兩種精子處理方法對精子活力及正常形態率影響比較

謝文燕　白愛紅

兩種精子處理方法對精子活力及正常形態率影響比較

謝文燕白愛紅

目的 比較上游法和密度梯度離心法對正常精液的處理效果。方法 回顧性分析2014年1月～2015年12月男方精液正常因女方因素來我院進行IUI的臨床資料，比較上游法和密度梯度離心法后處理前后精子活力及正常形態率。結果 兩種方法處理后精子活力和正常形態精子率均較處理前升高，精子活力的提高差異有統計學意義（P ＜0.05），與上游法相比，密度梯度離心法處理的精液具有更高的密度和正常形態精子比率（P＜0.05）。結論 對正常的精液，兩種處理方法均能得到合適的精子，但對于液化不好的，或者精子總數少的以及精液正常精子比例少的患者，可采用密度梯度離心法處理精液。

精液處理；上游法；密度梯度離心法

作者單位：漯河市中心醫院婦產科，河南 漯河 462003

宮腔內人工授精（intrauterine insemination，IUI）是將優選過的精子注入女性宮腔內，因其操作簡單，費用低，是輔助生殖技術的優先選擇項目［1-2］。精液處理是宮腔內人工授精的關鍵步驟，其目的是沒有精漿，細胞碎片及病原微生物污染的精子懸液，回收足夠量的正常形態活動力好的精子。目前常用的精液處理方法是上游法和密度梯度離心法。這兩種方法各有優缺點，目前沒有公認的最佳方法［3-5］。本研究回顧性分析2014年1月～2015年12月男方精液正常因女方因素來我院進行IUI的臨床資料，共213周期，通過比較上游法和密度梯度離心法后精子活力及正常形態比率，以期尋找最佳的精液處理方法。

1　材料與方法

1.1研究對象

選擇2014年1月～2015年12月于我院男方精液常規正常，因女方因素行IUI的患者，共213周期，96例。其中男方年齡23～39歲，不孕時間2～10年，原發性不孕58例，繼發性不孕38例。根據精液處理方法分為兩組，其中上游法處理103周期，密度梯度離心法處理110周期。上游組男性中原發不育31例，繼發不育15例，平均年齡（30.5±2.7）歲，平均不育年限（3±1.6）年，平均精液體積（3.5±1.9）ml；密度梯度離心組男性中原發不育27例，繼發不育23例，平均年齡（31.7±3.2）歲，平均不育年限（4±1.2）年，平均精液體積（4.4±2.1）ml；兩組男性一般資料差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2精液采集與處理

1.2.1精液采集 囑男方禁欲3～7 d，IUI當日手淫法排精。精液標本收集到一次性無毒取精杯中，37℃放置30 min。

1.2.2精液處理 待液化后分析精液常規參數，取10 μl精液涂片，自然晾干后采用巴氏染色法染片，油鏡下分析正常形態精子比率。

1.2.3上游法 在圓底試管里加入液化后的精液，上層小心加入等體積的培養液（QUINN’S Sperm Washing Medium），把試管45°放置于5% CO2，37℃培養箱中。半小時后吸取上清液，1 500轉/min離心10 min，棄上清。精子團用培養液稀釋至0.6 ml備用。處理后精液進行常規參數分析，10 μl精液涂片，自然晾干后采用巴氏染色法染片，油鏡下分析正常形態精子比率。1.2.4密度梯度離心法 在離心管中加入2 ml 80%梯度液（PureCeption），再小心加入等體積40%梯度液（PureCeption），把液化后的精液小心加入液面上。1 800轉/min離心15 min，棄上清液，僅留最底層精子團。用2 ml培養液懸浮，再次1 200轉/min離心5min。棄上清，精子團用培養液稀釋至0.6 ml備用。

1.2.5處理后精液進行常規參數分析，10 μl精液涂片，自然晾干后采用巴氏染色法染片，油鏡下分析正常形態精子比率。

1.3統計學處理

采用SPSS 13.0統計學軟件分析數據，計量資料采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

兩組處理前后精液參數結果：兩組方法處理前，精液密度、活力、正常形態率間差異沒有統計學意義（t精液密度=1.108 3，t活力=0.857 1，t正常形態率=0.993 7，P＞0.05）。兩組方法處理后，活力均較處理前明顯升高，差異有統計學意義（t上游法=14.564 5，t密度梯度離心法= 12.707 3，P＜0.05）；正常形態精子比例有升高，差異具有統計學意義（t上游法=3.564 6，t密度梯度離心法=6.786 1，P＜0.05）。兩種方法處理后的精子活力相似，差異沒有統計學意義（t=0.082 7，P ＞0.05）。上游法處理后精液密度低于梯度離心法處理的精液密度，差異有統計學差異（t=5.287 6，P＜0.05）。上游法處理后正常形態精子比率低于密度梯度離心法，差異沒有統計學意義（t=0.7840，P＞0.05），見表1。

3　討論

精液處理是人工授精取得成功的關鍵環節。其目的是獲得足夠數量的活動力好的精子，并使之同時獲能。把處理好的精子懸液注入女性宮腔內，縮短精子在女性生殖道內游動距離，以期提高妊娠率。

表1　兩組處理前后精液參數比較

本文中兩種方法處理后的精子數量均能達到標準，但上游法回收的精子數少于密度梯度離心法，這是因為上游的回收率依賴于精子團表面積和精子活動力，由于細胞團有多層細胞，有潛在運動能力的精子可能處在細胞團內部，不能達到與培養液接觸的界面［6］。采用上游法處理精液能達到去除精漿及精漿內抑制受精的物質，如前列腺素、異性蛋白、抗精子抗體及各種非精子細胞成分［7］。Erel等［8］認為，異常精子經密度梯度離心法處理后，得到精子的頂體反應率、低滲腫脹實驗陽性率和核成熟的精子比率均高于上游法，密度梯度離心法處理精液后精子回收率較高。但密度梯度離心法多次的離心可能會對精子微觀結構造成破壞。與上游法相比，密度梯度離心在增加正常精子數量方面顯出優勢［9］，這與我們的結果相似。

對正常的精液，兩種方法處理均能獲得用于人工授精的精子。但對于液化不好的，或者精子總數少的以及精液正常精子比例少的患者，可采用密度梯度離心法處理精液，以達到獲取足夠數量和活力精子的目的。

［1］張麗珠. 臨床生殖內分泌與不育癥［M］. 北京：科學技術出版社，2001：5.

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Comparison the Effect of Two Kinds of Processing Methods on Sperm Motility and Normal Morphology Sperm Rate

XIE Wenyan BAI Aihong Department of Obstetrics and Gynecology， Luohe Central Hospital， Luohe He’nan 462003， China

Objective To compare the treatment effect of normal sperm by Swim-up and density gradient centrifugation. Methods From January 2014 to December 2015， the clinical data of IUI because of female factors and male sperm normal were retrospectively analyzed to compare the effect of swim-up and density gradient centrifugation on sperm motility and normal morphology sperm rate. Results Sperm motility and normal morphology sperm rate were increased after two kinds of treatment， there was a significant difference in sperm motility （P＜0.05）， after density gradient centrifugation， density and normal morphology sperm rate were significantly higher than after Swim-up （P＜0.05）. Conclusion For normal sperm， two kinds of methods both can get a proper sperm，but for bad liquefied， less total sperm number and patients with normal sperm but low sperm percentage， density gradient centrifugation may be a better way.

Sperm preparation， Swim-up， Density gradient centrifugation

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.19.086

R698

A

1674-9308（2016）19-0135-03