東莞塘廈地區門診女性人乳頭瘤病毒感染調查

羅友軍，肖　媛，李廣平

(廣東省東莞三局醫院檢驗科　523710)

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·臨床研究·

東莞塘廈地區門診女性人乳頭瘤病毒感染調查

羅友軍，肖媛，李廣平

(廣東省東莞三局醫院檢驗科523710)

目的了解人乳頭瘤病毒(HPV)基因亞型在東莞塘廈地區女性人群中的感染狀況、型別分布和年齡分布等特點。方法選擇2013年1月至2015年12月東莞三局醫院皮膚性病科和婦科門診的女性宮頸脫落細胞標本共3 316例，應用導流雜交基因芯片技術對其進行分型檢測，分析HPV感染狀況及感染亞型的分布情況。結果HPV總感染率為25.21%(836/3 316)；HPV亞型的感染率高危型中較高的依次為52型(5.52%)，CP8304型(3.80%)，16型(3.71%)，58型(2.83%)，53型(2.68%)；低危型中6型(4.92%)，11型(3.80%)較高。其中單一型別感染率為16.04%，多重亞型混合感染率為9.17%。不同年齡段HPV感染率差異有統計學意義(P<0.05)。結論應加強對該地區高危人群的干預，降低HPV的感染率。

人乳頭瘤病毒；基因分型；分子雜交；廣東

人乳頭瘤病毒(HPV)是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬的球形DNA病毒，感染區域主要是人的皮膚和黏膜的基底層上皮細胞，并引起皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖，迄今為止已發現170種亞型[1]。據研究表明，在常見的HPV型別中分高危型別和低危型別，型別的不同導致它們的生物學特性及致病性各不相同，高危型別的HPV主要與宮頸上皮內瘤樣病變、宮頸癌等有關；而低危型別的HPV主要與外生殖器病毒性疣、軟下疳等良性病變有關[2]。不同的年齡階段對HPV的敏感程度存在一定的差異，此外也存在一定的地區差異，故HPV分型檢測對女性宮頸病變的隨訪治療，宮頸癌的早期篩查及預后判斷具有重大的臨床意義；研究不同地區HPV基因型分布情況也有很大的現實意義。本次應用導流雜交技術結合基因芯片技術對東莞塘廈地區門診女性的宮頸脫落細胞標本進行HPV基因型的檢測[3]，通過對檢測結果的研究分析，了解該地區女性人群HPV的感染情況，不同亞型感染率分布及不同年齡段感染情況。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇2013年1月至2015年12月本院皮膚性病科和婦科門診的女性宮頸脫落細胞標本共3 316例，年齡16～79歲，平均(38.7±11.3)歲,其中≤20歲98例，>20～30歲1 142例，>30～40歲1 256例，>40～50歲658例，>50～60歲138例，>60歲24例。

1.2儀器與試劑BIOER life Express PCR儀(杭州博日)；高速離心機(長沙湘儀離心機有限公司)；HybridMax醫用核酸分子快速雜交儀(廣東凱普生物科技股份有限公司)；檢測試劑為廣東凱普生物科技股份有限公司生產的21種HPV分型檢測試劑盒。

1.3方法21種HPV分型檢測試劑盒能檢測的基因型別包含16種高危亞型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304)和5種低危亞型(6、11、42、43、44)。

1.3.1宮頸脫落細胞標本的核酸分離提取取800 μL標本，嚴格按照試劑盒的說明書對標本進行離心、加熱等處理，提取標本核酸。

1.3.2標本核酸的PCR擴增按照試劑盒說明書配制PCR擴增試劑并分裝每管24 μL，加入待檢核酸1 μL，PCR反應總體積為25 μL，按試劑盒說明書進行40個循環擴增，獲得擴增產物。

1.3.3PCR產物雜交分析擴增產物95 ℃變性5 min，迅速放入冰水浴，嚴格按照試劑盒說明書將擴增產物加入到雜交儀中準備好的芯片膜條上進行雜交、洗膜、封阻、酶標、洗膜、顯色、洗膜等實驗步驟，實驗結束取出芯片膜條判讀結果。

1.3.4結果判讀根據說明書上雜交膜具體探針位置，其中Biotin為雜交反應對照點，IC點為PCR擴增反應對照點。正常結果的膜條中Biotin和IC這兩個點都會顯色，其他為陽性結果點。HPV單一型別感染時，在導流雜交膜芯片上相應的HPV亞型探針位點處可見一藍紫色圓點，多重型別復合感染時，在膜上可見2個或2個以上的顯色斑點。

1.4統計學處理檢測統計所得的數據采用SPSS17.0軟件進行統計學分析，計數資料采用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；以α=0.05為檢驗水準，P<0.05為差異有統計學意義。

2　結　果

2.1HPV陽性率及各基因型陽性率本次研究共檢測3 316例標本，其中HPV陽性標本共有836例，陽性率為25.21%。HPV亞型的高危型中感染率較高的5種依次為52型(5.52%)，CP8304型(3.80%)，16型(3.71%)，58型(2.83%)，53型(2.68%)；低危型中6型(4.92%)，11型(3.80%)較高。各亞型的陽性率見表1。

