間接免疫熒光法檢測(cè)抗核抗體與免疫印跡法檢測(cè)抗核抗體譜結(jié)果不一致的臨床意義分析

莫偉平　張泳儀（廣東東莞市人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，廣東 東莞 523000）

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間接免疫熒光法檢測(cè)抗核抗體與免疫印跡法檢測(cè)抗核抗體譜結(jié)果不一致的臨床意義分析

莫偉平張泳儀
（廣東東莞市人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，廣東 東莞 523000）

目的 探討間接免疫熒光法（IIF）檢測(cè)抗核抗體（ANA）與線性免疫跡法（LIA）檢測(cè)抗核抗體譜（ANAs）結(jié)果不一致的臨床意義分析。方法 對(duì)6121例標(biāo)本同時(shí)用IIF法檢測(cè)ANA，LIA法檢測(cè)ANAs，比較其二者的不符合率。結(jié)果 IIF-ANA-/LIA-ANAs+的有1107例，不一致率為22.5%。IIF-ANA+/LIA-ANAs-的有124例，不一致率為10.3%，在1107份IIF-ANA-/LIA-ANAs+標(biāo)本中，陽性率最高的前5種自身抗體是SSA/Ro60kd、SSA/Ro52kd、抗SmD1、抗SSB抗體、抗histones，陽性率為分別為29.62%、18.32%、10.20%、9.58%、8.61%。結(jié)論 在自身免疫性疾?。ˋID）臨床診斷中，應(yīng)聯(lián)合進(jìn)行IIF篩查ANA和LIA檢測(cè)特異性ANAs，避免單一方法檢測(cè)導(dǎo)致AID患者的漏診。

間接免疫熒光法；抗核抗體；線性免疫跡法；抗核抗體譜；自身免疫性疾病

ANA和ANAs的檢測(cè)目前已廣泛用于自身免疫性疾病（AID）的診斷與療效觀察。IIF用于總的ANA篩查試驗(yàn)，它不僅可以檢測(cè)出血清中是否存在ANA，還可獲知自身抗體所呈現(xiàn)的熒光模型。但要進(jìn)一步明確自身抗體的靶抗原就必須做ANAs檢測(cè)，LIA可能是目前對(duì)ANAs檢測(cè)最可靠的實(shí)驗(yàn)室研究方法［1］。但在實(shí)際工作中，我們發(fā)現(xiàn)IIF檢測(cè)ANA與LIA檢測(cè)ANAs結(jié)果不一致。筆者對(duì)2014年6121例臨床就診患者血清標(biāo)本同時(shí)采用IIF檢測(cè)ANA，用LIA檢測(cè)17種特異性自身抗體，比較2種檢測(cè)方法結(jié)果不一致的情況，并探討ANA與ANAs檢測(cè)結(jié)果之間的相關(guān)性及臨床意義。

1　資料與方法

1.1一般資料：選擇2014年1～12月在本院的同時(shí)申請(qǐng)檢測(cè)ANA和ANAs的門診和住院患者6121例。其中男1020例，年齡18～75歲，女5101例，年齡14～86歲。

1.2IIF檢測(cè)ANA：采用德國(guó)歐蒙公司提供的ANA（馬賽克）IIF試劑盒，商品號(hào)：FA1510-1005-1，每個(gè)反應(yīng)區(qū)含2種抗原復(fù)合基質(zhì)：HEP-2細(xì)胞和猴肝組織。以抗體滴度≥1∶100為陽性。

1.3LIA檢測(cè)ANAs：ANAs檢測(cè)采用LIA法，檢測(cè)試劑盒由深圳市亞輝龍生物科技有限公司提供，其試劑條含有17個(gè)測(cè)定項(xiàng)目：抗dsDNA、抗核小體抗體、抗組蛋白抗體（抗histones）、抗SmD1、抗增殖性細(xì)胞核抗原抗體（抗PCNA）、抗核糖體P蛋白抗體（抗P0）、抗SSA/Ro52kd、抗SSA/Ro60kd、抗SSB/La、抗著絲點(diǎn)蛋白B抗體（CenpB）、抗硬皮病70抗體（抗Scl-70）、抗U1-snRNP、抗線粒體M2型抗體（抗AMA-M2）、抗J0-1、抗多發(fā)性肌炎/硬皮病抗體（抗PM-Sc1）、抗Mi-2、抗Ku。將血清1∶100稀釋，嚴(yán)格按試劑說明書操作，肉眼判斷反應(yīng)結(jié)果。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié) 果

2.1對(duì)2014年6121例標(biāo)本同時(shí)用IIF檢測(cè)ANA和LIA檢測(cè)17種自身抗體，發(fā)現(xiàn)有IIF檢測(cè)ANA陽性1200例，占19.6%，陰性4921例，占80.4%，LIA檢測(cè)ANAs陽性1659例，占21.1%，陰性4462例，占70.9%。其中IIF-ANA-/LIA-ANAs+的有1107例，不一致率為22.5%。IIF-ANA+/LIA-ANAs-的有124例，不一致率為10.3%。見表1。

