透骨消痛膠囊中巴戟天的藥代動力學

范哲賢，楊　　霖，李孝棟（福建中醫藥大學藥學院，福建 福州 350122）

透骨消痛膠囊中巴戟天的藥代動力學

范哲賢，楊霖，李孝棟
（福建中醫藥大學藥學院，福建 福州 350122）

目的研究透骨消痛膠囊中巴戟天的藥代動力學。方法采用高效液相色譜法，考察藥代動力學參數，得去乙酰基車葉草苷酸的回歸方程。結果線性關系良好，精密度高，提取回收率、符合生物樣本分析的要求。結論高效液相色譜法可作為研究巴戟天中去乙酰基車葉草苷酸的有效工具。

透骨消痛膠囊；去乙酰基車葉草苷酸；藥代動力學；高效液相色譜法

膝骨性關節炎（knee osteoarthritis，KOA），是一種以關節軟骨的變性、破壞及骨質增生為特征的慢性關節病，隨著我國進入老齡化社會，其發病率有增加的趨勢。透骨消痛膠囊是劉獻祥教授的經驗方［1-2］，為福建中醫藥大學附屬第二人民醫院的院內制劑，具有補腎柔肝、活血祛風的作用。前期研究［3-5］發現，該膠囊用于KOA療效較好。它以巴戟天為君藥，具有抗腫瘤、強壯骨骼、抗疲勞、抗炎鎮痛、補血、促進造血干細胞增殖和分化等作用［6-8］。去乙酰基車葉草苷酸是巴戟天環烯醚萜苷類成分之一，具有較強的抗炎、鎮痛作用，為巴戟天祛風濕的物質基礎成分［9-11］。本實驗采用HPLC法研究巴戟天在大鼠血液中的代謝和分布，為透骨消痛膠囊的作用機制研究提供實驗依據。

1材料

1.1儀器LC-20AT型高效液相色譜儀（日本島津公司）；AR-2140十萬分之一電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；FA2004N電子天平（上海精密科學儀器有限公司）；VXH-3型微型旋渦混合器（上海躍進醫療器械廠）；TDL80-2B型高速離心機、TDL-4型低速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；KQ-500E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；采血管 （江蘇康健醫療用品有限公司，批號：120101）。

1.2試藥透骨消痛膠囊（福建中醫藥大學附屬第二人民醫院院內制劑，批號：20141017）；去乙酰基車葉草苷酸對照品（上海將來實業有限公司，批號：JL14022530）；甲醇（國藥集團化學試劑有限公司，色譜純，批號：20140323103）；其它試劑均為分析純。

1.3動物清潔級健康雄性SD大鼠，體質量（250± 10）g，上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供，許可證號：SCXK（滬）2012-0002。

2透骨消痛膠囊灌胃溶液配制

稱取透骨消痛膠囊內容物3.7 g置于100 mL瓶中，加純化水超聲，使內容物形成均勻的混懸狀態，用純化水定容，搖勻，即得相當于成人每日臨床劑量的藥物溶液。

3給藥方法與血樣采集

取大鼠60只，按體質量隨機分為10組，每組6只。1組灌胃生理鹽水，其余9組灌胃透骨消痛膠囊內容物溶液，按10 mg/kg劑量灌胃給藥，在給藥后30、45 min，1、2、4、6、8、10、24 h，通過眼眶采血2.5 mL，置于含乙二胺四乙酸的采血管中，3 800 r/min離心10 min，吸取上清液血漿，-20℃保存備用。

4高效液相色譜法

4.1色譜條件色譜柱：Vision HT C18（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；去乙酰基車葉草苷酸流動相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（5∶95）；檢測波長：237 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：25℃。

4.2血漿樣品預處理取血漿樣品100 μL置1.5 mL具塞塑料離心管中，加甲醇200 μL，渦旋2 min混勻，14 000 r/min離心 10 min，取上清液作為HPLC檢測樣品，進樣10 μL。

4.3線性關系精密稱取去乙酰基車葉草苷酸對照品2.09 mg，置10 mL瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得去乙酰基車葉草苷酸209 μg/mL的對照品儲備液。用甲醇梯度稀釋，得去乙酰基車葉草苷酸濃度分別為 4.18、20.9、41.8、83.6、104.5、209.0 μg/mL的對照品溶液。取大鼠空白血漿100 μL，加入上述系列對照品溶液200 μL，按4.2項操作，以血漿樣品質量濃度（C）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標作圖，得去乙酰基車葉草苷酸的回歸方程：

Y＝19166C＋11125r＝0.9995

結果表明，混合藥物總質量濃度在 （2.79～139.33）μg/mL，線性關系良好。4.4方法專屬性取大鼠空白血漿100 μL，按4.2項操作。將濃度為41.8 μg/mL的去乙酰基車葉草苷酸對照品溶液加入空白血漿中，同法操作。取受試大鼠給藥后收集的血漿樣品，同法操作，結果見圖1～圖3。結果表明大鼠血漿中的內源性物質不干擾去乙酰基車葉草苷酸成分的測定。

4.5精密度實驗制備去乙酰基車葉草苷酸低、中、高3種濃度（5.57、27.87、69.67 μg/mL）的樣品，每個濃度平行做5份，按4.2項操作，測定日內精密度和日間精密度，結果低、中、高3種濃度去乙酰基車葉草苷酸的日內精密度和日間精密度RSD分別為0.09%、0.53%、1.13%和3.62%、1.48%、1.03%。

