攪拌棒萃取-液質聯用法檢測大蒜中啶蟲脒

倪永付，王志宏，朱莉萍，高潔，閆秋成（.濟寧出入境檢驗檢疫局，山東濟寧7000；.龍口出入境檢驗檢疫局，山東龍口65700）

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攪拌棒萃取-液質聯用法檢測大蒜中啶蟲脒

倪永付1，王志宏2，朱莉萍1，高潔1，閆秋成1
（1.濟寧出入境檢驗檢疫局，山東濟寧272000；2.龍口出入境檢驗檢疫局，山東龍口265700）

建立攪拌棒吸附萃取結合液相色譜-串聯質譜法檢測大蒜中啶蟲脒殘留。樣品經攪拌棒萃取，解吸液解吸后，上機檢測。采用Hypersil GOLD-1.9 μm，50 mm×2.1 mm（i.d）色譜柱分離，在選擇反應監測模式下檢測，外標法定量。啶蟲脒在濃度0.005mg/L～0.2mg/L范圍內線性關系良好，相關系數r=0.9998，方法檢測限為0.005mg/kg。在不同添加水平下，其平均回收率為82.3%～92.2%，變異系數為7.73%～9.01%。該方法簡便、快速，適用于大蒜中啶蟲脒殘留的批量檢測。

攪拌棒萃取；液相色譜-串聯質譜；大蒜；啶蟲脒

攪拌棒吸附萃取技術（Stir Bar Sorptive Extraction，SBSE）是Erik Baltussen和Pat Sandra等人于1999年提出的一種新型樣品前處理技術［1］，它利用攪拌棒表面的吸附材料，在攪拌棒自身攪拌的同時完成吸附萃取，近年來得到廣泛的研究和應用［2-4］。啶蟲脒（Acetamiprid）是繼吡蟲啉和烯啶蟲胺后的又一個煙堿類殺蟲劑。其機理是作用于害蟲神經結合部后膜，通過與膽堿受體結合使昆蟲異常興奮，全身痙攣、麻痹而死［5］，對有機磷、氨基甲酸酯，以及擬除蟲菊酯類等農藥品種產生抗藥性的害蟲具有較好效果。關于啶蟲脒的檢測已有相關文獻報道［6-14］，但攪拌棒吸附萃取技術用于啶蟲脒檢測的方法鮮見報道，本文應用攪拌棒吸附萃取技術結合液相色譜-串聯質譜法檢測大蒜中啶蟲脒殘留，取得了較好的效果。

1　材料與方法

1.1儀器和試劑

TSQ Quantum Access高效液相色譜-串聯質譜儀：美國Thermo公司；HS260B型電動搖床、IKA MS3基本型旋渦混勻器：德國IKA公司；CR22GⅢ型高速冷凍離心機：日本Hitachi公司；R215型旋轉蒸發儀：瑞士BUCHI公司；攪拌棒：PDMS涂層、PPESK涂層。

甲醇、乙腈：均為色譜純；試驗用水：超純水；無水硫酸鈉：分析純（用前在500℃馬弗爐內烘5 h，冷卻取出裝瓶備用）；啶蟲脒標準品：購于德國Dr.公司。

1.2標準溶液制備

準確稱取啶蟲脒標準品10 mg，置于100 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解、定容，配制濃度為100 mg/L的標準貯備液。然后移取上述標準貯備液1.0 mL，置于100 mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配制濃度為1 mg/L的中間液，使用時再稀釋為系列濃度的混合標準工作液。

1.3儀器條件

1.3.1色譜條件

色譜柱：Hypersil GOLD-1.9 μm，50 mm×2.1 mm（i. d）；柱溫：30℃；進樣體積：5 μL；流動相：A為甲醇，B為0.1%甲酸水；流動相梯度洗脫程序：0～3 min，5% A；3 min～4 min，5%～60%A；4 min～5 min，60%～90% A；5 min～6 min，90%A；6 min～9.1 min，90%～5%A；9.1 min～10 min，5%A；流速：0.2 mL/min。

1.3.2質譜條件

離子源：電噴霧離子源；掃描模式：正離子模式；檢測方式：選擇反應監測；電噴霧電壓：4 500 V；鞘氣壓力：2.07×105Pa；清掃氣壓力：0；輔助氣壓力：6.89× 104Pa；離子源溫度：350℃。

1.4樣品處理

稱取樣品10g（精確到0.01g），置于100mL塑料離心管中，加40mL乙腈，加入5g氯化鈉，用玻璃棒充分攪拌均勻，于均質機上高速均質1min，9000r/min高速離心6 min，將上清液轉移至150 mL梨形瓶中，40℃旋轉蒸發至約1mL，用超純水稀釋至10mL用于SBSE萃取。

樣品萃取條件：PPESK攪拌棒；樣品溶液體積：10 mL；萃取時間：30 min；鹽濃度：5%；振蕩速度：180 r/min。樣品解吸條件：解吸液為甲醇+水（8+2）；解吸時間6 min。

