老年原發(fā)性干燥綜合征患者干擾素-γ、Fas、FasL檢測的意義

李玉玲　冀林華

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗科，青海　西寧　810001)

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1血液科

老年原發(fā)性干燥綜合征患者干擾素-γ、Fas、FasL檢測的意義

李玉玲冀林華1

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗科，青海西寧810001)

目的探析干擾素(INF)-γ、Fas、FasL在原發(fā)性干燥綜合征(pSS)老年患者中的檢測意義。方法確診的尚未接受治療的40例初診pSS患者為PSS組，同期接受口外傷手術(shù)的22例女性健康者作為對照組。采用SP法檢測INF-γ、Fas、FasL的表達(dá)水平。比較兩組唇腺腺泡、唇腺導(dǎo)管的上皮細(xì)胞中INF-γ、Fas、FasL的陽性表達(dá)率，并對INF-γ、Fas、FasL行兩兩相關(guān)性分析。結(jié)果pSS組唇腺腺泡、唇腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞中INF-γ、Fas、FasL的陽性表達(dá)率均明顯比對照組高(P均<0.01)。唇腺腺泡的上皮細(xì)胞中，INF-γ與Fas呈正相關(guān)(r=0.83，P<0.01)；INF-γ與FasL呈正相關(guān)(r=0.46，P<0.05)；Fas與FasL呈正相關(guān)(r=0.62，P<0.01)。結(jié)論INF-γ、Fas、FasL很可能在pSS的整個發(fā)生發(fā)展過程中扮演了重要的角色，并在唇腺組織中異常表達(dá)。

干擾素-γ；Fas；FasL；原發(fā)性干燥綜合征

原發(fā)性干燥綜合征(pSS)屬于外分泌腺體，主要侵犯淚腺、唾液腺等，臨床特征主要是高度的淋巴細(xì)胞灶性浸潤，主要表現(xiàn)是口腔干燥癥、結(jié)膜炎、干燥性角，有時甚至累及全身多個系統(tǒng)和器官。作為彌漫性結(jié)締組織疾病之一的pSS，在我國的致病率達(dá)0.3%～0.7%，屬于多發(fā)病、常見病，好發(fā)于30～40歲或者是絕經(jīng)后的女性，老年人群中其致病率高達(dá)0.77%〔1〕。目前尚不明確老年pSS的病理機(jī)制。本文旨在通過對pSS老年患者唇線組織內(nèi)的干擾素(INF)-γ、Fas、FasL表達(dá)水平的檢測，探析其臨床意義。

1　資料與方法

1.1一般資料2012年4月至2015年8月我院血液風(fēng)濕科進(jìn)行門診及住院確診的尚未接受治療的40例初診pSS患者的臨床資料，均為女性，平均年齡(69.8±7.8)歲。診斷均符合2002年國際分類(診斷)標(biāo)準(zhǔn)，排除感染、高血壓、糖尿病等對研究結(jié)果會造成一定干擾的相關(guān)疾病。另外選取同期在我院接受口外傷手術(shù)的22例女性健康者作為對照組，平均年齡(70.1±8.1)歲。受試者均接受唇腺活檢術(shù)，具體操作由口腔外科醫(yī)師負(fù)責(zé)。兩組年齡無明顯差異。

1.2研究方法上海亞培生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的INF-γ、Fas、FasL免疫組化試劑盒。INF-γ、Fas、FasL表達(dá)水平的測定：采用SP法。將組織切片、脫蠟并水化；用pH6.0的檸檬酸緩沖液高溫高壓抗原修復(fù)；對內(nèi)源性過氧化物酶活性用3%雙氧水溶液進(jìn)行阻斷，于室溫下孵育10 min；室溫下在正常兔血清中封閉20 min；滴注一抗，于4℃下孵育過夜；將二抗注入其中，于室溫下孵育30 min；最后滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素，于室溫下孵育15 min；二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色；蒸餾水沖洗并終止顯色；復(fù)染、脫水、透明、封片，用顯微鏡進(jìn)行觀察。

1.3INF-γ、Fas、FasL染色結(jié)果判定采用雙盲法，由2名病理醫(yī)師閱片評定。細(xì)胞質(zhì)為黃色，則INF-γ、Fas、FasL為陽性。高倍鏡下每張切片隨機(jī)選取視野10個，且每個視野記錄細(xì)胞100個，綜合染色細(xì)胞數(shù)和強(qiáng)度在同類細(xì)胞數(shù)中的百分?jǐn)?shù)值評定：①根據(jù)細(xì)胞數(shù)在同類細(xì)胞數(shù)中的百分值進(jìn)行評分：低于25%計1分；25%～50%計2分；51%～75%計3分；超過75%計4分。②根據(jù)細(xì)胞著色的深淺進(jìn)行評分：細(xì)胞無顯色，0分；黃色，1分；棕黃色，2分；棕褐色，3分。總積分為上述兩項評分之乘積。總積分如果為0～3分，則為陰性(-)，低表達(dá)；4～6分，弱陽性(+)；7～9分，陽性()；超過9分，則為強(qiáng)陽性()。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS19.0軟件進(jìn)行t檢驗和χ2檢驗。

