骨肉瘤患者血清中IL-27、IL-10的表達及意義

盧賢哲，廖品琥，謝克恭，陸敏安，陸　潞，黃　可，王俊利，韋葉生，唐毓金

(右江民族醫學院附屬醫院，百色533000)

骨肉瘤患者血清中IL-27、IL-10的表達及意義

盧賢哲，廖品琥，謝克恭，陸敏安，陸潞，黃可，王俊利，韋葉生，唐毓金▲

(右江民族醫學院附屬醫院，百色533000)

目的探討骨肉瘤患者血清中白細胞介素27(IL-27)、白細胞介素10(IL-10)的表達意義。方法選取2005～2013年間收治的160例肢體骨肉瘤患者作為骨肉瘤組，健康體檢人群250人作為健康對照組。采集兩組研究對象的外周血，用酶聯免疫吸附試驗法(ELISA)檢測血清中IL-27、IL-10的表達水平，分析其與骨肉瘤發病及進展關系。結果骨肉瘤組的IL-27、IL-10水平均低于健康對照組，差異有統計學意義(P＜0.01)。在骨肉瘤患者中，IL-27與腫瘤的臨床分期和是否有轉移明顯相關，處于腫瘤發病Ⅲ～Ⅳ期的患者其血清IL-27水平低于Ⅰ～Ⅱ期患者(P＜0.01)，合并遠處轉移的患者血清IL-27水平低于無遠處轉移的患者(P＜0.01)。但IL-10與骨肉瘤的相關臨床特征均無相關性，且血清IL-27水平與IL-10水平也無明顯線性相關(r=0.076，P=0.594)。結論IL-27、IL-10參與了骨肉瘤的免疫調節，IL-27的低表達可能與骨肉瘤的進展相關。

骨肉瘤;IL-27;IL-10

骨肉瘤(osteosarcoma)是青壯年原發性骨腫瘤中發病率最高的一類惡性腫瘤，多發于股骨、脛骨和肱骨等四肢骨［1，2］。骨肉瘤的特征是惡性骨成骨細胞的分化和生產。其惡性程度甚高，預后極差，可于數月內出現肺部轉移，截肢后3～5年存活率僅為60%左右［3，4］。雖然近年來骨肉瘤在病因、發生發展、診斷和治療等方面有了一些進展，但進展十分緩慢，具體發病機制仍然不清楚。其次缺少骨肉瘤診斷和治療的有效靶標，進一步尋找生物靶標，將具有重要的理論和臨床應用價值。近年來，腫瘤免疫學進展迅速，腫瘤免疫微環境得到了廣大學者的關注。腫瘤微環境分泌大量的炎癥因子，如細胞因子、生長因子、趨化因子等，炎癥因子共同參與腫瘤的進展［5］，而細胞因子又成了研究的熱點［6］。白細胞介素10(Interleukin-10，IL-10)是由巨噬細胞、輔助性T細胞、淋巴細胞等產生的一種多效性細胞因子，已被證明能夠抑制刺激免疫反應，參與多種惡性腫瘤的發生和發展。白細胞介素27(Interleukin-27，IL-27)參與Th1細胞的分化，能增強細胞的免疫反應，研究表明，IL-27可通過多種機制抑制腫瘤的進展，無視腫瘤的免疫原性。因此，IL-10、IL-27有可能成為腫瘤治療中有價值的指標，有望成為新的免疫治療因子。為此，本研究探討了骨肉瘤患者血清中IL-10、IL-27的變化，分析了IL-10、IL-27的表達及其變化的意義，為臨床提高骨肉瘤的療效提供一定的依據。

1　資料與方法

1.1臨床資料選取2005～2013年間我院骨科收治的160例四肢骨肉瘤患者(骨肉瘤組)與健康體檢者250人(健康對照組)作為研究對象。病例納入標準:①發病部位為四肢骨，且經皮穿刺組織病理學活檢確診為骨肉瘤。②無家族性腫瘤史。③健康對照組為我院健康體檢人群;個人及家族史無腫瘤或其他嚴重疾病。④所有患者知情同意本研究，依從性良好，愿意接受隨訪。排除標準:①心、肝、腎、肺功能不全者或罹患其他系統嚴重疾病者。②妊娠或哺乳女性。③已接受抗癌、糖皮質激素、其他非甾體類抗炎藥物可能影響免疫功能等治療。④無自身免疫性疾病。本研究通過醫院倫理委員會批準，患者及家屬均簽署知情同意書。兩組受試者間的年齡及性別分布均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。見表1。

