淺談食品中三聚氰胺的檢測方法

黃衛國

(陽江市質量計量監督檢測所，廣東　陽江　529500)

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淺談食品中三聚氰胺的檢測方法

黃衛國

(陽江市質量計量監督檢測所，廣東陽江529500)

三聚氰胺是一種重要的化工原料，三聚氰胺既非食品原料也不是食品添加劑。本文探討幾種常用的食品中三聚氰胺的檢測方法，包括液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質譜法(GC-MS)、氣相色譜-質譜-質譜法(GC-MS-MS)、液相色譜-質譜-質譜法(LC-MS-MS)以及酶聯免疫法(ELISA)等，為食品中三聚氰胺的檢測方法選擇提供依據，也為未來研究高靈敏度、成本低而且分析快速的三聚氰胺檢測方法提供參考。

三聚氰胺；檢測方法；食品

三聚氰胺(Melamine)，簡稱三胺，別名蜜胺，是一種重要的化工原料，常用于制造三聚氰胺樹脂，廣泛運用于木材、塑料、涂料、造紙、紡織、皮革、電氣、醫藥等行業，是建筑業中常用的防火阻燃材料[1]。在食品應用中，三聚氰胺既不是食品原料也不是食品添加劑，本與食品毫無關系，但由于其含氮量高達66.7%，價格較蛋白質便宜，一些不法商家利用凱氏定氮法測定蛋白質含量的方法缺陷，違法把三聚氰胺添加到食品或動物飼料中，造成產品蛋白質含量高的假象，從而獲得高利益。三聚氰胺進入人體后不能被代謝，長期攝入三聚氰胺會引起泌尿系統的結石，甚至誘發膀胱癌。2008年9月，由于三聚氰胺在嬰兒乳粉中非法添加導致超過5萬名嬰幼兒出現泌尿系統結石，俗稱大頭嬰兒事件，使得三聚氰胺在乳制品中非法添加得到曝光，直接導致中國乳制品行業性的誠信危機，對人們的日常生活造成嚴重的社會影響。

圖1　三聚氰胺的結構

1　食品中三聚氰胺

三聚氰胺原本不應該在食品中存在，也不允許人為添加到食品中，其作為塑料樹脂的重要組成成分，有可能會由塑料包裝材料遷移到食品中，但微量的遷移不至于對人體造成傷害。大頭嬰兒事件的出現，使得三聚氰胺在食品中違法添加得到曝光，引起人們極大重視，也使得食品中三聚氰胺的檢測方法探索迅速發展。

2　三聚氰胺的檢測方法

三聚氰胺的檢測方法已經由過去較簡單的苦味酸法等，快速發展到現今高精密度的液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質譜法(GC-MS)、氣相色譜-質譜-質譜法(GC-MS-MS)、液相色譜-質譜-質譜法(LC-MS-MS)、酶聯免疫法(ELISA)、電化學法、電化學發光法(ECL)等。

2.1液相色譜法(HPLC)

HPLC法是目前檢測食品中三聚氰胺比較廣泛的方法之一，其常用的色譜柱有C8和C18，檢測器多用UV檢測器或DAD檢測器，該方法相較GC-MS、GC-MS-MS，具有前處理簡便的優點，檢測時間較短，但該法檢測限較高，受基質影響較大，易于出現的假陽性情況，適合較高含量的三聚氰胺檢測。

汪輝等[2]用C18作分離色譜柱，建立高蛋白食品中三聚氰胺的HPLC-DAD檢測法，該方法中用0.02 mol/L硫酸銨-甲醇(94:6)作流動相，選取235.0 nm作檢測波長，檢測限可達到0.01 μg/mL，線性范圍0.1～150 μg/mL。

趙永彪等[3]采用ODS分離柱(C18)建立測定寵物食品中三聚氰胺的高效液相色譜分析法，該法用pH=3的庚烷磺酸鈉-乙腈(90:10)作流動相，在236 nm檢測三聚氰胺含量，最低定量檢出濃度為2 mg/kg。

2.2氣相色譜-質譜法(GC-MS)、氣相色譜-質譜-質譜法(GC-MS-MS)

