林學(xué)海,龔金炎,王偉軍,魏培蓮,肖功年,尤玉如
(1.浙江科技學(xué)院生物與化學(xué)工程學(xué)院,浙江省農(nóng)產(chǎn)品化學(xué)與生物加工技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,杭州310023;2.貝因美嬰童食品股份有限公司,杭州311106)
克羅諾桿菌生物學(xué)特性及其嬰幼兒食品中控制措施研究進(jìn)展
林學(xué)海1,龔金炎1,王偉軍2,魏培蓮1,肖功年1,尤玉如1
(1.浙江科技學(xué)院生物與化學(xué)工程學(xué)院,浙江省農(nóng)產(chǎn)品化學(xué)與生物加工技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,杭州310023;2.貝因美嬰童食品股份有限公司,杭州311106)
通過(guò)闡述克羅諾桿菌(阪崎腸桿菌)生物學(xué)分類和耐受性討論了其生物學(xué)特性,論述了生物膜的形成與其生物學(xué)特性的相關(guān)性,通過(guò)闡述自然宿主、食品加工環(huán)境和流行病學(xué),著重分析了其污染源與污染途徑。針對(duì)克羅諾桿菌的污染特征,探討了以在線監(jiān)測(cè)系統(tǒng)為主導(dǎo)的加工環(huán)境控制措施的重要性,以及利用益生菌和益生元抑制其生長(zhǎng)的機(jī)理和作用效果。
克羅諾桿菌;生物膜;污染源;控制措施
克羅諾桿菌(原阪崎腸桿菌)是一種兼性厭氧的革蘭氏陰性腸桿菌[1],在光學(xué)顯微鏡下其菌體形態(tài)粗短、無(wú)芽孢,能寄生于人和動(dòng)物腸道內(nèi),同時(shí)對(duì)培養(yǎng)要求不高[2],在自然界中廣泛存在??肆_諾桿菌作為食源性條件致病菌,雖然對(duì)健康成人無(wú)較大影響,卻容易引起早產(chǎn)兒、低體重兒、免疫力低下兒的侵襲性感染。通常嬰幼兒感染克羅諾桿菌的臨床表現(xiàn)為新生兒腦膜炎、壞死性小腸結(jié)腸炎和菌血癥,嚴(yán)重時(shí)能導(dǎo)致機(jī)體死亡,且死亡率高達(dá)50%~80%[3],即使治愈,也容易造成神經(jīng)系統(tǒng)性后遺癥。嬰幼兒食品作為嬰幼兒最主要食物,在該菌的傳播與感染環(huán)節(jié)中居于重要位置,中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求嬰幼兒食品中不得檢出該菌,因此乳粉生產(chǎn)企業(yè)十分重視該菌的監(jiān)控分析與控制技術(shù)研究。
近10年來(lái),我國(guó)有關(guān)克羅諾桿菌嬰幼兒食品污染事件時(shí)有發(fā)生,針對(duì)嬰幼兒食品的污染狀況調(diào)查研究也一直在積極的開(kāi)展,表1總結(jié)了近10年以來(lái)的針對(duì)該菌的調(diào)查結(jié)果。
根據(jù)表1可知,我國(guó)10年內(nèi)克羅諾桿菌污染嬰幼兒食品時(shí)有發(fā)生,在所有的監(jiān)測(cè)研究中均有檢出,檢出率在0.56%~21.62%之間,統(tǒng)計(jì)均值為11.54%,說(shuō)明我國(guó)對(duì)克羅諾桿菌的研究與控制還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足實(shí)際生產(chǎn)的需要。為此論文在討論了克羅諾桿菌生物學(xué)特性的基礎(chǔ)上,通過(guò)闡述自然宿主、食品加工環(huán)境和流行病學(xué),著重分析了其污染源與污染途徑,以期探索出針對(duì)嬰幼兒食品靶向選擇有效、安全和生產(chǎn)在線的克羅諾桿菌控制措施,為嬰幼兒食品提供安全保障。

表1 我國(guó)各地克羅諾桿菌嬰幼兒食品污染情況

表2 克羅諾桿菌屬內(nèi)分類
雖然對(duì)克羅諾桿菌的了解和研究已經(jīng)長(zhǎng)達(dá)50年之久,但對(duì)于克羅諾桿菌生物學(xué)特性研究目前仍不夠清晰,尚不足以為克羅諾桿菌污染源與污染途徑的分析及其控制措施的選擇提供完善與系統(tǒng)的理論支持。為此本文首先對(duì)克羅諾桿菌生物學(xué)分類和耐受性等生物學(xué)特性進(jìn)行了討論。
2.1 生物學(xué)分類
