單胺氧化酶A基因啟動子30-bp重復序列多態性與重度子癇前期發病機制的關系

孫　燕，侯雪晶，郭紅梅

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單胺氧化酶A基因啟動子30-bp重復序列多態性與重度子癇前期發病機制的關系

孫燕1，侯雪晶1，郭紅梅2

1.066000，秦皇島市第一醫院產科；2.100039北京，武警總醫院口腔科

【摘要】目的探討單胺氧化酶A(MAO-A)基因啟動子30-bp重復序列多態性與重度子癇前期發病機制的關系。方法采用聚合酶鏈式反應限制性片段長度多態性(PCR-RFLP)技術檢測60例重度子癇前期患者(病例組)及70例正常孕婦(對照組)MAO-A基因啟動子區的基因型，并對該多態性進行統計分析。結果MOA-A基因啟動子區H/H、H/L、L/L各基因型的分布頻率和H、L等位基因的分布頻率在病例組與對照組之間的分布均無統計學意義(P>0.05)。結論MAO-A基因啟動子區的基因多態性可能與重度子癇前期的發病無相關性，但從機制上推測其基因多態性導致酶活性下降、兒茶酚胺滅活減少可能是重度子癇前期發病的重要原因。

【關鍵詞】重度子癇前期；單胺氧化酶A；基因多態性

妊娠期高血壓疾病(hypertensive disorders complicating pregnancy)是妊娠期特有的疾病，可嚴重危害母嬰健康，發病原因至今尚無定論，但遺傳因素的影響已取得共識。有研究表明，妊娠期高血壓疾病患者交感神經緊張性增加，血中兒茶酚胺尤其是去甲腎上腺素水平明顯高于正常孕婦[1，2]，可能與妊娠期高血壓疾病的發病相關[1，3]。單胺氧化酶A(MAO-A)是兒茶酚胺代謝過程中的主要降解酶，其酶的活性導致血中兒茶酚胺水平的變化，可能在妊娠期高血壓疾病的發病過程中起一定的作用，調控MAO-A合成的基因位于X 染色體p11.23-11.4區,在MAO-A基因啟動區內存在含30bp堿基的可變數串聯重復多態性(30bp-uVNTR) ，這種多態性與MAO-A基因的轉錄活性有關，被認為是MAO-A基因功能的標志物[4]。啟動子區域30bp-uVNTR多態性在人群中分別有2、3、3.5、4、5次重復(2R、3R、3.5R、4R、5R)，其中3、4次重復最多見，3.5次或4次重復序列的轉錄活性較之3次與5次重復序列的轉錄活性高2～10倍[4]。關于MAO-A基因啟動子30-bp重復序列多態性與重度子癇前期的遺傳易感性的關系國內尚未見報道。為此，我們采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性分析方法，探討重度子癇前期患者MAO-A基因啟動子區30bp的可變數串聯重復(MAOA-uVNTR)多態現象與正常孕婦的關聯分析。

1對象與方法

1.1對象選取2014-10至2015-10于秦皇島市第一醫院產科住院的重度子癇前期患者60例(病例組)，平均(21.2±4.01)歲，平均孕周(33.5±2.13)周。選擇同期門診產檢及住院的健康孕婦共70例(對照組)，平均(23.03±3.09)歲，平均孕周(35.52±1.85)周。兩組孕婦均為中國漢族婦女、單胎、初產，均無內科其他合并癥及輸血史。HDCP的診斷標準參照謝幸及茍文麗主編的第八版《婦產科學》中的標準[5]。

1.2方法

1.2.1DNA的提取所有受試者均采取外周靜脈血2 ml，EDTA抗凝，-70 ℃保存，常規法提取DNA。

1.2.2PCR反應參考文獻[6] 設計引物。上游引物序列：5＇-ACAGCCTGACCGTGGAGAAG-3＇，下游引物序列：5＇-GAACGGACGCTCCATTCGGA-3＇。PCR總反應體系20 μl，包括PCRmix 10 μl，上游引物0.25 μl，下游引物0.25 μl，模板1 μl，ddH2O 8.5 μl，PCR反應條件設置為：95 ℃預變性5 min，然后94 ℃變性35 s，62 ℃退火40 s，72 ℃延伸30 s，35個循環后，72 ℃終末延伸5 min。應用1%瓊脂糖凝膠對上述PCR產物進行電泳鑒定，同時選擇2000 bp DNAmarker同時水平電泳，判定擴增片段長度及基因型。其中3R/3R基因型顯示320 bp條帶，3R/4R基因型顯示320 bp、350 bp兩條帶，4R/4R基因型顯示350 bp條帶。

