80歲以上老年人外周血T細胞亞群CD28的表達及胸腺肽α1對其影響

羅杰　張興虎　王堅

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80歲以上老年人外周血T細胞亞群CD28的表達及胸腺肽α1對其影響

羅杰張興虎王堅

目的探討高齡老年人(≥80歲)較普通老年人(60～70歲)外周血T淋巴細胞亞群數量及T細胞CD28表達的差異,并觀察胸腺肽α1對高齡老人的作用。方法選取高齡老年人及普通老年人各40例,分別檢測2組的外周血T淋巴細胞亞群的百分比及T細胞CD28水平。給予高齡老人組胸腺肽α1注射劑1.6 mg,皮下注射,2次/周,療程為4周,于治療后4周檢測外周血上述免疫指標。結果高齡老年人組較普通老年組外周血CD8+的百分比及CD4+CD28+的表達無差異,而CD4+的百分比及CD8+CD28+的表達明顯降低(P<0.05)。高齡老人應用胸腺肽α1后CD4+的百分比及CD8+CD28+水平明顯提高(P<0.05)。結論高齡老年人較普通老年人免疫功能出現了進一步下降,而胸腺肽α1能明顯增強高齡老年人的部分免疫功能。

80歲以上老年人; T淋巴細胞亞群; CD28; 胸腺肽α1

目前,免疫衰老是免疫研究領域的一個重點。CD28分子是T淋巴細胞表面主要的共刺激分子受體,是屬于免疫球蛋白超家屬成員,它與抗原提呈細胞表面的B7分子結合,為T細胞的活化提供第二信號。而CD28分子的丟失致使老年機體對新抗原的細胞免疫功能降低。胸腺肽α1是一種具有多種效應的免疫增強劑,可以明顯促進同種T細胞的增殖,增強輔助性T細胞(Th細胞)的免疫功能,從而使機體更有效地發揮其免疫防護作用[2]。本試驗主要研究高齡老年人T細胞亞群及CD28的表達,以及應用胸腺肽α1后上述指標的變化,以闡明高齡老年人免疫功能的改變及胸腺肽α1對其的影響作用。

1　 材料與方法

1.1研究對象試驗組為80歲以上老年人40例,男25例,女15例,年齡≥80歲,平均(88.8±9.5)歲。排除有腫瘤、糖尿病、慢性感染、自身免疫性疾病、服用免疫抑制劑,接受過免疫增強劑的治療的患者;取普通老年人40例作為對照組,男23例,女17例,年齡60～70歲,平均(67.1±10.4)歲。也同樣排除上述疾病。研究對象均為南京市部隊干休所老干部,試驗組和對照組體質量分別為(68.7±12.6) kg和(72.3±15.1) kg,2組收縮壓分別為(133.3±21.5) mmHg和(126.4±24.4) mmHg,2組舒張壓分別為(45.62±11.03) mmHg和(50.82±9.09) mmHg,2組三酰甘油分別為(1.74±2.04) mmol/L和(1.82±1.39) mmol/L, 膽固醇分別為(4.23±3.24) mmol/L和(4.89±2.59) mmol/L,糖化血紅蛋白分別為(6.64±1.57) mmol/L和(6.16±1.01) mmol/L,2組體質量、血壓、血脂及血糖比較,差異無統計學意義(P均>0.05)。本試驗經所有研究對象的同意(簽知情同意書),并得到了醫院倫理委員會的批準。

1.2主要試劑Anti-h CD4-FITC、Anti-h CD8-FITC購自晶美生物工程公司; Anti-h CD28-PE(單熒光標記抗體)購自晶美生物BioLegend公司;胸腺肽α1注射劑(成都地奧九泓制藥,國藥準字H20020545);流式細胞儀(Beckman Coulter公司的CYTOMICS FC500)。

1.3試驗方法分別檢測高齡老年人及普通老年人外周血CD4+及CD8+T細胞的百分比及其CD28表達的水平;前組給予胸腺肽α1注射劑1.6 mg,皮下注射,2次/周,療程為4周,于治療后4周檢測外周血T細胞CD28的水平。