4.6提取回收率和方法回收率實驗制備低、中、高3種濃度的樣品，按4.2項操作，測定各成分的峰面積，并與相應濃度對照品甲醇溶液測得的峰面積相比，計算樣品的提取回收率，每個濃度平行做5份，結果低、中、高3種濃度水平去乙酰基車葉草苷酸的萃取回收率分別為113.24%（RSD為3.65%）、98.42%（RSD為3.65%）、109.95%（RSD為8.57%）。將各個樣品測得的峰面積代入回歸方程計算濃度，所得濃度與實際濃度的比值即為方法回收率，結果低、中、高3種濃度水平去乙酰基車葉草苷酸的方法回收率分別為105.36%（RSD為3.58%）、109.59% （RSD為1.67%）、95.05%（RSD為4.39%）。

4.7樣品穩定性考察制備低、中、高3種濃度的樣品，按4.2項操作，于室溫下放置3 d，每日吸取10 μL樣品測定1次，計算其3天的穩定性，結果低、中、高3種濃度水平去乙酰基車葉草苷酸的RSD分別為1.32%、1.59%、0.49%。

4.8藥代動力學參數大鼠灌胃口服透骨消痛膠囊后不同時間點血漿中去乙酰基車葉草苷酸平均血藥濃度-時間曲線見圖4。結合DAS2.0軟件確定房室模型，計算去乙酰基車葉草苷酸在大鼠體內各藥代動力學參數，結果表明，大鼠口服透骨消痛膠囊后其藥時曲線符合單室模型，藥動學參數見表1。

表1　　去乙酰基車葉草苷酸的藥代動力學參數（±s）

表1　　去乙酰基車葉草苷酸的藥代動力學參數（±s）

藥動學參數吸收速率常數（Ka）消除半衰期（T1/2）達峰時間（Tmax）最大血藥濃度（Cmax）血藥濃度-時間曲線下面積（AUC0～24）清除率（CL/F）表觀分布容積（V/F）單位h-1 h h μg/L mg·h/L參數值0.89±0.02 1.73±0.22 2.09±0.03 2.27±0.45 10.64±0.69 L/（kg·h）L/kg 1.29±0.21 3.86±0.39

由表1 Ka＝0.89/h、T1/2＝1.73 h可知，吸收入血快，分布迅速。因Tmax＝2.09 h，說明經過2.09 h達到最大血藥濃度Cmax＝2.27 μg/mL，T1/2＝1.73 h，CL/F＝1.29 L/（kg·h）。所以，藥物消除較慢，總濃度維持時間較長。

5討論

本實驗采用HPLC法，線性關系良好，精密度高，提取回收率和方法回收率，符合生物樣本分析的要求，為大鼠血漿中去乙酰基車葉草苷酸濃度分析及藥代動力學研究提供了一種較好的檢測方法。

［1］林木南，劉獻祥.透骨消痛方治療膝骨性關節炎30例［J］.福建中醫藥，2005，36（4）：15-16.

［2］黃云梅，陳文列，林如輝，等.透骨消痛膠囊促進成骨細胞的增殖和分化［J］.中國組織工程研究，2013，17（33）：5923-5928.

［3］陳燕，肖曉金，包俠萍，等.透骨消痛方鎮痛抗炎作用實驗研究［J］.中醫學報，2013，28（11）：1675-1676.

［4］吳廣文，褚劍鋒，許惠鳳，等.透骨消痛膠囊含藥血清對退變關節軟骨細胞表達TNF-α、IL-1β的影響［J］.世界中西醫結合雜志，2012，7（4）：295-298.

［5］吳廣文，葉錦霞，許惠鳳，等.透骨消痛膠囊對KOA大鼠關節軟骨uPA系統相關調節因子的影響 ［J］.世界中西醫結合雜志，2015，10（1）：22-26.

［6］林美珍，鄭松，田惠橋.巴戟天研究現狀與展望［J］.亞熱帶植物科學，2010，39（4）：74-78.

［7］高兆錦，鄭云霞.巴戟天有效成分及其藥理作用分析［J］.中國保健營養，2013，23（1）：435-436.

［8］祝海燕.中藥巴戟天的藥理作用研究概況 ［J］.浙江臨床醫學，2013，15（8）：1240-1242.

［9］王玉磊，黃世敬，遲德軍，等.巴戟天中主要環烯醚萜苷的穩定性研究［J］.中國實驗方劑學雜志，2011，17（21）：65-68.

［10］吳凌鳳，曾令杰.巴戟天化學成分與質量控制研究進展［J］.廣東藥學院學報，2012，28（1）：98-101.

［11］王玉磊，崔翰明，黃世敬，等.HPLC測定不同產地和批次巴戟天中主要環烯醚萜苷含量［J］.中藥材，2011，34（8）：1187-1190.

R285.5

B

1000-338X（2016）03-0014-02

2016-04-25

福建中醫藥大學重點學科專項（X2014099-學科）

范哲賢（1990—），男，2014級中藥學專業碩士研究生，主要從事中藥制劑及質量控制研究

李孝棟（1969—），男，教授。E-mail：lxdtcm@163.com