4.1收集一般資料包括性別、年齡、蜜蜂叮咬情況等。

1.4.2斑點免疫印跡法(dot-immunoblotting test，dot-IBT)檢測血清sIgE及anti-CCDIgE表達情況采用EUROBlotMaster免疫印跡法自動操作儀檢測血清sIgE〔sIgE特應性變應原包括混合樹木(柳樹/楊樹/榆樹)、豚草、葎草、艾蒿、戶塵、混合塵螨(屋塵螨/粉塵螨)、混合霉菌(點青霉/分枝孢酶/煙曲霉/交鏈孢酶)、蟑螂、狗毛、貓毛〕及anti-CCDIgE表達情況，操作嚴格按抗特應性變應原(中國組合)IgE 10類檢測試劑盒說明書步驟進行：(1)加樣：清晨空腹抽取3 ml血，靜置10 min，3 000 r/min離心10 min(離心半徑10 cm)，取血清冷藏于-80 ℃冰箱，1周后復融冷藏血清至室溫，充分混勻后取100 μl血清加入至預先加有1.0 ml通用緩沖液及檢測膜條的溫育槽內，搖床溫育16 h；(2)清洗：吸取溫育槽內液體，用1.0 ml通用緩沖液清洗膜條3次，5 min/次；(3)加酶結合物：各溫育槽加入1.0 ml酶結合物，搖床溫育60 min，重復上述清洗步驟1次；(4)加底物：各溫育槽中加入1.0 ml底物，避光搖床溫育10 min后終止反應；(5)取出檢測膜條自然風干，采用佳能CanoScan LiDE 100掃描判讀系統根據條帶著色強度自動判讀結果。sIgE結果判讀標準：條帶著色強度<3為陰性，≥3為陽性，著色強度越深，表示sIgE水平越高；anti-CCDIgE結果判讀標準：條帶著色強度<1為陰性，≥1為陽性，著色強度越深，表示anti-CCDIgE水平越高。

表1　AllergoTM阿羅格吸入性變應原20類的構成

1.4.3熒光酶聯免疫法(fluorescence enzyme immunoassay，FEIA)檢測phadiatop、tIgE表達情況ImmunoCAP250系統使用纖維素固相載體，該固相載體是裝存小膠囊內的親水性的多聚纖維素，經溴化氰活化后與變應原共價結合，變應原預先結合在固相帽狀物的ImmunoCAP250系統中，37 ℃孵育，如患者血清中有針對該變應原的sIgE，即形成抗此變應原抗體復合物，洗脫，加酶標記的兔抗人IgE抗血清(酶標二抗)，形成固相載體-變應原-sIgE-酶標二抗的結合物，再次洗脫，加入底物，產生酶催化熒光產物，終止液終止反應；測定熒光吸光度。phadiatop結果判讀標準：熒光吸光度<0.35 KU/L為陰性，≥0.35 KU/L為陽性；tIgE結果判讀標準：熒光吸光度≤100 KU/L為陰性，>100 KU/L為陽性。

1.4.4SPT將變應原液點于患者前臂屈側皮膚，持點刺針將針尖垂直點壓在液滴中，一液一針，不重復使用，破皮而不出血，且深度一致。點刺20 min后觀察變應原的皮膚反應。以組胺為陽性對照，0.9%氯化鈉溶液為陰性對照，根據AllergoTM阿羅格吸入性變應原20類變應原液的使用說明，變應原風團反應范圍與陰性對照風團反應范圍相同為陰性；變應原風團反應范圍為陽性對照風團反應范圍的1/4、1/2、1倍、2倍為陽性(強度分別為+、++、+++、++++)。

2　結果

2.1一般資料比較兩組患者性別、年齡、蜜蜂叮咬情況比較，差異無統計學意義(P>0.05，見表1)。

表1　兩組患者一般資料比較

注：a為t值；b為對照組有2例患者、變應性鼻炎組有9例患者記不清蜜蜂叮咬情況，未計入

2.2sIgE、anti-CCDIgE表達情況比較變應性鼻炎組患者sIgE、anti-CCDIgE陽性表達率分別為86.8%(105/121)、72.7%(88/121)，對照組分別為40.0%(16/40)、55.0%(22/40)。變應性鼻炎組患者sIgE、anti-CCDIgE陽性表達率高于對照組，差異有統計學意義(χ2=35.228，P<0.001；χ2=4.365，P=0.037)。

