北疆地區規模化豬場豬瘟抗體水平檢測與分析

劉　鴿　張培生　于會舉　張　倩　劉功成　屈勇剛楊慧敏

北疆地區規模化豬場豬瘟抗體水平檢測與分析

劉鴿張培生于會舉張倩劉功成屈勇剛*楊慧敏

（石河子大學，新疆石河子 832003）

為了解2014年1月至2016年3月北疆地區豬瘟 （CSF）的免疫抗體水平，試驗從克拉瑪依、沙灣、石河子、瑪納斯4個不同區域的16個規模化豬場采集血液樣品共計890份，采用間接ELISA法檢測其抗體水平，結果發現CSF的平均抗體陽性率為89.89%，達到國家規定水平 （70%）。16個規模化豬場豬瘟抗體陽性率達85%及以上者占81.25%，抗體檢測達90%及以上者占56.25%，各豬場抗體水平差異極顯著 （＜0.01）。試驗發現4個不同區域豬場豬瘟平均抗體陽性率中：石河子區域陽性率最高，為97.33%；瑪納斯區域陽性率最低，為87.86%；但都在87%以上。4個不同區域豬場豬瘟抗體檢測陽性個體平均OD630值中：沙灣區域的平均OD630值最大，為1.425；石河子區域的平均OD630值最小，為1.131。該試驗結果表明北疆地域的上述4個不同區域CSF抗體水平較高，該結果在一定程度上可為北疆地區豬瘟防疫工作提供一定的參考。

CSFV；ELISA；抗體水平；陽性率

豬瘟（Classic Swine Fever，CSF）是由豬瘟病毒（Classic Swine Fever Virus，CSFV）引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，具有流行廣泛、發病率高、死亡率高、危害大的特點。國際獸醫局（OIE）將之列為必須上報的動物疫病，我國也將之列為一類動物傳染病。CSF是我國四大畜禽疫病之一，至今已流行80余年。20世紀90年代以后，一些原已宣布消滅豬瘟的歐洲國家（荷蘭、比利時、英國、德國、意大利、西班牙等）又相繼復發，我國一些地區的豬瘟發病率亦有上升趨勢［1］。目前，該病主要在亞洲、非洲、南美洲和歐洲等44個國家流行［2］。

我國豬瘟流行形勢復雜，沒有明顯規律性，是困擾我國養豬業健康發展的一大難題，防控任務十分艱巨［3］。針對我國目前豬瘟的流行現狀及特點做好免疫監測，保持豬群處于較高的群體免疫水平，堅決淘汰CSFV隱性感染種豬，是規模化豬場有效防控豬瘟的重要手段［4］。為了解2014年1月至2016年3月北疆地區CSF的免疫抗體水平，本試驗選擇克拉瑪依、沙灣、石河子、瑪納斯4個不同區域的16個規模化豬場進行，在一定程度上可為北疆地區豬瘟防疫工作提供一定的參考。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1樣品來源

2014年1月至2016年3月采自新疆北疆地區的克拉瑪依、沙灣、石河子、瑪納斯4個不同區域的16個規模化豬場不同類型豬（0～10日齡、11～20日齡、21～30日齡仔豬，后備母豬，經產母豬，種公豬），共采集血樣890份。

1.1.2材料和儀器

豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒（武漢科前生物制品有限責任公司，批號：20130101），自動酶標儀（美國Bio Tek儀器有限公司）、微量移液器（Eppendorf公司）、恒溫培養箱（北京市光明醫療儀器廠）。

1.2試驗方法

1.2.1采集樣品

對已選定的豬群一次性從前腔靜脈或耳靜脈采集血液3～5 mL/頭，室溫靜置30分鐘左右，待血清析出后，每份吸取1 mL血清于滅菌的1.5 mL EP管中，逐管標記，以4 000轉/分鐘離心10分鐘，可立即進行ELISA檢測，亦可放-20℃保存備用。

