用兩種方法測定葡萄酒中甲醇含量的比較

譚桂華（湖南省南縣市場和質量監督檢驗所，湖南 南縣 413200）

?

用兩種方法測定葡萄酒中甲醇含量的比較

譚桂華（湖南省南縣市場和質量監督檢驗所，湖南 南縣 413200）

本文通過與蒸餾法-氣相色譜外標法比較，采用氣相色譜頂空外標法測定了葡萄酒中甲醇含量。結果表明，甲醇含量在（0～2000）μg/mL范圍內呈線性，同時做了回收率和精密度試驗，取得了滿意的結果，說明了氣相色譜頂空外標法的可行性。

頂空；外標法；回收率；精密度

葡萄酒是用新鮮的葡萄或葡萄汁經發酵釀成的酒精飲料。適度飲用紅葡萄酒具有美容養顏、抗衰老的功能。

但近些年來，有些企業投機倒把，從中牟取暴利。如果有用工業酒精酒精、香精和色素調配而成，工業酒精中含大量的甲醇；有的葡萄酒在釀制發酵過程中也會產生甲醇，如釀制不當，就會產生大量的甲醇。甲醇對人體具有強烈的毒性，其在人體新陳代謝中會氧化成比它毒性強得多的甲醛和蟻酸 （甲酸的俗稱），飲用含有甲醇的酒可導致人頭暈、頭痛等，還可造成失明、肝病，甚至是死亡。葡萄酒中含有大量糖類、氨基酸、色素、維生素等多種難揮發成分。這些物質因極性大而在氣相色譜毛細管色譜柱中死吸附，造成色譜柱的污染和柱效大大降低，從而使檢測結果的精密度和準確性都受到影響，造成色譜柱的使用壽命降低。加之葡萄酒中含有大量糖類，從而使之粘度大大增加，如果直接強行進樣，會使進樣針損壞，造成實驗成本大大增加。GB/T15038-2006采用了蒸餾后對其行預處理，去除樣品中不揮發性物質以保護色譜柱，直接進樣-氣相色譜外標法和由于甲醇的沸點比較低，采用了氣相色譜頂空法，兩種方法進行了比較。蒸餾-氣相色譜外標法定量（圖1甲醇出峰時間：4.09min），并用75%色譜純乙醇做了空白 （圖3乙醇的出峰時間：4.51min）。氣相色譜頂空法定量（圖2甲醇出峰時間：1.97min），并用75%色譜純乙醇做了空白（圖4乙醇的出峰時間：2.15min）（如圖5～6）。

圖1　蒸餾-氣相色譜外標法測定甲醇標準溶液氣相色譜圖

圖2　氣相色譜頂空法測定甲醇標準溶液氣相色譜圖

圖3　蒸餾-氣相色譜外標法測定75%色譜純乙醇氣相色譜圖

1　材料與方法

1.1儀器與試劑

氣相色譜儀 （附氫火焰離子化檢測器 （FID））：GC-2010型，日本島津；

圖4　氣相色譜頂空法測定75%色譜純乙醇氣相色譜圖

圖5　蒸餾-氣相色譜外標法測定葡萄酒樣品中甲醇氣相色譜圖

圖6　氣相色譜頂空法測定葡萄酒樣品中甲醇氣相色譜圖

頂空進樣器（與GC-2010配套）：HSS86.50意大利丹尼；

電子分析天平：AEY-210型，長沙湘儀；

無水乙醇、無水甲醇：色譜純（質量分數為99.9%），德國默克。

1.2方法

1.2.1色譜條件

色譜柱：30.0m×1.50μm（膜厚）×0.53mm（內徑）Rtx-1毛細管柱；

檢測器：溫度為：250℃，附氫火焰離子化檢測器（FID）；流速：載氣（N2）30mL/min，空氣400mL/min，氫氣40mL/min；

溫度：柱溫60℃，保留10min（蒸餾法-氣相色譜外標法）或4min（氣相色譜頂空法）；

氣化室：溫度為250℃，分流進樣（分流比為1：10）；

進樣量：1μL；

頂空進樣器爐溫：70℃。

1.2.2分析步驟

（1）樣品制備

①蒸餾-氣相色譜外標法：取葡萄酒樣100mL于100mL容量瓶中，倒入蒸餾瓶中，分別用50mL超純水洗滌容量瓶三次，合并于蒸餾瓶中，用原100mL容量瓶作接收瓶。當蒸餾接近100mL時停止蒸餾，并用超純水補齊至刻度。