2.3phadiatop、tIgE表達情況比較變應性鼻炎組患者phadiatop、tIgE陽性表達率分別為56.2%(68/121)、37.2%(45/121)，對照組分別為0、10%(4/40)。變應性鼻炎組患者phadiatop、tIgE陽性表達率高于對照組，差異有統計學意義(χ2=34.031，P<0.001；χ2=10.497，P=0.001)。

2.4SPT結果比較變應性鼻炎組患者SPT陽性率為99.2%(120/121)，對照組為2.5%(1/40)。變應性鼻炎組患者SPT陽性率高于對照組，差異有統計學意義(χ2=150.467，P<0.001)。

2.5變應性鼻炎患者anti-CCDIgE表達情況與性別、年齡、蜜蜂叮咬情況、sIgE特應性變應原表達情況、phadiatop表達情況、tIgE表達情況、SPT吸入性變應原表達情況的關聯性分析anti-CCDIgE表達情況與性別，年齡，sIgE特應性變應原中的混合樹木、葎草、艾蒿、戶塵、混合塵螨、混合霉菌、蟑螂、狗毛、貓毛表達情況，phadiatop表達情況，SPT吸入性變應原中的樹1、雜草、云杉屬、葎草、樹2、禾本科/谷、艾蒿、刺槐、松、粉塵螨、戶塵螨、煙曲霉菌、白假絲酵母菌、蟑螂、禾本科、霉菌1、霉菌2、動物毛表達情況無關聯性(P>0.05)；anti-CCDIgE表達情況與蜜蜂叮咬情況，sIgE特應性變應原中的豚草表達情況，tIgE表達情況，STP吸入性變應原中的藜、大豚草表達情況存在關聯性(P<0.05，見表2)。

表3變應性鼻炎患者SPT結果與年齡、性別、phadiatop表達情況、tIgE表達情況的關聯性分析

Table 3Association of SPT results with age,gender,phadiatop and tIgE sensitization of patients with allergic rhinitis

項目SPT結果陽性 陰性χ2值P值性別0.1130.737 男3816 女4918年齡(歲)9.7330.021 未成年(≤18)68 青年(19～35)3511 中年(36～59)3616 老年(≥60)90phadiatop表達情況4.3350.037 陽性5414 陰性3320tIgE表達情況<0.0010.995 陽性3213 陰性5422

3　討論

變應原的確定對變應性鼻炎的診斷治療意義重大。評估病情時，未經治療的變應性鼻炎通常可通過血清sIgE、tIgE及SPT聯合檢查測得陽性結果，根據IgE水平評估過敏情況，經系統治療后，IgE水平常有所下降[4]。評估脫敏治療效果時，經脫敏治療后相應的sIgE級別降低，甚至為陰性，結合血清特異性IgG檢測，血清保護性抗體IgG，特別是血清IgG4水平明顯升高[4]。通過檢測血清IgG4的動態變化，可了解患者脫敏治療的效果。但由于anti-CCDIgE對變應原確診干擾，影響了變應性鼻炎患者變應原的確定及其脫敏治療的選擇。故本研究調查anti-CCDIgE在變應性鼻炎患者中的表達情況，分析anti-CCDIgE表達情況與人口學、蜜蜂叮咬、sIgE表達情況和SPT結果等相關因素的關聯性。

表2變應性鼻炎患者anti-CCDIgE表達情況與性別、年齡、蜜蜂叮咬情況、sIgE特應性變應原表達情況、phadiatop表達情況、tIgE表達情況、SPT吸入性變應原表達情況的關聯性分析

Table 2Association of anti-CCDIgE with gender，age,history of hymenoptera stings,sIgE atopic allergens,phadiatop,tIgE and SPT inhaled allergens