1980年,F(xiàn)armer等[16]將產(chǎn)黃色素的疑似陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae)更名為阪崎腸桿菌(E.Sakazakii),由15個(gè)生物群組成,到2006年,Iversen等[17]發(fā)現(xiàn)了第16個(gè)生物群。2008年,Iversen等[18]根據(jù)16S RNA基因序列、核糖體分型、熒光擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性和DNA-DNA雜交實(shí)驗(yàn),提議將阪崎腸桿菌生物群重新進(jìn)行系統(tǒng)學(xué)分類,成為腸桿菌科1個(gè)新屬,即克羅諾桿菌屬(Cronobacter spp.),屬內(nèi)包括5個(gè)種和3個(gè)亞種,其中阪崎克羅諾桿菌(C.sakazakii,以細(xì)菌學(xué)家Riichi Sakazaki命名)是該屬模式菌種,為臨床感染病例中最常見(jiàn)的條件致病菌,見(jiàn)表2。2012年,Joseph等[19]將康帝蒙提克羅諾桿菌(C.condimenti)和尤尼沃斯克羅諾桿菌(C.universalis)新增到克羅諾桿菌屬中,使其增加到7個(gè)種。
2.2 耐受性
克羅諾桿菌作為危害性腸桿菌,可在多種脅迫環(huán)境中生存,主要與其耐受性相關(guān),特別是耐干燥性和滲透壓性??肆_諾桿菌的耐受性在相關(guān)文章中已經(jīng)報(bào)道,尤其在25℃或45℃的環(huán)境下比其他腸桿菌更具耐受性[21],能在水分活度只有0.2的嬰幼兒奶粉中存活2年,這也就解釋了為何嬰幼兒奶粉可能成為克羅諾桿菌污染與傳播的途徑,需重點(diǎn)加以控制的原因。2003年,Breeuwer等[22]報(bào)道克羅諾桿菌的耐受性與生物膜(Biofilm)中的海藻糖密切相關(guān),大量海藻糖可維持細(xì)胞滲透壓穩(wěn)定,保護(hù)生物膜中的微生物抵抗各種脅迫環(huán)境。Aparna和Sarita[23]發(fā)現(xiàn)微生物在生物和非生物表面都可形成生物膜,通過(guò)生物膜形成水通道,而生物膜中的成分可作為其營(yíng)養(yǎng)來(lái)源,從而增強(qiáng)克羅諾桿菌在脅迫環(huán)境中的生存能力。
生物膜是微生物附著于生物或非生物表面,分泌黏性胞外基質(zhì)(Extracellular Polymeric Substances,EPS)將其自身包裹其中,為適應(yīng)環(huán)境而形成的高度組織化、自由化微菌落膜性聚集物。一般而言,微生物附著于物體表面后,逐漸形成菌群,隨后依附環(huán)境條件形成生物膜,到一定階段后將會(huì)有微生物從成熟的生物膜中釋放出,不同種類的微生物形成的生物膜各不相同。生物膜的形成受到各種環(huán)境條件以及微生物間信號(hào)分子傳遞,如群體感應(yīng)系統(tǒng)、寡類分子和環(huán)二鳥(niǎo)苷酸等共同影響。
Iversen等[24]研究克羅諾桿菌在嬰幼兒配方奶粉中的生物膜形成時(shí)發(fā)現(xiàn),生物膜可使其黏附在乳膠、聚碳酸酯、硅膠和不銹鋼管表面,作為粘附的物質(zhì)基礎(chǔ)和防御屏障,可有效保護(hù)其抵抗抗菌劑、營(yíng)養(yǎng)、溫度和流體剪切力等多種脅迫環(huán)境,增強(qiáng)耐受性。Lehner等[25]總結(jié)可能提高克羅諾桿菌耐受性的4個(gè)因素:(1)可黏附在親水性或疏水性物質(zhì)表面;(2)EPS的產(chǎn)生;(3)生物膜的形成及EPS中海藻糖的存在;(4)具有產(chǎn)生微生物間信號(hào)分子的能力。生物膜的形成與其生理性和耐受性等生物學(xué)特性有很大相關(guān)性,直接影響了克羅諾桿菌存活的可能性。為此,深入研究生物膜可大大促進(jìn)克羅諾桿菌的研究與控制。
研究克羅諾桿菌的污染源與污染途徑可更加深入了解和掌握其習(xí)性,對(duì)于防止及控制其污染具有主導(dǎo)性意義,然而,迄今為止尚不能確定其污染源與污染途徑。本文通過(guò)闡述自然宿主、食品加工環(huán)境和流行病學(xué)分析其污染源與污染途徑。
3.1 自然宿主
自然宿主是克羅諾桿菌重要的生存棲息地,研究其自然宿主有助于了解其污染源與污染途徑,但至今為止尚不能確定其自然宿主。
