高效液相色譜法測定左炔諾孕酮片的溶出度

孫秋，商麗麗，孫晶晶.吉林省白城市食品藥品檢驗所，吉林白城　37000；.吉林省藥品檢驗所，吉林長春　30033

高效液相色譜法測定左炔諾孕酮片的溶出度

孫秋1，商麗麗1，孫晶晶2
1.吉林省白城市食品藥品檢驗所，吉林白城137000；2.吉林省藥品檢驗所，吉林長春130033

目的 建立高效液相色譜法測定左炔諾孕酮片的溶出度方法。方法 采用 《中國藥典》2015年版四部溶出度測定法第三法，以0.8%十二烷基硫酸鈉（SDS）溶液250 mL為溶出介質，轉速為75 r/min，取樣時間為45 min。采用以Agilent ZORBAX 300-SCX C18為色譜柱，以乙腈-水（60∶40）為流動相，檢測波長為240 nm的高效液相色譜法檢測溶出量。結果 左炔諾孕酮在0.375～2.625 μg，范圍內線性關系良好（r2=1.0）；平均回收率為99.53%，RSD為0.85%（n=9）；3批樣品45 min內的溶出度依次為：100.6%、100.2%和100.5%。結論 該方法符合溶出度方法的建立原則，可控制左炔諾孕酮片的內在質量。

左炔諾孕酮片；高效液相色譜；溶出度；測定

［Abstract］Objective To establish the method of high efficiency liquid chromatography in detecting the dissolution rate of levonorgestrel tabelts.Methods 0.8%lauryl sodium sulfate solution（SDS）were used as the dissolution medium with 75r/ min revolving speed and 45min sampling time according to the third law in the four dissolution spectrophotometry in Chinese pharmacopoeia in 2015，and the dissolution amount was detected by the high efficiency liquid chromatography with the Agilent ZORBAX 300-SCX C18 chromatographic column，acetonitrile-water（60：40）mobile phase and 240nm detection wavelength.Results The linear correlation of levonorgestrel between 0.375-2.625μg was good，r2=1.0，the average recycle rate was 99.53%and RSD was 0.85%，（n=9），the dissolution rates of three batches of samples within 45min were in turn 100.6%，100.2%and 100.5%.Conclusion The method meets the establishment principle of the dissolution method，and it can control the inner quality of levonorgestrel tabelts.

［Key words］Levonorgestrel tabelts；High efficiency liquid chromatography；Dissolution rate；Measurement

左炔諾孕酮片為常用女性口服避孕藥，具有較強抑制垂體分泌促性腺激素的作用而抑制排卵；它能使宮頸黏液變稠，阻礙精子穿透，并能使子宮內膜萎縮不利于孕卵著床，從而起到避孕作用。左炔諾孕酮片的現行質量標準收載于《中國藥典》2015年版二部。鑒于左炔諾孕酮為難溶性藥物，且《中國藥典》2015年版二部收載的本品質量標準尚未建立其溶出度檢測方法［1］。為了更好地控制該產品質量，該文通過優化色譜條件和溶出介質等研究，建立了左炔諾孕酮片溶出度的HPLC測定方法，并對3批上市產品進行了溶出度的測定。該方法簡單、準確、可行，可用于評價該藥品質量。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1儀器 RCZ-8M智能溶出儀（天大天發儀器廠），Agilent 1200高效液相色譜儀（美國Agilent公司），SARTORLUS-BP211D型電子分析天平 （賽多利斯公司），KH-700V型超聲波清洗器（昆山禾創）等。

1.1.2藥品與試劑①對照品：左炔諾孕酮（批號：100083-201510）購于中國藥品生物制品檢定所；②藥品：某廠家生產的左炔諾孕酮片（規格：0.75 mg）3批（批號：140903、141209和150110）③試劑：乙腈：色譜純（美國），超純水（自制），其他試劑均為分析純。

2　方法與結果

2.1溶出條件的選擇

2.1.1溶出度測定方法的選擇由于本品規格較小，每片僅含0.75 mg左炔諾孕酮，故采用溶出度測定法第三法進行溶出度的檢查，采用高效液相色譜法測定其溶出量。

2.1.2溶出介質的篩選本品溶于丙酮，微溶于甲醇和乙醇，不溶于水，該研究參照《中國藥典》2015年版二部左炔諾孕酮炔雌醚片項下溶出度測定方法［1］，選用0.8%十二烷基硫酸鈉溶液250 mL為溶出介質。

2.1.3轉速篩選取140903批產品6片，以0.8%十二烷基硫酸鈉溶液250 mL為溶出介質，測定時間為45 min，考察本品在轉速為75 r/min和100r/min條件下的溶出情況，結果見表1。

表1　樣品在不同轉速下溶出度比較結果

結果表明：樣品在75 r/min與100 r/min的溶出度無明顯差異，所以選擇75 r/min。

2.2色譜方法的建立

2.2.1檢測波長的篩選取本品細粉適量，加流動相制成每1 mL約含左炔諾孕酮7 μg的溶液，在190 nm～400 nm波長范圍進行掃描，圖譜顯示，最大吸收在240 nm處（圖1），故選擇240 nm為測定波長。