1.4熒光染色檢測每個受試者均抽空腹晨血1 ml(肝素抗凝),每份樣本取2個試管,1管分別加入Anti-h CD4-PE-FITC和Anti-h CD28-PE,另1管分別加入Anti-h CD8-FITC和Anti-h CD28-PE,各10 μl,然后分別加入抗凝血100 μl混勻,溫室避光20 min,每管加入2 ml紅細胞裂解液,振蕩混勻,避光10 min后離心,棄上清,用PBS液洗滌2次,2 h內上流式細胞儀分析。

1.5統計學分析計量資料采用均數±標準差表示,組間比較采用SPSS 10.0統計軟件包進行t檢驗,以P<0.05表示差異有統計學意義。

2　結果

試驗組較對照組外周血CD8+的百分比及CD4+CD28+的表達差異無統計學意義(P>0.05),而試驗組CD4+的百分比及CD8+CD28+的表達較對照明顯降低(P<0.05)(見表1),高齡老人應用胸腺肽α1后CD4+的百分比及CD8+CD28+水平明顯提高(P<0.05)(見表2)。

表1　2組外周血T細胞CD28表達的差異,%,n=40)

注:與對照組比較,*P<0.05

表2　胸腺肽α1對試驗組外周血T細胞CD28表達的影響,%,n=40)

注:與治療前比較,*P<0.05

3　討論

免疫功能衰退是老年人生命過程中最明顯的衰退特征之一,其最突出的表現是T細胞數量的減少、增殖能力的下降,細胞介導的免疫功能應答反應遲緩,功能降低。T細胞是正常機體免疫功能的物質基礎,老年人T細胞絕對數量均隨年齡增長而降低[3]。

CD4+表示輔助性誘導性T細胞亞群,CD4+細胞屬主要組織相容性復合體(MHC)Ⅱ類限制性T細胞,CD4+不僅參與細胞免疫,還可以誘導B淋巴細胞增生和(或)分化,使之產生各種免疫球蛋白,從而啟動體液免疫反應。CD4+從60歲后減低,70歲后進一步下降,CD4+水平下降致使細胞免疫及體液免疫應答效應減弱[4]。CD8+表示抑制性和細胞毒性T細胞亞群, CD8+初始型T細胞在應對外來抗原感染及腫瘤監視中起重要作用,其是MHC Ⅰ類限制性細胞前體細胞,具有MHC Ⅰ類限制細胞毒性,在CD4+T細胞分泌的細胞因子作用下,分化為殺傷性T細胞,CD8+數量的減少可用作判斷機體對MHC Ⅰ類新型抗原免疫保護作用的缺失,機體對感染性疾病,尤其是病毒感染,以及惡性細胞的免疫防護和免疫監視作用的降低,并最終導致壽命的縮短。本研究結果表明,高齡老年人外周血CD4+的百分比較普通老年人明顯降低,而2組 CD8+的百分比無明顯差異。說明高齡老年的部分免疫功能較普通老年人又出現了進一步下降。

而T細胞表面的共刺激分子,通過提供活化或抑制信號,可以影響T細胞激活、增殖及細胞因子的分泌等。如何調控共刺激分子增強T細胞功能是目前免疫學研究領域的一個重點。 CD28為同源二聚體結構,屬于免疫球蛋白超家屬成員,表達在T細胞表面的一個共刺激分子,為T細胞活化提供重要的第二信號,另外還能分泌IL-2、TNF-α、TNF-β及IFN-γ等細胞因子,來自CD28第二信號的缺乏將導致免疫無能。CD8+CD28+T細胞有識別抗原的特異性,通過識別病毒和病毒感染的細胞發揮作用[5]。有文獻報道老年人外周血T細胞表面CD28的表達明顯低于年輕人,特別是在CD8+T細胞上的表達[6]。初始型T細胞數量的減少以及CD28分子的丟失使老年個體對新抗原的細胞免疫功能降低。本研究發現高齡老年人CD8+CD28+的表達較普通老年人又出現了進一步降低,而2組人群CD4+CD28+的表達無明顯差別。說明高齡老年人免疫功能較普通老年人又出現了進一步的下降,進一步解釋了為何高齡老年人較普通老年人更易患感染和腫瘤的原因[7]。