有研究分別從健康馬的鼻孔[26]和螨蟲(chóng)的內(nèi)臟[27]中分離出了克羅諾桿菌,也有研究從蟑螂[28]、甲殼蟲(chóng)[29]和廄螫蠅[30]等昆蟲(chóng)的內(nèi)臟中分離出了該菌,目前,普遍認(rèn)為昆蟲(chóng)是其重要的自然宿主。2012年Monica等[31]從蒼蠅的內(nèi)臟中分離出了克羅諾桿菌,分離率為14%,主要為C.sakazakii、C.turicensis和C.universalis。2015年,Monica等[32]再次從蒼蠅的內(nèi)臟中分離出了克羅諾桿菌,分離率為19%。此外,Monica等[33]從攜帶克羅諾桿菌的蒼蠅產(chǎn)下的卵中也分離出了該菌,表明蒼蠅可將其傳播給后代的可能性。研究克羅諾桿菌與昆蟲(chóng)之間的生態(tài)關(guān)聯(lián)性將有助于更加深入了解其傳播途徑,減緩傳播污染。
Jaradat等[34]和Niharika等[35]相繼對(duì)克羅諾桿菌的自然宿主進(jìn)行了大規(guī)模系統(tǒng)的研究,結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 克羅諾桿菌自然宿主研究[34-35]
兩次調(diào)查結(jié)果顯示嬰幼兒配方奶粉均有一定的分離率,但均較低,而香草和香料樣品分離率卻是最高。2009年,Schmid等[36]從土豆和玉米等植物根部分離出了克羅諾桿菌,均具有致病性,研究發(fā)現(xiàn)植物根部具有其生存的條件,如礦物質(zhì)的溶解,吲哚乙酸的產(chǎn)生以及含鐵細(xì)胞的增殖,這些均可增加植物成為其自然宿主的可能性。
3.2 食品加工環(huán)境
近年來(lái),已從加工食品中分離出克羅諾桿菌,如乳制品、干制肉品、水和米等,取樣環(huán)境也各有不同,如家庭環(huán)境、牲畜工具、食品加工設(shè)備,尤其是嬰幼兒食品加工設(shè)備。需說(shuō)明的是,并非嬰幼兒食品要比其他食品更易受到該菌的感染,而是因其主要危害對(duì)象是嬰幼兒,美國(guó)與中國(guó)兩國(guó)的FDA均將其作為嬰幼兒食品的重點(diǎn)監(jiān)控對(duì)象,使其在嬰幼兒食品的監(jiān)測(cè)頻率大大高于其它食品。
嬰幼兒食品作為克羅諾桿菌的污染途徑之一,最主要的特征是外源性,即外部環(huán)境的影響。Müller等[37]分別從醫(yī)院和乳品廠,尤其是嬰幼兒配方奶粉加工環(huán)境中分離出了克羅諾桿菌。Craven等[38]從5個(gè)奶粉廠中隨機(jī)挑取298個(gè)環(huán)境樣品,分離出了32株克羅諾桿菌菌株,然而引人注意的是非加工環(huán)境(49%)的分離率反而要高于加工環(huán)境(29%)的分離率,分離率最高的是停產(chǎn)維修時(shí)的奶粉區(qū)域(81%),而恢復(fù)生產(chǎn)且遵循衛(wèi)生操作時(shí)分離率卻是最低(6%)。另有研究報(bào)道FAO/WHO組織[39,40]從未開(kāi)封的嬰幼兒配方奶粉罐裝中分離出了克羅諾桿菌,平均數(shù)量為100 CFU/g,看似為內(nèi)源性污染源,但經(jīng)進(jìn)一步的研究分析發(fā)現(xiàn)多為嬰幼兒配方奶粉生產(chǎn)后期(噴霧干燥后)的環(huán)境污染,故仍具外源性。研究發(fā)現(xiàn)從噴霧干燥塔的外頂部、空氣處理器和人流交叉較頻繁的區(qū)域分離出的菌株都具有普遍性和顯著耐受性。克羅諾桿菌通過(guò)外部污染源經(jīng)交叉污染帶入到噴霧干燥設(shè)備中的傳播途徑應(yīng)予以重視,外源和內(nèi)源污染的相關(guān)性清晰地說(shuō)明了其可能存在的3種傳播途徑:(1)通過(guò)進(jìn)出風(fēng)口、器械外表面和員工的鞋子等帶入到噴霧干燥設(shè)備中;(2)噴霧干燥設(shè)備的控制房間、走廊和員工流動(dòng)較頻繁的交叉污染;(3)空氣和粉末的流動(dòng)污染。
另外,Craven等[38]根據(jù)調(diào)查得出,克羅諾桿菌污染具有暫時(shí)性和概率性的特點(diǎn),即并非在同一個(gè)地方會(huì)一直取到相同的菌樣。研究從分離到克羅諾桿菌的7個(gè)地點(diǎn)再次取樣,只有3處菌樣鑒定結(jié)果與原來(lái)的一致。然而,無(wú)論菌株的出現(xiàn)是暫時(shí)性還是持續(xù)性,在該區(qū)域的出現(xiàn)就意味著該區(qū)域具有適宜克羅諾桿菌生存的條件,出現(xiàn)的概率也相應(yīng)增加,可被鑒定為疑似分布區(qū)域以及被作為優(yōu)先潔凈區(qū)域,預(yù)防克羅諾桿菌污染產(chǎn)品。
3.3 克羅諾桿菌的流行病學(xué)