項目anti-CCDIgE表達情況陽性 陰性χ2值P值性別0.0890.765 男4014 女4819年齡(歲)0.9900.804 幼年(≤18)113 青年(19～35)3511 中年(36～59)3616 老年(≥60)63蜜蜂叮咬情況a12.0520.001 有81 無3271sIgE特應性變應原混合樹木0.3200.572 陽性3515 陰性5318豚草3.6530.043 陽性388 陰性5025葎草3.1780.075 陽性1611 陰性7222艾蒿0.0700.791 陽性3514 陰性5319戶塵0.4460.504 陽性4218 陰性4615混合塵螨1.3440.246 陽性6320 陰性2513混合霉菌1.6330.201 陽性3417 陰性5416蟑螂0.0670.795 陽性4317 陰性4516狗毛1.4770.224 陽性2714 陰性6119貓毛1.3440.246 陽性2513 陰性6320phadiatop表達情況0.0500.822 陽性5018 陰性3815tIgE表達情況7.0190.008 陽性396 陰性4927SPT吸入性變應原樹11.5000.221 陽性138 陰性7525雜草0.9000.343 陽性179 陰性7124

(續表2)

藜5.3030.021 陽性1110 陰性7723云杉屬1.9390.164 陽性86 陰性8027大豚草10.0830.001 陽性1012 陰性7821葎草0.5690.451 陽性95 陰性7928樹21.5000.221 陽性138 陰性7525禾本科/谷0.9000.343 陽性179 陰性7124艾蒿0.0970.755 陽性198 陰性6925刺槐2.5240.112 陽性97 陰性7926松1.3910.238 陽性75 陰性8128粉塵螨0.0670.795 陽性4516 陰性4317戶塵螨0.0500.823 陽性4215 陰性4618煙曲霉菌0.0620.803 陽性155 陰性7328白假絲酵母菌0.6750.411 陽性133 陰性7530蟑螂0.2100.647 陽性2310 陰性6523禾本科0.1400.709 陽性134 陰性7529霉菌12.5210.112 陽性139 陰性7524霉菌20.0900.764 陽性146 陰性7427動物毛0.2110.646 陽性136 陰性7527

注：a為有9例患者記不清蜜蜂叮咬情況，未計入；anti-CCDIgE=抗交叉反應性糖類決定簇IgE

本研究結果顯示，變應性鼻炎組患者sIgE、anti-CCDIgE、phadiatop、tIgE陽性表達率、SPT陽性率均高于對照組。在意大利，變態反應病患者anti-CCDIgE陽性表達率為23%(>0.4 KU/L)[5]，提示anti-CCDIgE在變態反應病人群中處于較高流行率。筆者之前研究報道，北京地區健康人群anti-CCDIgE陽性表達率為23.7%[6]，在西班牙，報道的健康鄉村人口anti-CCDIgE陽性表達率為5.6%(≥0.35 KU/L)[7]，說明anti-CCDIgE在變應性鼻炎患者和一般健康人群中均普遍存在，其水平較低，一般不會引起臨床表現。

本研究結果顯示，anti-CCDIgE表達情況與性別、年齡無關聯性，與蜜蜂叮咬情況存在關聯性。嬰兒從一出生就開始接觸各種不同的變應原，體內一開始就對外界含有糖基的物質產生低水平的anti-CCDIgE，其會增加tIgE水平，但是一般不會產生臨床癥狀[7]。anti-CCDIgE陽性的高危人群包括變應性鼻炎患者，尤其是被蜜蜂叮咬過的患者，蜜蜂叮咬后會產生抗脂蛋白磷脂酶A2(anti-phospholipase A2，anti-PLA2)IgE，與anti-CCDIgE存在一定的交叉反應[5]。有文獻報道，428例被調查者中，anti-CCDIgE陽性表達率為10.3%，anti-PLA2 IgE陽性表達率高達8.6%[7]。有研究報道，anti-CCDIgE陽性表達率最高的是被蜜蜂叮咬的患者，特別是被蜜蜂和黃蜂一起叮咬的患者[5]。