1.2檢測方法所有病例均在入院第1天抽取靜脈血，低溫保存待測。采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗法(ELISA)檢測血清IL-10和IL-27含量。IL-10和IL-27試劑盒均為上海天昊生物科技有限公司產品。

表1　兩組受試者性別年齡比較

1.3統計學方法利用SPSS 17.0統計軟件對數據進行統計分析，計量資料采用均數±標準差(±s)表示，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗;計數資料采用率或百分比表示，組間比較采用χ2檢驗;采用多因素Logistic回歸模型分析IL-10、IL-27水平與骨肉瘤患者臨床特征之間的關系;采用Pearson方法進行IL-10水平與IL-27水平之間的線性相關分析。檢驗水準:α=0.05。

2　結　果

2.1兩組IL-10及IL-27水平的比較經檢驗，骨肉瘤組血清IL-10、IL-27平均濃度明顯低于健康對照組，差異有統計學意義(P＜0.001)。見表2。

表2　兩組受試者IL-10、IL-27水平比較(ng/L，±s)

表2　兩組受試者IL-10、IL-27水平比較(ng/L，±s)

組別　n 160　24.62±5.96　16.05±5.12健康對照組　250　41.42±10.78　32.23±8.19 t IL-27　IL-10骨肉瘤組－　20.274　24.598 P －　＜0.001　＜0.001

2.2骨肉瘤患者血清IL-10與IL-27水平的相關性分析經Pearson線性相關分析，骨肉瘤患者血清IL-10與IL-27水平無明顯線性相關(r=0.076，P= 0.594)。

2.3血清IL-10、IL-27水平與骨肉瘤臨床特征之間的關系將血清IL-10、IL-27按百分位進行分組作為因變量，患者的年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤部位、臨床分期及轉移作為自變量建立Logistic回歸模型，其賦值情況見表3。結果顯示:在骨肉瘤患者中，血清IL-10水平與患者的年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤部位、臨床分期及轉移均無明顯相關;而血清IL-27水平受臨床分期和是否有遠處轉移的影響。處于腫瘤發病Ⅲ～Ⅳ期的患者其血清IL-27水平低于Ⅰ～Ⅱ期患者;合并遠處轉移的患者血清IL-27水平低于無遠處轉移的患者。見表4。

表3　細胞因子相關影響因素的賦值表

表4　IL-27水平影響因素的多因素Logistic回歸分析

3　討　論

骨肉瘤的發生與進展取決于機體自身的免疫狀態。IL-10是參與腫瘤微環境內介導免疫抑制的重要細胞因子［7］，通過免疫抑制作用，能夠中和體內過強的免疫反應。IL-10通過抑制IL-1、IFN-γ、TNF-α等促炎因子的分泌來達到抑制炎癥反應的目的。同時，IL-10也通過下調抗原提呈細胞(APC)來反饋調節效應T細胞［8］。IL-10不僅能夠發揮重要的免疫抑制作用，同時也能刺激免疫作用［9］。IL-27是新近發現的IL-6/IL-12家族的細胞因子，主要由活化的抗原提呈細胞(包括單核巨噬細胞和樹突狀細胞)產生，通過與其受體IL-27R(WSX-1/gp130)結合發揮生物學功能［10］。研究發現，IL-27具有抗腫瘤活性，能夠抑制血管的生成和促進腫瘤細胞的凋亡，在抗腫瘤免疫以及以Th1型免疫主導的病理過程中發揮重要作用［11］。既往的研究已表明IL-27參與了多種機體腫瘤的發生與進展，如與前列腺癌及其骨轉移、食管癌淋巴轉移、黑色素瘤等腫瘤密切相關［12］，IL-27無論對原發或者繼發性腫瘤均有抑制作用，這使它成為低免疫源性腫瘤治療潛在的新靶點。

本研究發現，骨肉瘤患者與健康人群相比，血清IL-27表達明顯下降。提示低表達的IL-27水平可能導致Th1細胞毒性反應減弱進而導致骨肉瘤的發生。同時我們探討了血清IL-27水平與骨肉瘤患者各臨床特征的相關性，結果顯示IL-27水平并不與骨肉瘤患者的年齡、性別、瘤體大小及部位相關。臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期的患者和發生遠處轉移的患者血清IL-27均呈現顯著的低水平，提示血清IL-27水平下降可能與骨肉瘤的進展相關，可能的機制如下: (1)特異性 CD8+T細胞通過IL-27調節參與機體抗腫瘤或者在活體直接起到抗腫瘤增殖作用［13］。(2)血管形成作用和NK細胞被IL-27抑制，從而抑制了腫瘤生長和轉移。因此IL-27可能是一種潛在的抗腫瘤細胞因子，其主要通過CD8+T細胞，分泌IFN-γ發揮抗腫瘤作用，對免疫原性高低不同的腫瘤細胞發揮抑制腫瘤生長和轉移作用，尤其對免疫原性低的腫瘤發揮無可比擬的作用［14］，其可以通過抑制血管形成來抑制腫瘤的增殖。