克羅諾桿菌感染病的事例比較少,通常不會(huì)被報(bào)道,尤其是在發(fā)展中國(guó)家,因此,很少有報(bào)道研究克羅諾桿菌的流行病學(xué)。新生兒在出生時(shí)就有受感染的可能,有報(bào)道懷疑部分新生兒的感染可能來(lái)自孕婦的產(chǎn)道[41]。Nazarowec-White和Farber[42]經(jīng)過(guò)11年的研究,發(fā)現(xiàn)從醫(yī)院分離出的克羅諾桿菌各菌株間相似度高,難以區(qū)分。Smeets等[43]發(fā)現(xiàn)從嬰幼兒食品中分離出的菌株和從3個(gè)病人分離出的菌株完全相同,類似報(bào)道從醫(yī)生的聽(tīng)診器和幼兒園的食品制作設(shè)備中也得到相同分離,如勺子和攪拌器[44]。以上報(bào)道均表明克羅諾桿菌具有流行病學(xué)相互間關(guān)聯(lián)的可能性,往往受污染物品沒(méi)有經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)奶幚?,就?huì)成為污染的媒介,造成更大范圍的污染。
為有效控制在嬰幼兒食品加工環(huán)境中的克羅諾桿菌,建立一個(gè)在線監(jiān)測(cè)系統(tǒng)為主導(dǎo)的加工環(huán)境控制措施至關(guān)重要,克羅諾桿菌的污染最終體現(xiàn)在產(chǎn)品的品質(zhì)上,可在嬰幼兒食品中添加天然、安全的抑菌劑,如益生菌和益生元等。
4.1 快速檢測(cè)與監(jiān)測(cè)技術(shù)
克羅諾桿菌在嬰幼兒食品加工環(huán)境中廣泛存在,可能與空氣和粉末的流動(dòng)或員工交叉污染有關(guān),為研究克羅諾桿菌在嬰幼兒食品加工環(huán)境中能夠持續(xù)存在的傳播途徑,有必要建立一個(gè)快速、準(zhǔn)確的在線監(jiān)測(cè)系統(tǒng)。克羅諾桿菌在嬰幼兒食品加工環(huán)境中的污染是一個(gè)現(xiàn)代普遍性難題,在線監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可提供其在加工環(huán)境中的分布狀態(tài),通過(guò)分析其流行相關(guān)性,準(zhǔn)確尋找污染源,再利用適當(dāng)控制措施,可以從污染源頭有效控制污染。
用克羅諾桿菌選擇培養(yǎng)基鑒定克羅諾桿菌,會(huì)使不同菌株在培養(yǎng)基中表現(xiàn)出相同的形態(tài),難以體現(xiàn)出菌樣本身的代表性,不能準(zhǔn)確推測(cè)出其在環(huán)境中的流行相關(guān)性,此外,鑒定結(jié)果往往會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性的現(xiàn)象,需以API生化試驗(yàn)作進(jìn)一步驗(yàn)證,此流程不但繁瑣,且花費(fèi)時(shí)間多,不符合工廠中的效率原則。近年來(lái)快速發(fā)展的PCR技術(shù)可彌補(bǔ)這一缺陷,相繼研究出的熒光定量PCR技術(shù)和環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增法等方法,具有靈敏度高、準(zhǔn)確性好、簡(jiǎn)便快速等優(yōu)點(diǎn),但仍需實(shí)驗(yàn)尋找特定的保守基因序列作為引物,也會(huì)出現(xiàn)假陰性和假陽(yáng)性現(xiàn)象,同時(shí)耗費(fèi)較大,故尚不宜作為在線監(jiān)測(cè)的方法。脈沖場(chǎng)凝膠電泳(pulse-field gel electrophoresis,PFGE)以電場(chǎng)作為引導(dǎo)力,根據(jù)DNA分子量的不同而使大于20 kb的DNA分子得以分離。PFGE分型技術(shù)可鑒別菌株間的親源性,分析各菌樣的流行相關(guān)性,以此作為追溯污染源的判斷依據(jù),實(shí)現(xiàn)在此基礎(chǔ)上采取適當(dāng)措施控制污染源。Masaki等[45]以PFGE分型技術(shù)證實(shí)了用來(lái)清洗玻璃瓶的刷子被克羅諾桿菌感染后,成為了3例病例的感染來(lái)源。該技術(shù)具有穩(wěn)定性、重復(fù)性、高分辨率和標(biāo)準(zhǔn)化的優(yōu)點(diǎn),被認(rèn)為是微生物分子生物學(xué)分型技術(shù)的“金標(biāo)準(zhǔn)”。美國(guó)已有多種菌種的標(biāo)準(zhǔn)PFGE操作方法,并建立了全美檢測(cè)網(wǎng)絡(luò)PulseNet和PFGE指紋圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)[46],然而目前尚未見(jiàn)克羅諾桿菌標(biāo)準(zhǔn)的PFGE分析方法報(bào)道,故此方法應(yīng)用于克羅諾桿菌的在線監(jiān)測(cè)仍需進(jìn)一步研究,但發(fā)展?jié)摿薮蟆?/p>