本研究結果顯示，anti-CCDIgE表達情況與大部分變應原(混合樹木、葎草、艾蒿、戶塵、混合塵螨、混合霉菌、蟑螂、狗毛、貓毛)無關聯性，國外亦尚未見anti-CCDIgE表達情況與某種sIgE特應性變應原明顯相關的報道，說明anti-CCDIgE可能與臨床引起過敏的變應原關系不大。anti-CCDIgE表達情況與phadiatop表達情況無關聯性，說明anti-CCDIgE可能不僅存在于吸入性變應原中，也可能存在于食入性或接觸性變應原中，anti-CCDIgE抗體親和力較小、易解離，一般不引起相關變應原的臨床癥狀，推斷其在體內的主要形式可能以游離為主，有少量來自含有糖基的sIgE上的抗原決定簇，從而影響sIgE結果。早前對于sIgE與anti-CCDIgE相關性研究顯示，疑似變態反應病組和健康組與問卷主訴不符合者之間、疑似變態反應病組與問卷主訴符合者和與問卷主訴不符合者之間均無差異，因此推斷這種不符可能與anti-CCDIgE的異質性(heterogeneity)有關，因交叉反應性糖類決定簇(cross reactive carbohydrate determinants，CCD)不僅存在于變應原的糖蛋白結構中，亦存在于非變應原糖蛋白成分中[8]。

西方發達國家變態反應病的主要變應原是花粉[9]，我國部分地區環境污染嚴重，變應性鼻炎患病率逐年上升，主要變應原是塵螨[10]。北京地區健康人群anti-CCDIgE和sIgE均陽性表達時，sIgE特應性變應原陽性表達率前兩位分別是屋塵(44.6%)、蟑螂(33.9%)[11]。本研究結果亦顯示，anti-CCDIgE陽性表達的變應性鼻炎患者中，sIgE特應性變應原陽性表達率前兩位分別為混合塵螨、蟑螂；SPT吸入性變應原陽性表達率前3位分別是粉塵螨、戶塵螨和蟑螂。

本研究結果顯示，SPT結果與性別、tIgE表達情況無關聯性，與年齡、phadiatop表達情況存在關聯性，SPT陽性率隨年齡的增加而增大，說明隨年齡增長，anti-CCDIgE對變應性鼻炎患者的干擾減小，確定變應原的幾率越大，為下一步的脫敏治療提供可靠的實驗數據。

本研究尚有一定的局限性,所選用的是dot-IBT中包被的多種變應原組合膜條,對于其他檢測系統的anti-CCDIgE表達陽性率如何,需進一步深入探討。

綜上所述，變應性鼻炎患者anti-CCDIgE水平與血清IgE(sIgE、tIgE)水平、SPT結果有一定的關聯性，anti-CCDIgE表達情況對確診變應原的SPT和sIgE試驗有一定干擾，在分析試驗結果時應予以注意。

作者貢獻：閆津津、馮珍如進行試驗設計與實施；閆津津、王全桂、王美玲、鄭新芝進行資料收集整理；閆津津進行撰寫論文、成文并對文章負責；閆津津、閆存玲進行試驗實施、評估、資料收集；馮珍如、李志艷進行質量控制及審校。

本文無利益沖突。

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(本文編輯：崔麗紅)

Correlation of Anti-CCDIgE Level With Serum IgE Level and Skin Prick Test of Patients With Allergic Rhinitis

YANJin-jin,FENGZhen-ru,WANGQuan-gui,etal.

DepartmentofLaboratoryMedicine,PekingUniversityFirstHospital,Beijing100034,China

Rhinitis,allergic;Anti-CCDIgE;Immunoglobulin E;Skin prick test

100034 北京市，北京大學第一醫院檢驗科(閆津津，馮珍如，王全桂，王美玲，閆存玲，李志艷，鄭新芝)；北京大學深圳醫院檢驗科(閆津津)

馮珍如，100034 北京市，北京大學第一醫院檢驗科；E-mail：fengzhenru@sina.com

R 765.21

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2016.21.002

2015-10-22；

2016-03-18)