本研究發現，骨肉瘤患者與健康人群相比，血清IL-10表達下降，考慮為:(1)IL-27對IL-10的分子調節機制作用。有研究表明IL-27可通過誘導c-Maf的表達來促進細胞因子IL-21的產生和上調誘導共刺激分子(ICOS)的表達，從而誘導分泌IL-10的Tr1細胞的分化和增殖［15］。在骨肉瘤環境下IL-27可能對IL-10有調節作用。(2)腫瘤微環境中IL-10對免疫應答的負向調節作用。(3)IL-10通過APC發揮免疫抑制。而本研究發現IL-27與IL-10無相關性，考慮兩者在骨肉瘤表達中各自有其表達的機制，IL-27與IL-10在本次研究均下降，彼此有一定的聯系，但具體機制尚不明確。

本次研究也存在著一些局限性。第一，本次研究的樣本數相對較小，可能會影響統計的效能。第二，樣本來源于特定的地區，擁有自身獨特的遺傳背景，因此，本研究結論可能并不一定適用于其他地區與種族的人群。第三，本研究骨肉瘤患者的選取是以醫院為基礎，對照組則來源于廣大社區，實驗設計為病例對照設計而非隨機設計，可能會存在選擇偏倚。因此，未來我們將展開更大樣本及多民族廣泛參與的實驗研究，進一步探討IL-27、IL-10與骨肉瘤發病風險的關系。

總之，骨肉瘤患者機體存在免疫調節失衡，IL-10及IL-27參與其中，它們的表達異常與骨肉瘤的發生密切相關，可能在骨肉瘤患者抗腫瘤免疫中發揮重要作用，隨著對骨肉瘤發生及進展研究的深入，血清IL-10及IL-27表達水平的檢測也有望成為骨肉瘤診斷、治療及判斷療效預后的重要參考指標。

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(編輯:潘明志)

Expressive significance of IL-27 and IL-10 in serum of patients with osteosarcoma

LU Xianzhe，LIAO Pinhu，XIE Kegong，LU Min’an，LU Lu，HUANG Ke，WANG Junli，WEI Yesheng，TANG Yujin▲
(Affiliated Hospital of Youjiang Medical University for Nationalities，Baise 533000，China)

ObjectiveTo investigate the significance of expression of IL-27 and IL-10 in serum of patients with osteosarcoma.Methods160 cases of patients with osteosarcoma admitted to hospital from 2005 to 2013 were selected as osteosarcoma group，and 250 healthy people who received physical examination as control group.Peripheral blood was collected from the 2 groups，and expression levels of IL-10 and IL-27 in serum were tested by ELISA and then its relationship with the morbidity and development situation of osteosarcoma was analyzed.ResultsThe levels of serum IL-10 and IL-27 in the case group were lower on average than those of the control group，so difference was statistically significant(P＜0.01).The level of IL-27 in osteosarcoma patients was significantly correlated with tumor stages and metastasis.IL-27 level in serum of patients in tumor stagesⅢ～Ⅳwere lower than those in stagesⅠ～Ⅱ(P＜0.01).The similar results were also found in patients with metastasis，patients with merger of distant metastasis had lower IL-27 levels than those without distant metastasis(P＜0.01).But there was no correlation between IL-10 and the clinical features of osteosarcoma，and no significant linear correlation were found between IL-27 and IL-10 levels(r=0.076，P=0.594).ConclusionIL-27 and IL-10 involve in the immune regulation of osteosarcoma.The low expression of IL-27 may be related to the progression of osteosarcoma.

osteosarcoma;IL-27;IL-10

R738.1

ADOI:10.3969/j.issn.1003-1383.2016.03.002

國家自然科學基金資助項目(81260315);廣西自然科學基金項目(2012GXNSFAA053169); 2016年百色市科技攻關項目(百科計20160610)

盧賢哲，男，碩士研究生，研究方向:脊柱與骨關節疾病。E-mail:2961784260@qq.com
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唐毓金。E-mail:tangyujin196709@163.com

2016－04－25

2016－06－20)