正交試驗(yàn)法篩選芪術(shù)膠囊的提取工藝

崔翠翠　王瑛蘭　劉元昆

（威海市中醫(yī)院，山東 威海 264200）

正交試驗(yàn)法篩選芪術(shù)膠囊的提取工藝

崔翠翠王瑛蘭劉元昆

（威海市中醫(yī)院，山東 威海 264200）

目的：篩選芪術(shù)膠囊的最佳提取工藝。方法：以提取次數(shù)、時(shí)間、加水量為考察因素，以出膏率、沒(méi)食子酸和馬錢苷含量為指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)，優(yōu)選芪術(shù)膠囊的最佳提取工藝。結(jié)果：最佳提取工藝為：藥材加10倍量水，煎煮提取2次，每次1 h。結(jié)論：優(yōu)選出的提取工藝合理可行，為實(shí)際生產(chǎn)及其質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

芪術(shù)膠囊；提取工藝；出膏率；沒(méi)食子酸；馬錢苷；正交設(shè)計(jì)

芪術(shù)膠囊是本院專家的臨床經(jīng)驗(yàn)方，已經(jīng)作為院內(nèi)制劑在本院生產(chǎn)使用，并取得了良好的治療效果。該處方由山茱萸、山藥、白術(shù)、黃芪、丹參、甘草等11味中藥組成，功于補(bǔ)腎健脾、益氣通陽(yáng)、活血化瘀。適用于脾腎陽(yáng)虛，血脈瘀阻證的慢性萎縮性胃炎。癥見(jiàn)胃脘疼痛、食欲不振、疲乏無(wú)力、煩躁易怒、胃部發(fā)涼，舌質(zhì)淡或有瘀斑、苔薄白，脈虛弱等。為了規(guī)范該制劑的提取工藝，本文以出膏率、沒(méi)食子酸和馬錢苷的含量為指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)對(duì)芪術(shù)膠囊的提取工藝進(jìn)行研究，以期篩選該制劑提取的最佳工藝條件。

1　儀器和試藥

Agilent1220高效液相色譜儀（美國(guó) Agilent公司）。

試驗(yàn)所用藥材均購(gòu)于山東菏澤泰山中藥飲片有限公司，符合2010年版《中國(guó)藥典》（一部）相關(guān)規(guī)定。所用樣品均由威海市中醫(yī)院制劑室生產(chǎn)。沒(méi)食子酸對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，供含量測(cè)定用，批號(hào)：110831-200803）；馬錢苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，供含量測(cè)定用，批號(hào)：111640-201005）；高效液相用乙腈（色譜純）；其余試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)

對(duì)該處方中有效成分為水溶性成分的5味中藥采用傳統(tǒng)水提取的制備方法。方中君藥山茱萸的主要有效成分為揮發(fā)油類、糖苷類和有機(jī)酸類［1］。馬錢苷為山茱萸的主要有效成分，具有明顯的免疫抑制活性和抗炎作用［2］，山茱萸抗家兔失血性休克和心源性休克的作用成分初步研究表明是馬錢苷等［1］，沒(méi)食子酸具有抗炎、抗氧化、抗突變、抗腫瘤等多種生物學(xué)活性［3］。本試驗(yàn)以出膏率、沒(méi)食子酸和馬錢苷的含量作為指標(biāo)，以提取次數(shù)、加水量和提取時(shí)間為考察因素，每個(gè)因素3個(gè)水平，見(jiàn)表1。

表1　因素水平

2.2樣品的制備

藥材投料量為處方的 1/10，共計(jì) 36 g，取 9份，按照正交試驗(yàn)安排進(jìn)行提取，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至100 mL。

2.3出膏率的測(cè)定

取各樣品25 mL，濃縮，干燥，精密稱定，計(jì)算出膏率。

出膏率=干膏質(zhì)量×4/原藥材質(zhì)量×100%。

2.4沒(méi)食子酸和馬錢苷含量測(cè)定［4］

2.4.1供試品溶液制備取樣品1 mL用甲醇稀釋溶解至5 mL，0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得。

2.4.2對(duì)照品溶液制備分別精密稱定沒(méi)食子酸和馬錢苷對(duì)照品適量，加75%甲醇溶解并定容得混合對(duì)照品，使沒(méi)食子酸和馬錢苷的濃度分別為5 mg/L和10 mg/L。

2.4.3陰性對(duì)照樣品溶液制備取除山茱萸外其他藥材處方量的 1/10，共計(jì) 30 g，加 8倍量水煎煮兩次，每次煎煮2小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至100 mL。作為陰性對(duì)照溶液。

2.4.4色譜條件色譜柱：Agilent SB C18柱（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：A為乙腈，B為0.1%磷酸溶液，采用梯度洗脫法洗脫，具體洗脫程序見(jiàn)表2；檢測(cè)波長(zhǎng) 0～ 7 min：270 nm，7～ 26 min：240 nm；柱溫30℃；流速：1 mL/min。圖譜見(jiàn)圖1。