GC-MS、GC-MS-MS法較HPLC法具有試劑使用少，檢測限低，降低出現假陽性的優點，該法將三聚氰胺從食品中提純，然后將三聚氰胺衍生化成非極性物質，通過氣相色譜分離，用質譜進行定量分析。但由于該法需要將三聚氰胺衍生化處理，前處理步驟比較繁瑣，檢測時間較長，該法適用于較低含量的三聚氰胺檢測。

王征[4]建立GC-MS法測定動物食品中的三聚氰胺，通過甲醇/水/三乙胺混合液提取動物食品中的三聚氰胺，氮氣吹干，再硅烷化衍生，利用DB-5TH彈性石英毛細管柱作分離柱，質譜作檢測器，最低檢測限達到0.1 μg/g, 在0.1～50.0 mg/L范圍內呈良好線性關系，該法選擇性好，能有效消除復雜基體干擾。

吳惠勤等[5]通過三氯乙酸、乙酸鉛提取，用固相萃取住凈化，吡啶作衍生化試劑，DB-1MS石英毛細管柱作分離柱，GC-MS分析奶粉及奶制品中的三聚氰胺，其檢出限為1 μg/kg，定量限為5 μg/kg，線性范圍0.01～50 mg/L，回收率在90%～98%之間。

盧業舉等[6]建立GC-MS-MS法測定食品中的三聚氰胺，該法用吡啶作衍生化試劑，選用TR-5MS色譜柱，采用多反應檢測模式(MRM)進行檢測，最低定量檢測限為1 μg/kg，在0.1～100 μg/L范圍內線性良好，可用于測定奶粉、奶糖，含乳飲料、餅干等食品中三聚氰胺的檢測。

2.3液相色譜-質譜-質譜法(LC-MS-MS)

LC-MS-MS法由于受基質的影響較少，具有極低的檢測限優點，同時由于不需像GC-MS法要對三聚氰胺進行衍生化，簡化前處理過程，檢測時間較短，但該法所用的液相色譜-串聯質譜儀價格較貴，檢測成本較高，同時該法不能用無機鹽緩沖液作流動相，其流動相的可選擇性較少。

欒偉[7]建立LC-MS-MS法用于寵物食品中三聚氰胺的檢測，采用C18色譜柱作分離柱，以pH=5.1的甲醇-水(1:9)作為流動相，該法的靈敏度可以達到50 pg/mL。

劉梅等[8]采用C8分離柱，以乙腈和水為流動相，串聯質譜作檢測器檢測食品中的三聚氰胺，該方法檢測限為0.5 mg/kg,線性范圍為0.1～10.0 mg/kg。

黃芳等[9]采用C18柱建立飼料中三聚氰胺的高效液相色譜-質譜測定方法，該法用乙腈-0.1%甲酸(5:95)作流動相，采用正離子化，多反應檢測模式(MRM)，該法檢測限可達0.01 mg/L，線性范圍為0.01～0.5 mg/L。

2.4酶聯免疫法(ELISA)

ELISA法相較色譜法，ELISA法具有特異性強，靈敏度高，操作簡單，分析時間短，可同時進行大量樣品的篩查。

王黎麗等[10]基于單克隆抗體建立三聚氰胺直接和間接競爭ELISA檢測方法，兩種方法的IC50分別為3.12 μg/L和56.88 μg/L，線性范圍為0.05～10 μg/L和0.1～1000 μg/L，兩種方法都可以用于三聚氰胺的快速檢測，但間接競爭ELISA比直接競爭ELISA更加靈敏。

2.5電化學發光法(ECL)

電化學發光是電化學和化學發光相互滲透形成的，其利用電化學原理在電極表面產生某些氧化還原物質而導致的化學發光，具有設備簡單、操作方便、靈敏度高、重現性好、線性范圍寬、可進行原位檢測等特點。

陳鈺等[11]采用噴射式電化學發光流動檢測技術建立奶粉和液態奶中三聚氰胺的檢測方法，其檢測限為0.001 μg/L，不同加標量的陰性樣品回收率為92.2%～114.2%，線性范圍在0.001～1000 μg/L。