表1　HPV不同亞型陽性率[n(%)]

注：基因型陽性率指該基因型單一感染或多重感染時出現的陽性率,例如某患者檢測結果為HPV16、18、31三種型別復合感染，那么計算時分別在HPV16、HPV18、HPV31中各計數1次。

2.2HPV亞型感染的比例在836例陽性結果中，單一型別的感染為524例，占感染總數的62.68%(524/836)，多重型別的感染為312例，占感染總數的37.32%(312/836)。

2.3HPV感染與年齡分布經統計，在≤20歲組別中HPV陽性率最高，為39.80%，各年齡段之間的HPV陽性率比較，差異具有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2　HPV陽性率情況與年齡分布

3　討　論

HPV基因分型檢測技術是目前較先進的基因檢測技術，其將PCR技術的高靈敏度、導流雜交技術的高特異性及基因芯片技術的高通量特點相結合，一次實驗操作便能完成對21種HPV亞型的檢測，有很好的臨床應用價值。

HPV是一類以感染人體皮膚及黏膜復層鱗狀上皮細胞為主的乳頭瘤病毒，在女性生殖道中具有較高的感染率，據調查了解，很多關于HPV的研究表明了HPV 的感染情況存在著明顯的地區差異[4]。本次調查對3年來在本院的3 316例門診女性的宮頸脫落細胞標本進行檢測統計，結果的HPV感染率為25.21%，與全國的平均水平14.20%[5]相比，明顯高于該水平，也高于成麗虹[6]研究報道的東莞莞城區的HPV感染率(15.4%)和李燦等[7]研究報道的成都成華區的HPV感染率(19.0%)，與閆琛等[8]研究報道的鄭州地區HPV感染率(25.9%)接近。由此說明HPV的感染情況存在一定的地域差異。經統計分析，東莞塘廈地區的HPV感染情況主要以單一感染為主。在本次研究的結果中高感染率的型別中有52型(5.52%)，6型(4.92%)，11型(3.80%)，CP8304型(3.80%)，16型(3.71%)，58型(2.83%)，53型(2.68%)，因本次調查研究的標本對象有部分來自皮膚科門診的標本，所以低危型中的6型和11型有較高的感染率。鮑彥平等[9]報道的中國婦女子宮頸HPV型別分布的Meta分析中提出HPV16、HPV58、HPV52型在亞洲(尤其在中國是高發區)人群中具有重要的意義。這說明在各個地區HPV亞型的流行情況是不同的，這對疫苗的研發具有指導意義，因此在新一代的疫苗研發中，我國HPV疫苗的研發還應該對HPV52和58型予以重視。

此次研究中發現，HPV在≤20歲的年齡段和>60歲的年齡段中感染率較高，認為HPV的感染在趨于年輕化，這與≤20歲的年輕女性性行為提前，婚前性行為增多，性生活比較混亂，而高齡(>60歲)婦女隨著年齡的增加免疫力相對減弱有關。21～40歲年齡段的檢查例數最多，主要是因為該年齡段的女性性生活相對比較活躍，因而出現的婦科問題也相對比較多，檢測篩查的意愿相對也比較強。

通過調查統計了解本地區的門診女性人群HPV感染的情況，不同HPV型別的感染率及不同年齡段感染率分布情況，及早發現HPV感染的高危人群，及早干預治療、跟蹤隨訪，對于研究本地區的HPV流行病學，降低本地區女性人群的HPV感染率，降低女性宮頸癌的發病率有重大的意義。

[1]Bzhalava D,Guan P,Franceschi S,et al.A systematic review of the prevalence of mucosal and cutaneous human papillomavirus types[J].Virology,2013,445(1/2):224-231.

[3]陳占國，周武，許張曄，等．導流雜交方法檢測人乳頭狀瘤病毒分型的臨床應用[J]．中華醫院感染學雜志，2008，18(9)：1345-1348．

[4]張麗娜，周蓓蓓，陳昕華，等．區域性人乳頭狀瘤病毒基因型別檢測臨床研究[J]．中國婦幼保健，2010，25(16)：2216-2218．

[5]趙戴君，龔向真，胡爭光，等．上海市社區婦女子宮頸人乳頭瘤病毒感染現況及危險因素研究[J]．現代預防醫學，2010，37(10)：1867-1870,1872．

[6]成麗虹．東莞市莞城區婦女人乳頭瘤病毒感染率及其對HPV疫苗的認知情況調查[J]．深圳中西醫結合雜志，2015，25(19)：188-190．

[7]李燦，陳偉，趙靜，等．婦科門診病人HPV分型檢測及感染情況分析[J]．西南軍醫，2015，17(3)：253-255．

[8]閆琛，楊廣英．鄭州市女性HPV感染狀況及基因型的分布情況調查[J]．中外醫學研究，2012，10(5)：64-66．

[9]鮑彥平，李霓，王鶴，等．中國婦女子宮頸人乳頭瘤病毒型別分布的Meta分析[J]．中華流行病學雜志，2007，28(10)：941-946．

2016-02-19修回日期：2016-05-19)

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.15.052

A

1673-4130(2016)15-2177-03