嗜麥芽窄食單胞菌產氨基糖苷類修飾酶基因APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ的克隆與表達

關小珊，關銳梨，鐘華敏，鄧秋連，謝永強，周珍文

(廣州市婦女兒童醫療中心兒童院區檢驗科　510120)

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·論著·

嗜麥芽窄食單胞菌產氨基糖苷類修飾酶基因APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ的克隆與表達

關小珊，關銳梨，鐘華敏，鄧秋連，謝永強，周珍文△

(廣州市婦女兒童醫療中心兒童院區檢驗科510120)

目的對嗜麥芽窄食單胞菌臨床分離株gzch810(SM gzch810)攜帶的產氨基糖苷類修飾酶基因APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ進行擴增、測序及原核表達，為下一步功能試驗的開展提供基礎材料。方法提取SM gzch810基因組染色體，PCR擴增APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ全基因并克隆入pMD18-T載體進行核苷酸序列分析；將APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ基因克隆至表達載體pGEX-4T-1，轉化大腸桿菌BL21，SDS-PAGE分析融合蛋白表達情況。結果以染色體DNA為模板，成功擴增800 bp APH(3′′)-Ⅰ基因和550 bp AAC(2′)-Ⅰ基因；序列比對分析顯示其與相關報道序列核苷酸和氨基酸一致性分別達91%及95%；SM gzch810 APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ序列已登錄GenBank(登錄號：HQ315852和HQ315853)；SDS-PAGE顯示，融合基因表達的蛋白相對分子質量分別約為56×103和46×103。結論從SM gzch810中成功克隆及表達了APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ基因，為下一步檢測上述兩種重組體大腸桿菌對相應抗菌藥物的耐藥性及其功能評價做好準備。

嗜麥芽窄食單胞菌；產氨基糖苷類修飾酶基因；克隆；原核表達

嗜麥芽窄食單胞菌(SM)為醫院內獲得性感染的重要病原菌之一，中國CHINET監測網2013年度耐藥監測數據表明，該菌占所有革蘭陰性菌的3.96%，非發酵菌的10.82%[1]；國外文獻報道，SM引起肺部感染的歸因死亡率高達20%～30%[2]。SM耐藥機制復雜，對大多數抗菌藥物耐藥，是臨床抗感染治療中的一道難題，其中對β-內酰胺類、喹諾酮類藥物的耐藥機制已有較多研究，但對氨基糖苷類藥物的耐藥研究則較少。……