1.2.3統計學處理根據Sabol等[4]的研究結果和分組方式，將3.5次和4次重復序列定義為高活性組(H/H)，2次、3次和5次重復序列定義為低活性組(L/L)。本研究未發現2次、3.5次及5次重復序列，故高活性組只包含4次重復序列，低活性組為3次重復序列。資料統計分析采用SPSS 11.5版軟件包進行，采用χ2檢驗比較各基因型和等位基因在重度子癇前期組及正常對照組的分布頻率差異，以及進行Hardy-Wein-berg遺傳平衡定律檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1PCR產物電泳結果3R/3R基因型顯示320 bp條帶，3R/4R基因型顯示320 bp、350 bp兩條帶，4R/4R基因型顯示350 bp條帶，本研究未發現2次、3.5次及5次重復序列(圖1)。

2.2MAO-A基因啟動子區基因型頻率的比較病例組MAO-A基因啟動子區基因型H/H、H/L、L/L的頻率分別為10%、40%和50%，與對照組的H/H、H/L、L/L基因型頻率11.4%、45.7%和42.9%(同前)比較，差異無統計學意義(χ2=0.66，P>0.05；表1)。

圖1　PCR電泳產物(MAO-A基因啟動子區不同基因型的電泳圖)

M為 2000bp Marker;1、3泳道為H/H基因型(350 bp)；2、4、5泳道為H/L基因型(320/350 bp)；6泳道為L/L基因型(320 bp)

表1　重度子癇前期組與正常孕婦組MAO-A基因啟動子區基因型頻率比較　(%)

注：病例組：重度子癇前期患者組；對照組：健康孕婦組

2.3MAO-A基因啟動子區等位基因頻率的比較病例組MAO-A基因啟動子區等位基因H、L的分布頻率分別為30.0%、70.0%，與對照組的等位基因頻率34.3%、65.7%比較，差異無統計學意義(χ2=0.54，P>0.05；表2)。

表2　重度子癇前期組與正常孕婦組MAO-A基因啟動子區等位基因頻率比較　(%)

注：病例組：重度子癇前期患者組；對照組：健康孕婦組

2.4Hardy-Wein-berg遺傳平衡定律檢驗

HH∶HL∶LL與p2∶2pq∶q2相符，由此可證明該群體是一個平衡群體。

3討論

妊娠期高血壓是妊娠與血壓升高并存的一組疾病，包括妊娠期高血壓、子癇前期、子癇以及慢性高血壓并發子癇前期和慢性高血壓合并妊娠，發生率5%～12%。該組疾病嚴重影響母嬰健康，是孕產婦和圍產兒病死率升高的主要原因。病因至今不明，具有家族傾向性，提示遺傳因素與該病發生有關，但遺傳方式尚不明確。在子癇前期的遺傳易感性研究中，盡管目前已定位了十幾個子癇前期染色體易感區域，但在該區域內進一步尋找易感基因仍面臨很大的挑戰[5]。

張麗紅等[7]發現,血漿中腎上腺素及去甲腎上腺素含量與血壓呈正相關。Hernandez[8]等研究證實，血中兒茶酚胺水平的變化，可以影響血壓，并與高血壓相關。Missouris等[9]發現，在未接受治療的高血壓患者,尿去甲腎上腺素分泌增加，并與高血壓的嚴重程度呈正相關。