4.2 工廠衛(wèi)生與環(huán)境控制
光氫離子化(Photohydrocatalytic,PHI)技術(shù)利用寬頻譜、高強(qiáng)度紫外線和多重稀有金屬發(fā)生催化反應(yīng),其反應(yīng)釋放的高級(jí)氧化粒子具有強(qiáng)氧化性,能去除空氣中的微生物、異味等污染物。目前,我國(guó)對(duì)PHI技術(shù)的研究較少,尹湘毅等[47]和史利克等[48]利用PHI空氣凈化器分別處理車間和醫(yī)院空氣,發(fā)現(xiàn)空氣中的細(xì)菌量均明顯下降,同時(shí)可很好地去除異味。PHI技術(shù)具有生產(chǎn)在線控制車間空氣中微生物的優(yōu)勢(shì),且不使用任何化學(xué)制劑。
目前,企業(yè)控制微生物的主要手段是紫外線(UV)、臭氧(O3-)和過(guò)氧乙酸等,處理效果都比較明顯。Ha和Kang[49]研究以紫外線(UV)和紅外線(NIR)作為處理手段,觀察其對(duì)嬰幼兒配方奶粉中的克羅諾桿菌殺菌效果,發(fā)現(xiàn)以UV-NIR聯(lián)合使用比各自單獨(dú)使用效果要好。Torlak和Sert[50]以氣態(tài)O3-處理脫脂奶粉120 min,質(zhì)量濃度為2.8 mg/L和5.3 mg/L的O3-量可以使最初濃度為5.92 g-1(對(duì)數(shù)值)的克羅諾桿菌分別減少2.71和3.28 g-1(對(duì)數(shù)值),在全脂奶粉可達(dá)到1 g-1(對(duì)數(shù)值)殺菌效果。
4.3 益生菌和益生元的抑制作用
益生菌有利于體內(nèi)腸道菌群的環(huán)境穩(wěn)定,為機(jī)體提供必要營(yíng)養(yǎng)元素,近年來(lái),有學(xué)者研究益生菌對(duì)克羅諾桿菌的影響。2014年,Weng等[51]研究發(fā)現(xiàn),雙歧桿菌生長(zhǎng)所產(chǎn)生的物質(zhì)可減緩小鼠因克羅諾桿菌而引起的腸道炎癥現(xiàn)象,使回腸上皮細(xì)胞恢復(fù)繁殖能力,維持體重。益生元具有抗微生物粘附活性,減少對(duì)機(jī)體的危害。Quintero等[52]將克羅諾桿菌培養(yǎng)在玻璃蓋玻片上,以低聚半乳糖(GOS)和聚葡萄糖處理,結(jié)果顯示當(dāng)GOS的處理量質(zhì)量濃度為16 g/L時(shí),可以減少56%~71%的黏附量,表明這些益生元可抑制克羅諾桿菌感染的最初步驟。此外,人乳中含有的一類寡糖也具有抗粘附活性,有研究報(bào)道將這類食品級(jí)寡糖作為益生元,具有影響腸桿菌和沙門氏菌的感染效果[53]。有理由相信,隨著以后的研究發(fā)展,將益生菌和益生元應(yīng)用于嬰幼兒食品中抑制克羅諾桿菌的生長(zhǎng)將成為可能
克羅諾桿菌對(duì)嬰幼兒具有潛在致病性,且范圍廣、危害大,在嬰幼兒食品行業(yè)一直備受關(guān)注。生物膜形成與克羅諾桿菌生理性和耐受性等生物學(xué)特性有很大相關(guān)性,并受到信號(hào)分子傳遞和各種環(huán)境條件的共同影響。
克羅諾桿菌污染具有流行相關(guān)性,嬰幼兒食品作為嬰幼兒感染該菌的主要途徑之一,其本身受污染特征具有外源性,此外,該菌污染還具有暫時(shí)性和概率性的特點(diǎn),因此,通過(guò)在線監(jiān)測(cè)系統(tǒng)為主導(dǎo)的加工環(huán)境控制措施顯得尤為重要。通過(guò)分析克羅諾桿菌在嬰幼兒食品加工環(huán)境的外源傳播特征,準(zhǔn)確尋找污染源,靶向選擇有效、安全和生產(chǎn)在線的克羅諾桿菌控制措施,從污染源頭有效控制該菌污染,是嬰幼兒食品行業(yè)迫切需要的技術(shù),也是以后的研究方向和發(fā)展趨勢(shì)。
[1]NAZAROWEE-WHITE M,F(xiàn)ARBER J M.Enteratacter sakazakii:a review[J].International Journal of Food Microbiology,1997,34(2): 103-113.