表1　IIF-ANA和LIA-ANAs的總體分布

2.2在1107份IIF-ANA-/LIA-ANAs+標(biāo)本中，中陽性率最高的前五種自身抗體是SSA/Ro60kd、SSA/Ro52kd、抗SmD1、抗SSB抗體、抗histones，陽性率為分別為29.62%、18.32%、10.20%、9.58%、8.61%，總占76.33%，其余的占23.67%。見表2。

3　討 論

抗核抗體是以細(xì)胞成分為靶抗原的器官非特異性自身抗體的總稱，以Hep-2細(xì)胞為抗原基質(zhì)的間接免疫熒光法（IIF）被認(rèn)為是ANA檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”［2］。而隨著靶抗原的純化技術(shù)不斷提高，不斷涌現(xiàn)自動(dòng)化程度較高、易于標(biāo)準(zhǔn)化的檢測(cè)方法，其中LIA是近年來研究較多的一種檢測(cè)方法。但在實(shí)際檢測(cè)過程中，我們會(huì)發(fā)現(xiàn)IIF檢測(cè)ANA 與LIA檢測(cè)ANAs的結(jié)果不一致，筆者通過對(duì)二者不同結(jié)果進(jìn)行分析，試圖闡述該類標(biāo)本檢測(cè)自身特異性抗體的臨床意義。

表2　IIF-ANA-/LIA-ANAs+陽性率最高的前五種自身抗體

在對(duì)2014年6121例標(biāo)本同時(shí)用IIF檢測(cè)ANA和LIA檢測(cè)17種自身抗體中發(fā)現(xiàn)，IF-ANA-/LIA-ANAs+的有1107例，不一致率為22.5%。其中陽性率最高的前五種自身抗體是SSA/Ro60kd、SSA/Ro52kd、抗SmD1、抗SSB抗體、抗histones，陽性率為分別為29.62%、18.32%、10.20%、9.58%、8.61%，總占76.33%，其余的占23.67%，結(jié)果與周仁芳等人的報(bào)道的以SSA為主要抗體一致［3］。分析原因可能是HEP-2細(xì)胞SSA的表達(dá)豐度低以及固定過程中抗核抗原出現(xiàn)彌散丟失。有文獻(xiàn)報(bào)道，如選擇轉(zhuǎn)染Ro60cDNA的HEp-2000細(xì)胞基質(zhì)可提高檢測(cè)的靈敏度［4］，另外其他抗體也有不同程度的漏檢，筆者認(rèn)為可能是：①IIF 中HEp-2細(xì)胞為人源的細(xì)胞，部分表達(dá)的靶抗原含量低，且不均一，不同固定方法對(duì)特定抗原可能會(huì)丟失，故容易漏檢，而LIA所包被的是來源于牛的胸腺和脾臟純化抗原，含量高且固定，當(dāng)標(biāo)本抗體濃度低時(shí)，也可被檢測(cè)（靈敏度高）。②方法學(xué)上IIF一般手工操作，且操作繁瑣，滴度判斷需系列稀釋，熒光染色不穩(wěn)定，熒光類型需肉眼判斷，少見的特殊類型還需經(jīng)驗(yàn)豐富專業(yè)技術(shù)人員鑒定等；而IIF可自動(dòng)化，判讀方便，重復(fù)性較好。

而IIF-ANA+/LIA-ANAs-的有124例，不一致率只為10.3%，表明以Hep-2細(xì)胞作為抗原基質(zhì)的IIF法能檢測(cè)出絕大多數(shù)自身抗體，是目前篩選ANA的理想實(shí)驗(yàn)。

綜上所述，IIF-ANA與LIA-ANAs的檢測(cè)有其互補(bǔ)性，二者不相互替代。IIF-ANA具有覆蓋ANA抗體面廣，同時(shí)即是篩查試驗(yàn)又是ANA檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)的特點(diǎn)，而LIA-ANAs有較高的檢測(cè)敏感性和疾病特異性，故兩種方法學(xué)間存在檢測(cè)敏感性和特異性的差異。如果單用任何一種方法檢測(cè)都有可能造成ANA陽性結(jié)果的漏檢、漏報(bào)或AID的漏診。因此，臨床應(yīng)用時(shí)，尤其對(duì)AID的早期診斷、鑒別和治療，需聯(lián)合進(jìn)行IIF-ANA篩查和LIA-ANAs檢測(cè)，減少漏診或誤診。

［1］ Shoenfeld Y，Gershwin ME，Maroni PL，et a1.Auto antibodies［M］. Second Edition.Netherlands，2007：29-32.

［2］ Ghirardello A，Bendo R，Rampudda ME，et a1，Commercial blot assays in the diagnosis of systemic rheumatic diseases［J］.AutoimmunRev，2009，8（8）：645-649.

［3］ 周仁芳，胡朝軍，張蜀瀾，等.抗核抗體篩查實(shí)驗(yàn)與特異性抗體確認(rèn)實(shí)驗(yàn)相關(guān)性研究［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，32（12）：1344-1348.

［4］ Xavier B，Arianne L.Antibodies to extractable nuclear antigens in antinuclear antibody-negative samples［J］.Clin Chem.，2005，51（12）：2426-2427.

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1671-8194（2016）19-0039-02