單胺氧化酶A(MAO-A)是兒茶酚胺代謝過程中的主要降解酶，其酶的活性導致血中兒茶酚胺水平的變化，可能在妊娠期高血壓疾病的發病過程中起一定的作用，MAO-A的基因位于X 染色體p11.23-11.4區,其中啟動子區存在30bp的可變數串聯重復(MAOA-uVNTR)多態現象，該多態現象與MAO-A活性相關，被認為是MAO-A基因功能的標志物，該重復序列可出現3～6次的重復，其中3次重復的基因會使所編碼的酶活性降低，3.5次或4次重復的等位基因較之3次與5次重復的基因轉錄活性高了2～10倍[4]。以往的研究顯示，低表達的MAO-A基因容易導致酗酒、攻擊性和反社會行為，它甚至被一些科學家稱為“戰士”基因，但對于該基因多態性與重度子癇前期疾病的研究我國目前尚無相關報道。因此，本研究采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性分析(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)方法，探討重度子癇前期患者MAO-A基因啟動子區30bp的可變數串聯重復(MAOA-uVNTR)多態現象與正常孕婦的關聯分析。結果發現,MAO-A基因啟動子區的等位基因和基因型分布在重度子癇前期組和對照組中差異無統計學意義。表明MAO-A基因啟動子30-bp重復序列多態性與重度子癇前期的發病無相關性。但妊娠期高血壓疾病的發生和發展是極其復雜的過程，影響子癇前期基因型和表型的其他因素如：多基因型、基因種族差異、基因相互作用及環境等，特別是基因和環境相互作用是極其重要的。此外由于本研究樣本量的限制, 我們并不排除MAO-A基因在重度子癇前期易感性中的作用, 有待擴大樣本進一步研究。我們還認為, 對該位點和其它可能位點進行聯合分析, 如該基因上的其它多態以及鄰近基因位點等的共同分析, 將可能揭示MAO-A 基因在重度子癇前期病因中的作用。

【參考文獻】

[1]Zhang W Y,Wang L,Liu L L.The study of levels of norepinephrine and dopamine-β-hydroxylase in patients with pregnancy-induced hypertension[J]. Chin Med l J,2001,64(6):351- 356.

[2]Kaaga R J,Leinonen A,Moore P,etal. Effect of changes in body posture on vaso-active homones in pre-eclamptic women[J]. Journal of human hypertension,2004,18(11):789-794.

[3]王麗，張為遠.正常妊娠和妊娠高血壓綜合征母嬰兒茶酚胺水平測定[J].中華婦產科雜志，2000,35(4):233-234.

[4]Sabol S Z, Hu S, Hamer D.A functional polymorphism in the monoamine oxides A gene promoter[J].Hum Genet, 1998,103(3):273-279．

[5]謝幸,茍文麗.婦產科學[M].8版.北京:人民衛生出版社,2013: 64-73.

[6]張蕓,明慶森,朱熊兆,等.單胺氧化酶A基因多態性與兒童期虐待對青少年攻擊行為的影響[J].中華精神科雜志，2014,47(2)：84-89.

[7]張麗紅,郭瑤,姚常柏,等.頸交感神經干離斷對妊娠期高血壓疾病大鼠兒茶酚胺水平的影響[J].中國醫科大學學報,2006,35(1):5-7.

[8]Hernandez M, Hernandez I, Rodriguez F,etal.Endothelial dysfunction in gestational hypertension induced by catechol-O-methyltransfense inhibition[J].Exp Physiol，2013,98(3)：856-866．

[9]Markandu N D,He F J,Papavasileiou M V,etal. Urinary catecholamines and the relationship with blood pressure and pharmacological therapy[J].Journal of hypertension,2016,34(4):704-709.

(2015-04-19收稿2016-03-21修回)

(責任編輯梁秋野)

基金項目：河北省秦皇島市科技支撐項目(編號201302A086)

作者簡介：孫燕，碩士，主治醫師。

【中國圖書分類號】R714.246

Association between severe preeclampsia and mononmine oxidase A gene

SUN Yan1, HOU Xuejing1，and GUO Hongmei2.1.

Department of Obstetrics, The First Hospital of Qinhuangdao, Qinhuangdao 066000, China;2.Department of Stomatology, General Hospital of Chinese People’s Armed Police Force,Beijing 100039,China

【Abstract】ObjectiveTo analyze the impact of this polymorphism of monoamine oxidase A(MAO-A) variable number tandem repeat (VNTR) on the risk of severe preeclampsia.MethodsSixty pregnant women wih severe preeclampsia and seventy normal pregnant women were genotyped for MAO-A VNTR polymorphism using PCR-based restriction fragment length polymorphism method.ResultsSignificant differences were not observed between the case group and normal controls in the frequencies of MAO-A VNTR alleles and genotypes.ConclusionsThere is no significant difference in the allele and genotype frequencies of MAO-A gene between case group and normal controls . Our results show that MAO-A VNTR polymorphism perhaps can no increase the risk of severe preeclampsia.

【Key words】severe preeclampsia; MAO-A；gene polymorphism