[2]DRUGGANP,IVERSEN C.Culturemedia for the isolation of Cronobacter spp[J].InternationalJournalofFoodMicrobiology,2009,136(2): 169-178.
[3]HEALY B,COONEY S,O'BRIEN S,et al.Cronobacter(Enterobacter sakazakii):an opportunistic foodborne pathogen[J].Foodborne Pathogens and Disease,2010,7(4):339-350.
[4]何軍霞,賈忠建,寇建軍,等.2012年平?jīng)鍪惺惺蹕胗變菏称分汹嫫槟c桿菌污染調(diào)查分析[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2015,25(13): 2222-2224.
[5]周少君,鄧小玲,朱海明等.2010年-2013年廣東省嬰幼兒食品中阪崎腸桿菌污染情況調(diào)查[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2014,24(15): 2248-2251.
[6]權(quán)玉玲,胡曉寧,蘭光,等.甘肅省地產(chǎn)嬰幼兒配方奶粉阪崎腸桿菌污染調(diào)查分析[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2013,23(4):990-993.
[7]吳環(huán),聶炎炎,黃宇鋒,等.廣州市售嬰兒配方粉阪崎腸桿菌污染情況調(diào)查[J].中國(guó)乳業(yè),2013,135:48-49.
[8]李閩真,葉玲清,陳偉偉.福建省2011年嬰幼兒配方食品和谷類輔助食品中阪崎腸桿菌污染狀況調(diào)查[J].海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2012,18(6):55-56.
[9]呂均,李玉芳,鄭向梅等.十堰市市售嬰幼兒配方食品阪崎腸桿菌污染狀況調(diào)查分析[J].中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2012,13(9):710-711.
[10]陳松,李紅,周漢洪,等.2009-2012年達(dá)州市食源性致病菌監(jiān)測(cè)結(jié)果分析[J].預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志,2014,30(11):918-920.
[11]黃玉蘭,楊小蓉,趙晉,等.2010年四川省市售嬰幼兒食品阪崎腸桿菌監(jiān)測(cè)與分析[J].預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志,2013,3(29):208-210.
[12]姚雪婷,唐振柱,劉展華,等.2012年廣西市售嬰幼兒食品食源性致病菌監(jiān)測(cè)與分析[J].中國(guó)食品衛(wèi)生雜志,2012,27(1):85-88.
[13]章迎春,陸永梅.紹興市售嬰幼兒配方粉中阪崎腸桿菌污染狀況分析[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2015,25(15):2608-2612.
[14]朱鳳,李維克,俞慕華,等.深圳乳制品和環(huán)境中阪崎腸桿菌污染狀況調(diào)查[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2012,39(16):4107-4109.
[15]李秀娟,李麗婕,高偉利,等.石家莊市售國(guó)產(chǎn)配方奶粉和嬰幼兒食品中阪崎腸桿菌污染調(diào)查[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2010,20(4): 886-888.
[16]FARMER J J,ASBURY M A,HICKMAN F W,et al.Enterobacter sakazakii:A New Species of“Enterobacteriaceae”Isolated from Clinical Specimens[J].International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology,1980,30(3):569-584.
[17]IVERSEN C,WADDINGTON M,F(xiàn)ARMER J J,et al.The biochemical differentiation of Enterobacter sakazakii genotypes[J].BioMed Central Microbiology,2006,6:94.
[18]IVERSEN C,MULLANE N,MCCARDELL B,et al.Cronobacter gen.nov.,a new genus to accom13 modate the biogroups of Enterobacter sakazakii,and proposal of Cronobacter sakazakii gen.nov.,comb. nov.,Cronobacter malonaticus sp.nov.,Cronobacter turicensis sp.nov.,Cronobacter muytjensii sp.nov.,Cronobacter dublinensis sp.nov.,Cronobacter genomospecies 1,and of three subspecies,Cronobacter dublinensis subsp.dublinensis subsp.nov.,Cronobacter dublinensis subsp.lausannensis subsp.nov.and Cronobacter dublinensis subsp.lactaridi subsp.nov.[J]. International Journal Ststematic and Evolutionary Microbiology,2008,58(6):1442-1447.
[19]JOSEPH S,CETINKAYA E,DRAHOVSKA H,et al.Cronobacter condimenti sp.nov.,isolated from spiced meat and Cronobacter universalis sp.nov.,a novel species designation for Cronobacter sp.genomospecies 1,recovered from a leg infection,water,and food ingredients[J]. International Journal Ststematic and Evolutionary Microbiology,2012,62(Pt 6):1277-1283.
[20]CHRISTOPHER JG,MICHAEL LK,KAREN AP,et al.Pan-genome analysis of the emerging foodborne pathogen Cronobacter spp. suggests a species-level bidirectional divergence driven by niche adaptation[J].Biomedical Genomics,2013,14:366.