②氣相色譜頂空外標法：用10mL容量瓶準確移取10mL的葡萄酒樣品，然后倒入20mL頂空瓶中，用標配膠塞封口。上機備用。

（2）測定：標準曲線制備：準確稱取1.0110g色譜純甲醇于100mL容量瓶中，用75%色譜純乙醇定容至刻度，搖勻作儲備液，此時甲醇儲備液濃度為10.11mg/mL。分別移取儲備液0mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00mL于50mL容量瓶中，用75%色譜純乙醇定容至刻度，搖勻。此時的濃度分別為0μg/mL、404.4μg/mL、808.8μg/mL、1213.2μg/mL、1617.6μg/ mL、2022.0μg/mL的甲醇標準溶液。

采用甲醇作為標準品進行分析檢測，以甲醇的質量濃度為橫坐標，相應的峰面積為縱坐標，得到標準曲線圖，見圖7～8。

圖7　用氣相色譜頂空外標法所建立的甲醇標準曲線圖

圖8　用蒸餾-氣相色譜外標法所建立的甲醇標準曲線圖

甲醇標準曲線方程為：

y=548.72x+21571，R2=0.9997

甲醇標準曲線方程為：

y=540.93x-30512，R2=0.9995

該標準曲線在甲醇濃度在（0～2000）μg/mL范圍內線性良好。

1.2.3甲醇結果計算

式中：w——葡萄酒樣品中甲醇的含量，mg/L；

v——試樣的體積，mL；

c——測定葡萄酒樣品中甲醇的含量，μg/mL；

v定——樣品的定容體積，mL。

2　結果與分析

2.1兩種方法測定葡萄酒中甲醇含量的測定

對六種不同葡萄酒樣品中的甲醇含量進行了測定，樣品分別按蒸餾-氣相色譜外標法和氣相色譜頂空外標法的前處理進行了處理。上機備用。測定結果見表1～2。

表1　蒸餾-氣相色譜外標法測定葡萄酒中甲醇含量

表2　氣相色譜頂空外標法測定葡萄酒中甲醇含量

由表1和表2可以看出，氣相色譜頂空外標法的結果明顯高于蒸餾-氣相色譜外標法，這主要是在蒸餾-氣相色譜外標法處理葡萄酒樣品的過程中，加入了超純水洗滌裝了葡萄酒樣品的容量瓶，另外葡萄酒樣品中也含有大量的水，我們知道甲醇中有羥基，為極性溶劑，它能與水形成氫鍵，從而使范德華力增大，導致甲醇未完全蒸餾出來，導致結果偏低。

2.2精密度和回收率的測定

蒸餾-氣相色譜外標法：在已知質量濃度的葡萄酒樣品取80mL于容量瓶中，分別加入3種濃度的甲醇標準品溶液10mL，用75%乙醇定容至100mL容量瓶中，倒入蒸餾瓶中，分別用50mL超純水洗滌容量瓶三次，合并于蒸餾瓶中，用原100mL容量瓶作接收瓶。當蒸餾接近100mL時停止蒸餾，并用超純水補齊至刻度。每個樣品連續測定6次，測定精密度和加標回收率（見表3）。

表3　蒸餾-氣相色譜外標法精密度和回收率的測定

氣相色譜頂空外標法：在已知質量濃度的葡萄酒樣品取8mL于容量瓶中，分別加入3種濃度的甲醇標準品溶液1mL，用75%乙醇定容至10mL，再倒入20mL的頂空瓶中制成樣品。由于本實驗采用的是頂空法，進入氣相的是取的氣體樣，不具備重復進樣的性質，每瓶樣品只能進一針，故而把每種濃度制備成樣品6瓶，對每一種濃度的6個樣品分別計算各種濃度加標量的精密度和回收率，檢驗方法具有穩定性和可行性，所得結果見表4。

表4　氣相色譜頂空外標法精密度和回收率的測定

由表3～4可知，氣相色譜頂空外標法加標量的回收率和精密度都明顯高于蒸餾-氣相色譜外標法，這進一步確認了氣相色譜頂空外標法得可行性。

3　結語

本文通過與蒸餾-氣相色譜外標法比較，建立了氣相色譜頂空外標法來準確測量葡萄酒樣品中甲醇含量的方法。這樣避免了在氣相色譜圖中直接進樣溶劑的保留時間與甲醇的保留時間的部分重疊，從而在很大程度上避免了結果不準確。通過以上數據，可以得出：用氣相色譜頂空外標法所測定的葡萄酒樣品中中甲醇的回收率和精密度都達到了很高的要求，說明了氣相色譜頂空外標法的可行性；而且前處理簡便易操作，氣相色譜圖雜質引入少，分離效果好，氣相色譜頂空外標法線性關系良好，為我們測定葡萄酒樣品中甲醇含量時，提供了一種思路。

譚桂華（1977-），女，工程師，本科，主要從事食品檢測方面的工作。

TS262.6

A

2095-2066（2016）09-0224-02

2016-3-12