1.2.2間接ELISA檢測方法

按照試劑盒說明書的步驟測樣品OD630值。在試驗中，于豬瘟抗原包被微孔板加入經1∶40倍稀釋的對照血清和待檢血清，37℃溫育30分鐘后，抗原抗體結合，洗滌后加酶標二抗，與抗原抗體復合物溫育結合，再次洗滌后加TMB底物，混勻室溫避光顯色10分鐘，加終止液終止反應，在10分鐘內，用酶標儀630波長測定各反應孔中的OD630值，據OD630值對抗體水平進行判定。

1.2.3結果判定

在酶標儀上測各孔OD630值。試驗成立的條件是陽性對照孔平均OD630值≥0.6，陰性對照孔平均OD630值必須＜0.3。

樣品OD630值≥0.35，判為陽性；樣品OD630值＜0.35，判為陰性。

根據試劑盒說明書，按表1進行OD630值與抗體效價的轉換。

1.2.4統計分析

用SPSS軟件、Excel軟件對試驗數據進行統計分析，OD630值結果用平均值±標準差表示。

2試驗結果

2.1不同地區不同豬場的豬瘟抗體陽性率及抗體水平

豬場A～E在克拉瑪依區域，F～H在沙灣區域，I～L在石河子區域，M～P在瑪納斯區域。890份豬血清共檢出抗體陽性血清800份，陽性率為89.89%，OD630值平均值為1.309、標準差為0.657，平均效價為1∶256。A～P16個豬場中只有2個豬場（J、K）的豬瘟抗體水平低于國家規定水平（70%）。這2個豬場豬瘟抗體陽性率分別為68.89%和62.50%。結果見表2。

4個不同區域豬場豬瘟平均抗體陽性率，石河子區域最高，為97.33%；瑪納斯區域最低，為87.86%；但4個區域豬場豬瘟平均抗體陽性率都在87%以上，結果見表3。

4個不同區域的16個規模化豬場的豬瘟抗體檢測為陽性的，平均OD630值存在一定差異：平均OD630值＞1.200的豬場有11個，占68.75%；0.600≤平均OD630值≤1.200的豬場有5個，占31.25%；平均OD630值最大值為1.645，最小值為0.845；沙灣區域的平均OD630值最大，石河子區域的平均OD630值最小，但都大于1.100。結果見表2、表3。

2.2 16個規模化豬場豬群不同構成成分的豬瘟抗體水平

對16個規模化豬場豬瘟抗體水平進行分析，0～10日齡仔豬、11～20日齡仔豬、21～30日齡仔豬、后備母豬、經產母豬、種公豬的豬瘟抗體陽性率分別為87.50%、85.00%、81.25%、97.38%、85.34%、98.68%；發現三個不同階段的仔豬，隨日齡增大，豬瘟抗體陽性率有降低的趨勢；豬群不同構成成分之間的豬瘟抗體水平存在一定差異，豬群中種公豬的抗體水平最高，其次為后備母豬，21～30日齡仔豬的抗體水平最低（81.25%），但遠超過國家規定水平（70.00%）；豬群中各成分豬的豬瘟抗體陽性率均在81.00%以上，說明其具有較高的免疫水平。結果見表4。