[21]KIVES J,ORGAZ B,SANJOS C.Polysaccharide differences between planktonic and biofilm-associated EPS from Pseudomonas fluorescens B52[J].Colloids and Surfaces B:Biointerfaces,2006,52(2): 123-127.
[22]BREEUWER P,LARDEAU A,PETERZ M,et al.Desiccation and heat tolerance of Enterobacter sakazakii[J].Journal of Applied Microbiology,2003,95(5):967-973.
[23]APARNA MS,YADAV S.Biofilms:microbes and disease[J].Brazilian Journal of Infectious Diseases,2008,12(6):526-530.
[24]IVERSEN C,LANE M,F(xiàn)ORSYTHE S J.The growth profile,thermotolerance and biofilm formation of Enterobacter sakazakii grown in infant formula milk[J].Letters in Applied Microbiology,2004,38(5): 378-382.
[25]LEHNER A,RIEDEL K,EBERL L,et al.Biofilm Formation,Extracellular Polysaccharide Production,and Cell-to-Cell Signaling in Various Enterobacter sakazakii Strains:Aspects Promoting EnvironmentalPersistence[J].JournalofFoodProtection,2005,68(11): 2287-2294.
[26]HOLY O,MATOUSKOVA I,HOLY V,et al.Isolation of Cronobacter spp.(formerly Enterobacter sakazakii)from nostrils of healthy stable horse-short communication[J].Epidemiologie Mikrobiologie Imunologie,2011,60(4):167-169.
[27]HUBERT J,KOPECKY J,PEROTTI M A,et al.Detection and identification of species-specific bacteria associated with synanthropic mites[J].Microbial Ecology,2012,63(4):919-928.
[28]GARCIA F,NOTARIO M J,CABANAS J M,et al.Incidence of bacteria of public health interest carried by cockroaches in different food-related environments[J].Journal of Medical Entomology,2012,49(6):1481-1484.
[29]CHANNAIAH LH,SUBRAMANYAM B,ZUREK L.Survival of Enterococcus faecalis OG1RF:pCF10 in poultry and cattle feed:vector competence of the red flour beetle,Tribolium castaneum(Herbst)[J]. Journal of Food Protection,2010,73(3):568-573.
[30]HAMILTON J V,LEHANE M J,BRAIG H R.Isolation of Enterobacter sakazakii from midgut of Stomoxys calcitrans[J].Emerging Infectious Diseases,2003,9(10):1355-1356.
[31]PAVA-RIPOLL M,PEARSON R E,MILLER AK,et al.Prevalence and relative risk of Cronobacter spp.,Salmonella spp.,and Listeria monocytogenes associated with the body surfaces and guts of individual filth flies[J].Applied and Environmental Microbiology,2012,78(22): 7891-7902.
[32]PAVA-RIPOLL M,PEARSON R E,MILLER A K,et al.IngestedSalmonella enterica,Cronobacter sakazakii,Escherichia coli O157:H7,and Listeria monocytogenes:transmission dynamics from adult house flies to their eggs and first filial(F1)generation adults[J].BioMed Central Microbiology,2015,15:150.
[33]PAVA-RIPOLL M,PEARSON R E,MILLER A K,et al.Detection of foodborne bacterial pathogens from individual filth flies[J]. Journal of visualized experiments,2015,(96):e52372.
[34]JARADAT Z W,ABABNEH Q O,SAADOUN I M,et al.Isolation of Cronobacter spp.(formerly Enterobacter sakazakii)from infant food,herbs and environmental samples and the subsequent identification and confirmation of the isolates using biochemical,chromogenic assays,PCR and 16S rRNA sequencing[J].Biomed Central Genomics,2009,9:225.
[35]NIHARIKA S,GUNJAN G,MAMTA R.Prevalence and Characterization of Cronobacter spp.from Various Foods,Medicinal Plants,and Environmental Samples[J].Current Microbiology,2015,71(1): 31-38.
[36]SCHMID M,IVERSEN C,GONTIA I,et al.Evidence for a plant-associated natural habitat for Cronobacter spp[J].Research in Microbiology,2009,160(8):608-614.
[37]MüLLER A,STEPHAN R,F(xiàn)RICKER-FEER C,et al.Genetic diversity of Cronobacter sakazakii isolates collected from a Swiss infant formula production facility[J].Journal of Food Protection,2013,76(5):883-887.
[38]CRAVEN H M,MCAULEY C M,DUFFY L L,et al.Distribution,prevalence and persistence of Cronobacter(Enterobacter sakazakii)in the nonprocessing and processing environments of five milk powder factories[J].Journal of Applied Microbiology,2010,109(3):1044-1052.
[39]FAO/WHO.Expert meeting on Enterobacter sakazakii and Salmonella in powdered infant formula.Rome;2006.