圖1　全波長掃描

2.2.2色譜條件及系統適應性色譜柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C 18，（250 mm×4.6 mm×5 μm）；檢測波長：240 nm；柱溫：30℃；進樣量：20 μL；流動相：乙腈-水（60∶40）；流速：1.0 mL/min。理論板數：按左炔諾孕酮峰計算應不低于2000，與相鄰峰的分離度不低于1.5，系統適應性色譜圖見圖2。

圖2　左炔諾孕酮片溶出度測定系統適用性HPLC圖

2.3溶液的配制

2.3.1供試品溶液的制備取本品，照溶出度測定法（《中國藥典》2015年版四部通則0931第三法），以0.8%十二烷基硫酸鈉溶液250 mL為溶出介質，轉速為75 r/ min，依法操作，經45 min時，取溶液適量，濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.3.2對照品溶液的制備精密稱取左炔諾孕酮對照品適量，加流動相制成每1 mL約含0.075 mg左炔諾孕酮的溶液，搖勻，臨用前過0.45 μm的微孔濾膜，即得。

2.3.3溶出介質的制備稱取十二烷基硫酸鈉8.001 9 g錐形瓶中，加適量水，加熱攪拌至溶解，放涼后，用水定容至1 000 mL，搖勻，即得。

2.4專屬性試驗

取供試品溶液、對照品溶液及溶出介質，按“2.2.2”項下方法分別進樣。專屬性考察結果見圖3。

圖3　專屬性考察色譜圖

結果表明，檢測波長240 nm，供試品溶液和對照品溶液在相同位置出現主成分色譜峰，溶出介質在主成分位置無色譜峰出現，方法專屬性良好。

2.5線性試驗

分別精密吸取 “2.3.2”項下對照品溶液5、10、15、20、25、30、35 μL，依次按 “2.2.2”項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖，以進樣量（x）為橫坐標。峰面積（y）為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程：y=22248x+56.22，（R2=1）在0.375～2.625 μg范圍內，進樣量和峰面積呈良好的線性關系。如圖4。

圖4　左炔諾孕酮含量線性圖

2.6精密度試驗

精密量取線性試驗項下的對照品溶液適量，連續進樣6次，每次20 μL，記錄色譜圖，計算RSD為0.69%，結果表明，本測定精密度良好。

2.7溶液的穩定性試驗

取含量線性下的樣品溶液，分別于0、5、7、8 h進樣20 μL，測定左炔諾孕酮峰面積，計算RSD為0.95%，結果表明：供試品溶液在8 h內穩定性良好。

2.8重復性試驗

精密稱取樣品細粉（批號110401）適量，共6份，加流動相溶解制成每1 μL約含0.075 mg左炔諾孕酮的溶液，搖勻，離心，取上層澄清液，作為供試品溶液。分別精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算RSD為0.77%，結果表明，本方法重復性良好。

2.9回收率試驗

根據企業提供的處方，精密稱取適量空白輔料，分別加入適量左炔諾孕酮原料，加流動相制成濃度為測定濃度80%、100%和120%的供試品溶液。每個濃度配制樣品3份，按 “2.2.2”項下色譜條件進行測定，計算左炔諾孕酮的回收率為99.53%、RSD為0.85%，結果見表2。表明本方法準確度較高。

表2　含量測定回收率試驗結果

2.10耐用性試驗取供試品溶液，按“2.2.2”項下色譜條件，考察供試品溶液在改變色譜柱（Diamonsil C18）、色譜柱溫度（25℃、35℃）和流動相比例（55∶45）對分析結果的影響。結果表明，在上述不同條件下，左炔諾孕酮峰面積的RSD為1.46%。

2.11樣品溶出度測定取上述3批樣品，按“2.3.1”項下方法分別制備供試品溶液，按 “2.2.2”項下色譜條件進行溶出度測定。結果見表3。

表3　三批樣品溶出度測定結果

3　討論

本品規格較小，為0.75 mg，考慮到檢測靈敏度，在該研究中，實驗者選擇小杯法進行溶出度考察，溶劑量為250 mL，能夠滿足漏槽條件。

由于《中國藥典》2015年版二部的左炔諾孕酮片的質量標準中沒收載溶出度檢查項，而對于口服固體制劑，溶出度是評價藥物質量的一個內在指標。作為制劑質量控制的一種手段［2］。該文建立的溶出度測定方法，經方法學驗證，此方法可行，回收率良好，對評價該藥物制劑的安全和有效性提供了有效的手段。

［1］國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典 （二部）［S］.2015年版.中國醫藥科技出版社，2015：152-153.

［2］李先紅.復方左炔諾孕酮片溶出度試驗方法的研究［J］.襄樊學院學報，2001，22（5）：49-52.

High Efficiency Liquid Chromatography in Detecting the Dissolution Rate of Levonorgestrel Tabelts

SUN Qiu1，SHANG Li-li1，SUN Jing-jing2
1.Baicheng Food and Drug Inspection Institute，Baicheng，Jilin Province，137000 China；2.Drug Inspection Institute of Jilin Province，Changchun，Jilin Province，130033 China

R927

A

1672-5654（2016）06（c）-0117-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.18.117

孫秋（1983.9-），女，吉林乾安人，本科，主管藥師，主要從事藥品檢驗工作。

（2016-04-01）