2.6其他檢測方法

食品中三聚氰胺的檢測分析，除了上述介紹的常用方法外，還有表面增強拉曼光譜法(SERS)[13]，熒光光譜法[14]、分光光度法[15]等。

3　結　語

目前，國內外對于三聚氰胺的檢測，不同的檢測方法各有優缺點，在實際應用中要根據樣品、檢測成本等選擇合適的檢測方法。我國是世界上食品的生產和消費大國，在食品安全越來越重視的今天，開發和研究食品中三聚氰胺的高靈敏度、成本低而且分析快速的檢測方法，將是未來的發展方向，對加強食品中三聚氰胺的監控，提高食品安全指數具有重要意義。

[1]張俊燕,何呂興.三聚氰胺的樣品前處理及最新檢測方法[J].生命科學儀器,2007(5):57-59.

[2]汪輝,曹小彥,彭新凱,等.高效液相色譜-二極管陣列法測定高蛋白食品中的三聚氰胺[J].食品與機械,2007,23(5):114-124.

[3]趙永彪,李自春,劉婷,等.高效液相色譜法測定寵物食品中的三聚氰胺[J].分析實驗室,2008,27(z1):190-192.

[4]王征.GC-MS法測定動物食品中的三聚氰胺[J].福建分析測試,2008,17(2): 1-4.

[5]吳惠勤,黃芳,林曉珊,等.氣相色譜-質譜法測定奶粉及奶制品中的三聚氰胺[J].分析測試學報,2008(10):1044-1048.

[6]盧業舉,舒勇,趙成仕.氣相色譜-串聯質譜法測定食品中的三聚氰胺[J].色譜,2008,26(6): 749-751.

[7]欒偉.液相色譜串聯質譜法(LC-MS/MS)分析寵物食品中三聚氰胺[J].分析測試學報,2007,26(S1):285-286.

[8]劉梅,李金強,田德金,等.固相萃取-液相色譜-串聯質譜法檢測食品中的三聚氰胺[J].化學分析計量,2008,17(2):48-50.

[9]黃芳,黃曉蘭,吳惠勤,等.高效液相色譜-質譜法對飼料及食品添加劑中三聚氰胺的測定[J].分析測試學報,2008,27(3):313-315.

[10]王黎麗,陳芳芳,吳超,等.基于單克隆抗體的三聚氰胺ELISA檢測方法的建立[J].食品與生物技術學報,2011,30(6):962-966.

[11]陳鈺,王捷,劉仲明,等.噴射式電化學發光流動檢測技術快速測定奶粉及液態奶中三聚氰胺[J].分析測試學報,2013,32(7):890-893.

[12]王士偉,鄧光輝,屈忠凱,等.毛細管電泳電化學發光法分離測定奶粉中的二聚氰胺和三聚氰胺[J].分析實驗室,2014,33(10):1198-1201.

[13]Mecker LC,Tyner KM, Kauffman JF,et al. Selective melamine detection in multiple sample matrices with a portable Raman instrument

using durface enhanced Raman spectroscopy-active gold nanoparticles [J]. Anal Chim Acta, 2012,733: 48-55.

[14]韓彩芹,劉瑩,趙文艷,等.三聚氰胺溶液的熒光光譜實驗研究[J].光學學報,2009(11):3163-3167.

[15]馮偉,呂昌銀,嚴成艷,等.膠束增敏分光光度法水相測定乳制品中三聚氰胺[J].分析實驗室,2010,29(4):49-52.

Discussion on the Detection Methods of Melamine in Food

HUANGWei-guo

(Yangjiang Supervision Testing Institute of Quality and Metrology, Guangdong Yangjiang 529500,China)

Melamine is not food material and food additive, but a kind of important chemical material. To provide the basis for the detection melamine in food, several kinds of detection methods of melamine were discussed including HPLC, GC-MS, GC-MS-MS, LC-MS-MS, ELISA, etc. It also provided the reference for research of high sensitivity, rapid testing and cheap detection of melamine in food in the future.

Melamine; detection methods; Food

黃衛國(1985-)，男，工程師，主要從事分析化學檢測和應用。

O63

A

1001-9677(2016)03-0037-03