[40]FAO/WHO.Enterobacter sakazakii(Cronobacter spp.)in powdered follow-up formulae.Microbiological Risk Assessment Series No.15. Washington:Joint FAO/WHO Food Standards Programme;2008.
[41]TOWNSEND S,HURRELL E,F(xiàn)ORSYTHE S.Virulence studies of Enterobacter sakazakii isolates associated with a neonatal intensive care unit outbreak[J].BioMed Central Microbiology,2008,8:64.
[42]NAZAROWEC-WHITE M,F(xiàn)ARBER J M.Phenotypic and genotypic typing of food and clinical isolates of Enterobacter sakazakii[J]. Journal of Medical Microbiology,1999,48(6):559-567.
[43]SMEETS L C,VOSS A,MUYTJENS H L,et al.Genetische karakterisatie van Enterobacter sakazakii-isolaten van Nederlandse patie¨nten met neonatale meningitis[J].Nederlands Tijdschrift Voor Medische Microbiologie,1998,6:113-115.
[44]BAR-OZ B,PREMINGER A,PELEG O,et al.Enterobacter sakazakii infection in the newborn[J].Acta Paediatrica,2001,90(3): 356-358.
[45]MASAKI H,ASOH N,TAO M,et al.Detection of Gram-Negative Bacteria in Patients and Hospital Environments at a Room in Geri-atric Wards under the Infection Control Against MRSA[J]. Journal of the Japanese Association for Infectious Diseases,2001,75: 144-150.
[46]SWAXNINATHAN B,BARRETT T J,HUNTER S B,et al. PulseNet:the molecular subtyping network for foodborne bacterial disease surveillance,United States[J].Emerging Infectious Diseases,2001,7(3):382-389.
[47]尹湘毅,張皖瑜,黃慧敏,等.迅潔(RGF)空氣凈化設(shè)備在醫(yī)院重點(diǎn)部門的應(yīng)用及效果觀察[J].質(zhì)控與安全,2010,31(5):108-109.
[48]史利克,劉燕,王悅,等.RGF空氣消毒凈化器的消毒效果觀察[J].臨床工程,2008,24(4):68-69.
[49]HA J W,KANG D H.Synergistic bactericidal effect of imultaneous near-infrared radiant eating and UV adiation against Cronobacter sakazakii in powdered infant formula[J].Applied and Environmental Microbiology,2014,80(6):1858-1863.
[50]TORLAK E,SERT D.Inactivation of Cronobacter by gaseous ozone in milk powders with different fat contents[J].International Dairy Journal,2013,32(2):121-125.
[51]WENG M,GANGULI K,ZHU W,et al.Conditioned medium from Bifidobacteria infantis protects against Cronobacter sakazakii-induced intestinal inflammation in newborn mice[J].American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology,2014,306(9): G779-G787.
[52]QUINTERO M,MALDONADO M,PEREZ-MUNOZ M,et al. Adherence inhibition of Cronobacter sakazakii to intestinal epithelial cells by prebiotic oligosaccharides[J].Current Microbiology,2011,62(5):1448-1454.
[53]SEARLE L E,BEST A,NUNEZ A,et al.A mixture containing galactooligosaccharide,produced by the enzymic activity of bifidobacterium bifidum,reduces Salmonella enterica serovar Typhimurium infection in mice[J].Journal of Medical Microbiology,2009,58(Pt1):37-48.
Review of biological characteristics and controlling of Cronobacter spp.in dairy products
LIN Xue-hai1,GONG Jin-yan1,WANG Wei-jun2,WEI Pei-lian1,XIAO Gong-nian1,YOU Yu-ru1
(1.School of Biological and Chemical Engineering,Zhejiang provincial Key Lab for Chem&Bio Processing Technology of Farm produces,Zhejiang University of Science and Technology,Hangzhou 310023,China;2.Beingmate Baby& Child Food Co.,Ltd,Hangzhou 311106,China)
This paper describes biological characteristics of Cronobacter spp.by elaborate its taxonomy and tolerability.It discusses the correlation between biofilm formation and biological characteristics of Cronobacter spp.Simultaneously,it analyzes source of pollution and routes of transmission via nature vectors,food processing environmental and epidemiology for proving contamination of Cronobacter spp.associated with extrinsic and inter-related epidemiologic.It considers that the establishment of an online monitor-control system in processing environment is particularly important.In addition,it clarifies the mechanism and effect of probiotics and prebiotics to inhibit the growth of Cronobacter spp.
Cronobacter spp;biofilm;source of pollution;control measures
Q936
B
1001-2230(2016)08-0037-06
2015-12-18
浙江省重大科技專項(xiàng)重大農(nóng)業(yè)項(xiàng)目(No.2014C02012,2014C 02016);浙江省自然科技基金項(xiàng)目(No.LY14C200007);杭州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.20140432B106,20140533B74)。
林學(xué)海(1991-),男,碩士研究生,從事乳品微生物控制研究。
尤玉如