2　結(jié)　果

2.1唇腺腺泡和導(dǎo)管上皮細(xì)胞中INF-γ、Fas、FasL的檢測結(jié)果pSS組唇腺腺泡和導(dǎo)管上皮細(xì)胞中INF-γ、Fas、FasL的陽性表達(dá)率均明顯比對照組高(P均<0.01)。見表1。

表1　兩組唇腺腺泡和導(dǎo)管上皮細(xì)胞中INF-γ、Fas、FasL的檢測結(jié)果(n)

2.2pSS患者Fas、FasL與INF-γ、Fas與FasL表達(dá)的相關(guān)性分析在唇腺腺泡的上皮細(xì)胞中，INF-γ與Fas呈正相關(guān)(r=0.83，P<0.01)；INF-γ與FasL呈正相關(guān)(r=0.46，P<0.05)；Fas與FasL呈正相關(guān)(r=0.62，P<0.01)。

3　討　論

pSS屬于慢性全身性自身免疫性疾病，主要損害外分泌腺，對于患者的腺體組織受損機(jī)制目前尚未完全明確。pSS的發(fā)病與細(xì)胞凋亡存在一定的關(guān)系〔2〕。Fas抗原是腫瘤壞死因子(TNF)家族中的成員。作為Ⅰ型跨膜蛋白，F(xiàn)as定位于10q33，分子量是45 kD。Fas的天然配體是FasL，其也是TNF家族中一員，分子量是40 kD，屬于Ⅱ型跨膜蛋白〔3〕。Fas和FasL主要分布在自然殺傷細(xì)胞(NK)、T細(xì)胞及生殖細(xì)胞、肝、腎、心中，兩者的結(jié)合可以對凋亡信號進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)，對Fas所在細(xì)胞的整個凋亡過程起誘導(dǎo)作用〔4〕。細(xì)胞中各種蛋白對Fas功能活性起決定性的調(diào)節(jié)作用。腫瘤的發(fā)生往往與Fas的異常表達(dá)有關(guān)〔5〕。細(xì)胞凋亡往往通過Fas/FasL系統(tǒng)途徑發(fā)生，F(xiàn)as/FasL系統(tǒng)在參與免疫赦免、控制免疫應(yīng)答及誘導(dǎo)被激活的細(xì)胞凋亡、人體自身的耐受機(jī)制中均扮演著重要的角色〔6〕。

本文提示INF-γ、Fas、FasL均參與了老年pSS患者的發(fā)病過程；且在免疫調(diào)節(jié)、免疫相關(guān)性疾病等發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)歸過程中，細(xì)胞因子均發(fā)揮重要作用。在自身免疫性疾病的誘導(dǎo)、發(fā)展過程中，Th1和Th2細(xì)胞間的平衡發(fā)揮了關(guān)鍵性的作用〔7〕。Th1細(xì)胞通過表達(dá)FasL可以誘導(dǎo)靶細(xì)胞實現(xiàn)Fas途徑細(xì)胞凋亡〔8〕。INF-γ屬于Th1型細(xì)胞因子，其主要用于介導(dǎo)免疫應(yīng)答〔9〕。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的滑液和滑膜T細(xì)胞的功能性Fas抗原異常表達(dá)，抑制了患者體內(nèi)的Fas途徑的T淋巴細(xì)胞凋亡，同時還抑制了關(guān)節(jié)局部的巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、滑膜細(xì)胞等的凋亡，導(dǎo)致了滑膜細(xì)胞類腫瘤樣增生與滑膜細(xì)胞的活化，滑膜組織侵蝕性、增生性生長破壞了關(guān)節(jié)軟骨及其下面的骨〔10〕。

INF-γ可以對體外培養(yǎng)的所有腺上皮細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)，使其表達(dá)Fas及FasL，最終對上皮細(xì)胞的生存產(chǎn)生影響〔11〕。

本研究提示INF-γ作為炎癥及免疫反應(yīng)中關(guān)鍵性細(xì)胞因子，幾乎參與了各個階段免疫反應(yīng)，其中包括B和T細(xì)胞分化、增殖與活化，參與血管內(nèi)皮細(xì)胞、NK細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等的激活過程，誘導(dǎo)細(xì)胞表達(dá)主要組織相容性復(fù)合體(MHC)Ⅰ、Ⅱ類分子，可以對IgG類轉(zhuǎn)化起一定的促進(jìn)作用〔12〕。老年pSS患者INF-γ表達(dá)水平如果上升，不但會加劇腺體組織及自身免疫反應(yīng)的受損，同時還會誘導(dǎo)pSS唇腺組織大量表達(dá)Fas、FasL，加速細(xì)胞凋亡，破壞腺體結(jié)構(gòu)，減弱甚至丟失腺體分泌功能〔13〕。

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〔2014-12-25修回〕

(編輯苑云杰)

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.14.085

李玉玲(1975-)，女，主管檢驗師，主要從事臨床檢驗研究。

R392.1

A

1005-9202(2016)14-3536-02；