表1　豬瘟抗體ELISA檢測OD630值與豬瘟間接血凝試驗 （HIA）效價的轉換

表2　北疆地區4個不同區域的16個不同規模豬場豬瘟免疫抗體檢測結果

表3　北疆4個不同區域豬場豬瘟抗體分析結果

3討論

3.1北疆地區豬瘟抗體水平相對較高

試驗結果表明，新疆北疆地區的克拉瑪依、沙灣、石河子、瑪納斯4個不同區域的16個規模化豬場中有14個豬場的豬瘟抗體陽性率在國家規定水平（70%）以上，只有2個豬場的豬瘟抗體陽性率低于70%，應分析產生這種結果的原因，并引起養豬企業和相關研究部門的高度重視。根據杜希珍等［5］研究報道，規模化豬場豬瘟疫情穩定需要豬瘟抗體合格率達到90%以上，北疆地區的16個規模化豬場中有9個豬場豬瘟抗體陽性率達90%以上，占56.25%，也就是說16個規模化豬場中超過半數的豬場達到此標準，并且其中有2個豬場的豬瘟抗體陽性率均為100%。此試驗結果在一定程度上說明新疆北疆地區的豬場豬瘟抗體水平較高，但不可否認有少數豬場的豬瘟抗體水平偏低，應引起重視，并采取及時有效的措施改變這種現狀，以求北疆乃至全疆生豬養殖事業獲得更好更快發展，為國民提供健康放心豬肉。

表4　北疆4個不同區域的16個規模化豬場豬群不同構成成分的豬瘟抗體水平

3.2豬群不同構成成分豬瘟抗體水平存在一定差異

對0～10日齡仔豬、11～20日齡仔豬、21～30日齡仔豬、后備母豬、經產母豬和種公豬的豬瘟抗體水平檢測發現，種公豬和后備母豬的豬瘟抗體陽性率均在97%以上，均屬較高的免疫水平，而經產母豬的豬瘟免疫水平有待提高，三個不同階段的仔豬的豬瘟抗體陽性率隨日齡增大有下降趨勢，其中仔豬出生20天后抗體水平有下降增快的趨勢，這可能與母源抗體有一定的關系，提示在仔豬出生后應在適宜的時間及時做好免疫接種工作。曹劍等［6］用HIA法對仔豬母源抗體效價進行動態監測，結果顯示，母源抗體在15～21日齡達到最高值，21日齡后逐漸降低，于35日齡達到抗體保護臨界值，與本次研究結果基本相符。提醒畜牧獸醫工作者要在仔豬出生后20天左右時及時有效地實施豬瘟免疫接種，并提供良好的飼養環境，在免疫接種的同時增強自身抵抗力，促進仔豬群更健康地生長，為豬群后續發展打下良好基礎。

3.3豬瘟首免時間的確定

確定豬瘟首免時間非常重要，北疆地區豬瘟首免多數在出生后30天左右，二免在出生后60天左右，但也應根據豬群情況而定，有的豬場應提前進行豬瘟免疫接種，在出生后50天時進行豬瘟二免。調查中發現，也有豬場在仔豬出生后25天時進行首免，這與我們試驗結果（仔豬出生20天后抗體水平有下降增快的趨勢）相一致。

［1］殷震，劉景華.動物病毒學 ［M］.2版.北京：科學出版社，1997：652-664.

［2］Stark R，Romenapf T，Meyers G，et al.Genomic localization of hogcholera virus glycoproteins［J］.Virology，1990（1）：280-286.

［3］覃紹敏，謝彬，馬玲，等.某規模化豬場豬瘟抗體水平及其野毒感染的檢測與分析［J］.黑龍江畜牧獸醫，2011（17）：92-94.

［4］李嬌，沈志強，祖立闖，等.間接ELISA在豬瘟抗體檢測上的應用［J］.動物醫學進展，2012，33（6）：126-129.

［5］杜希珍，高麗娜，趙海山，等.規模化豬場母豬群豬瘟抗體血清學調查［J］.豬業科學，2009，26（6）：86-88.

［6］曹劍，張磊，李巖.規模化豬場仔豬豬瘟母源抗體效價動態檢測［J］.新疆農墾科技，2012（2）：26-27.

S858.28

A

1673-4645（2016）07-0046-04

2016-05-05

新疆石河子市農業科技攻關項目（2013NY04）

劉鴿（1986-），山東淄博人，碩士研究生，主要從事動物傳染病診斷與防治工作，E-mail：1539881644@qq.com

屈勇剛（1971-），男，陜西渭南人，副教授，主要從事動物傳染病診斷與防治工作，E-mail：quyonggang@shzu.edu.cn