胸腺肽α1是小牛胸腺中提取的具有生物活性的多肽,具有強烈的免疫刺激和免疫調節作用,能誘導T細胞的分化、成熟,增加T淋巴細胞前體數量,促進T淋巴細胞亞群發育,并通過分泌細胞因子完成亞群間的免疫協調, 調控機體的免疫平衡。胸腺肽α1 激活PKC,進入核內激活細胞因子基因轉錄,如IL-1、IL-6 和IL-8,介導B7 家族成員表達活化,進而通過抗原提呈細胞(APC) 活化T 細胞, 激活獲得性免疫系統[8]。也可通過Toll 樣蛋白受體信號通道,激活樹突狀細胞(DCs)[9],分泌多種細胞因子參與免疫調節功能。胸腺肽α1 能負向調節荷瘤小鼠的重量,提高MHCⅠ類抗原在腫瘤細胞和APC 中的表達,部分恢復細胞的免疫性[10]。臨床上主要用于免疫缺陷癥和自身免疫性疾病的治療[11]。有文獻報道胸腺肽α1能促進T細胞的成熟,激活CD3+、CD4+和NK細胞產生,提高機體免疫功能[12]。本研究的部分結果與文獻報道的結果基本一致,高齡老年人的免疫功能較普通老年人進一步下降。從本研究結果來看,應用胸腺肽α1后高齡老年人外周血CD4+的百分比明顯提高,并能明顯提高CD8+淋巴細胞CD28+表達。故胸腺肽α1能顯著提升高齡老年人的特異性細胞免疫功能,為其作為一種免疫增強劑提供一個新的理論論據,但作用機制目前還不清楚,有待于以后的試驗進一步探討。

當今世界人口老齡化是一個發展趨勢,高齡老年人的免疫功能低下致使感染性疾病的發病率明顯增加,已嚴重影響了他們的生命質量,如何減少感染性疾病的發生率,提高他們的生活質量成為當今老年病學的一個重要的研究課題。本研究為進一步探究免疫衰老的發生機制及有效干預提供了可靠的實驗依據。

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Expression of CD28 T lymphocytes in peripheral blood subsets and effect of Thymosin α1 in the elderly aged 80 years old and over

LUOJie.DepartmentofHealthCare;ZHANGXing-hu.DepartmentofGeriatrics;WANGJian.

DepartmentofEndocrinology,JinlingHospital,SchoolofMedicine,NanjingUniversity,Nanjing210002,China

ObjectiveTo investigate the difference of T lymphocyte subsets and CD28 expression in T cells in peripheral blood between the very elderly (≥80 years old,n=40)and the younger elderly(60-70 years old,n=40), and to investigate the effect of thymosin α1 in the very elderly.MethodsThe T lymphocyte subsets and CD28 levels in both groups in peripheral blood were detected, and the very elderly group was injected with thymosin α1 1.6 mg, twice a week,for 4 weeks. Then the above immune parameters of peripheral blood were detected again.ResultsThere were no differences in the percent of CD8+and CD4+CD28+expression between the very elderly and the younger elderly.The percent of CD4+and CD8+CD28+expression was significantly lower (P<0.05) in the very elderly group than those in the younger elderly.After injected with thymosin α1, the percent of CD4+and CD8+CD28+expression were significantly increased in the very elderly (P<0.05).ConclusionsThe immune function of the elderly is decreased more significantly than that of the younger elderly, and thymosin α1 can significantly enhance some immune function in very elderly.

aged 80 and over; T lymphocyte subsets; CD28; thymosin α1

南京軍區醫學衛生科研基金(11MA101)

210002江蘇省南京市,南京大學醫學院附屬金陵醫院干部保健科(羅杰);干部病房(張興虎);內分泌科(王堅)

王堅, Email:wangjndcrn@yahoo.com.cn

R592

Adoi:10.3969/j.issn.1003-9198.2016.05.022

2015-09-15)