表2　梯度洗脫程序

2.4.5樣品含量測(cè)定分別精密吸取混合對(duì)照品溶液10，20 μL，供試品溶液 20 μL，陰性對(duì)照品溶液20 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。

A對(duì)照品；B樣品；C陰性對(duì)照；1沒(méi)食子酸；2馬錢苷?qǐng)D1　沒(méi)食子酸和馬錢苷HPLC圖

2.5數(shù)據(jù)處理與分析

有關(guān)試驗(yàn)數(shù)據(jù)及其計(jì)算分析結(jié)果見(jiàn)表3～4。出膏率、沒(méi)食子酸和馬錢苷含量3個(gè)指標(biāo)進(jìn)行加權(quán)，分別為50，25，25分，對(duì)總分進(jìn)行方差分析。可見(jiàn)空白列D項(xiàng)R值小，為誤差項(xiàng)，計(jì)算可知A、B因素對(duì)結(jié)果有顯著差異，C因素對(duì)結(jié)果影響不顯著。由表3的簡(jiǎn)單比較可知，對(duì)于A，K2＞K3＞K1，故因素A選擇水平2，即提取2次；對(duì)于B，K3＞K2＞K1，因素B選擇水平3，即加水量10倍，對(duì)于C，K1＞K2＞K3，因素C選擇水平1，即提取時(shí)間1 h，從而確定最佳提取工藝為A2B3C1，即加10倍量水，煎煮提取2次，每次1 h。

2.6驗(yàn)證試驗(yàn)

按照“2.5”項(xiàng)下優(yōu)選出的芪術(shù)膠囊提取工藝條件制備3批樣品，分別測(cè)定指標(biāo)成分的含量，并按“2.3”及“2.4”項(xiàng)下的方法計(jì)算出膏率、沒(méi)食子酸和馬錢苷的含量，結(jié)果見(jiàn)表5。

3小結(jié)和討論

3.1以提取次數(shù)、加水量和提取時(shí)間為考察因素，以出膏率、沒(méi)食子酸和馬錢苷的含量作為指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法，優(yōu)選芪術(shù)膠囊的提取工藝，結(jié)果其最佳工藝為加10倍量水，煎煮提取2次，每次1 h。加水量是影響煎出液質(zhì)量的主要因素。驗(yàn)證試驗(yàn)說(shuō)明優(yōu)選的工藝條件穩(wěn)定可行。

3.2在預(yù)試驗(yàn)中曾選擇將5號(hào)樣品定溶于75%的乙醇和75%的甲醇溶液中，分別對(duì)其進(jìn)行穩(wěn)定性

表3　芪術(shù)膠囊正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

表4方差分析考察，發(fā)現(xiàn)75%的乙醇溶液穩(wěn)定性差，2 h以后馬錢苷的含量明顯降低；75%的甲醇溶液穩(wěn)定性好，分別放置0，2，4，8，12 h后進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果計(jì)算得馬錢苷和沒(méi)食子酸峰面積的RSD分別為1.83% 和1.36%，表明定溶于75%甲醇溶液的樣品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

注：F0.05（2，2）=19.00；F0.01（2，2）=99.00

表5　驗(yàn)證試驗(yàn)樣品各指標(biāo)成分含量測(cè)定結(jié)果

［1］劉洪，許惠琴.山茱萸及其主要成分的藥理學(xué)研究進(jìn)展［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，19（4）：254-256.

［2］率曉東，楊勝，齊春會(huì)，等.山茱萸免疫活性部位F-1C的免疫抑制作用［J］.中國(guó)天然藥物，2004，2（1）：50-53.

［3］ 李肖玲，崔嵐，祝德秋.沒(méi)食子酸生物學(xué)作用的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)藥師，2004，7（10）：767-769.

［4］楊凌，朱昱，王曉華.HPLC檢測(cè)山茱萸中沒(méi)食子酸和馬錢苷的含量［J］.陜西中醫(yī)，2013，34（8）：1057-1059.

Optimization of Extraction Process of Qizhu Capsules by Orthogonal Experiment

Cui Cuicui，Wang Yinglan，Liu Yuankun（Weihai TCM Hospital，Shandong Weihai 264200，China）

Objective：To screening the optimal extraction process of qizhu capsules.Methods：The extraction process of qizhu capsules was optimized by orthogonal experiment using the extraction rate and the contents of gallic acid and loganin as indexes，while extraction times，time duration for extraction and water volume as factors. Results：The extraction process was optimized as extraction with 10 times of volume of water for 2 times，1 hour for each.Conclusion：The optimized extraction process is reasonable and feasible，which provides a basis for the actual production and quality control of the drug.

Qizhu Capsules；Extraction Process；Extraction Rate；Gallic Acid；Loganin；Orthogonal Experiment

10.3969/j.issn.1672-5433.2016.06.007

崔翠翠，女，碩士，主管藥師。研究方向：中藥學(xué)。通訊作者E-mail：cuiatpingdu@163.com

2016-02-19）