2　結果與討論

2.1萃取條件的優化

2.1.1萃取涂層的選擇

本試驗考察了聚醚砜酮（PPESK）和聚二甲基硅氧烷（PDMS）兩種萃取涂層對啶蟲脒的萃取效率。其他條件不變，分別用這兩種涂層的攪拌棒對濃度為10 μg/L的標準溶液進行萃取20 min，然后用解吸液解吸6 min，上機測定，結果見圖1。

圖1　不同涂層對啶蟲瞇的萃取效率影響Fig.1　Effect of different coating on the extraction efficiency of acetamiprid

從圖中可以看出，PPESK涂層對于啶蟲脒有較好的萃取效果，而PDMS涂層的攪拌棒萃取效果不理想。因此，本試驗選取PPESK涂層的攪拌棒進行研究。

2.1.2萃取時間的確定

配制5 μg/L的標準溶液，設置萃取時間分別為5、10、20、30、40、50 min，萃取后用解吸液解吸6 min，上機測定。以峰高對萃取時間作圖，如圖2所示。

圖2　萃取時間對啶蟲脒萃取效率影響Fig.2　Effect of extraction time on the extraction efficiency of acetamiprid

結果表明，從5 min到30 min，隨著萃取時間的增加，攪拌棒對啶蟲脒的萃取效率逐漸增加，在30 min時達到峰值。隨后，攪拌棒對啶蟲脒的萃取效率隨時間的增加而下降。因此，本試驗選擇30 min作為啶蟲脒的萃取時間。

2.1.3離子強度的確定

試驗研究了在溶液中加入NaCl來調節離子強度，考察其對萃取效率的影響，分別加入濃度為0%、5%、10%、15%、20%、25%的NaCl，對濃度為5 μg/L的標準溶液進行萃取，結果如圖3所示。

圖3　離子強度對啶蟲脒的萃取效率影響Fig.3　Effect of ionic strength on the extraction efficiency of acetamiprid

在0%～5%NaCl濃度范圍內，隨著離子強度的增加，攪拌棒對啶蟲脒的萃取效率呈上升趨勢；5%～15%濃度范圍內，萃取效率呈下降趨勢；15%～25%濃度范圍內，對啶蟲脒的萃取接近為0。為獲得最佳萃取條件，本試驗選擇加入5%NaCl來調節離子強度。

2.2質譜條件的優化

首先對兩種化合物進行質譜條件的優化，選擇ESI+作為電離模式，對標準物質先進行一級質譜分析（Q1掃描），得到分子離子峰，選取相應的母離子峰，對其子離子進行二級質譜分析（Q2掃描），得到碎片離子信息。然后，再對得到的質譜參數在選擇反應監測（SRM）模式下優化，得到相應的碰撞能量。最后確定啶蟲脒的定性離子對為223.2/90.4、223.2/126.3，對應的碰撞能量分別為31、19 eV；定量離子對為223.2/126.3。

2.3色譜條件的優化

取兩種化合物的混合標準使用液，進樣5 μL，分別測試甲醇-水、乙腈-水，以及加入不同濃度的甲酸，調節各組分的比例和流速對色譜條件進行優化。結果表明，在甲醇-0.1%甲酸水為流動相，流速為0.2 mL/min，梯度洗脫的條件下，啶蟲脒有較好的峰形和響應值。啶蟲脒的SRM圖見圖4。

圖4　啶蟲脒的SRM圖Fig.4　The SRM chromatogram chart of acetamiprid

2.4方法的線性范圍及檢測限

分別配制濃度為0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2 mg/L的啶蟲脒標準水溶液，按優化后的試驗條件進行萃取、解吸，然后上機測定。結果表明：在0.005 mg/L～0.2 mg/L濃度范圍內呈現較好的線性關系，線性方程為Y=-3.66×104+4.89×105X，相關系數r=0.999 8。以3倍信噪比確定方法的檢測限，為0.005 mg/kg。

2.5基質樣品試驗

為了驗證方法的準確性，進行了基質樣品試驗。取陰性大蒜樣品，準確稱取10 g（精確至0.01 g），添加0.005、0.01、0.05 mg/kg 3個水平的啶蟲脒標準溶液，每個水平平行測定6次。在優化的試驗條件下進行前處理并上機測定，計算基質樣品加標回收率和精密度，采用相同試驗條件下的空白基質標準品進行定量。回收率和精密度見表1。

表1　方法的回收率和精密度（n=6）Table 1　Recoveries and precision of the method（n=6）

3　結論

本研究采用攪拌棒萃取-液相色譜-串聯質譜法檢測大蒜中的啶蟲脒殘留量。通過對萃取條件及儀器條件進行優化，確定了萃取涂層、萃取時間、離子強度以及最佳的液相色譜、質譜條件。本文所建立的方法能夠減少了雜質干擾，色譜峰分離效果好，具有良好的精密度、較低的方法檢出限和較高的回收率，適用于大蒜中啶蟲脒殘留的批量檢測。

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Determination of Acetamiprid in Garlic by SBSE Combining with LC-MS/MS

NI Yong-fu1，WANG Zhi-hong2，ZHU Li-ping1，GAO Jie1，YAN Qiu-cheng1
（1.Jining Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Jining 272000，Shandong，China；2.Longkou Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Longkou 265700，Shandong，China）

A method was established to determine the acetamiprid residues in garlic by stir bar sorptive extraction combining with liquid chromatography-mass spectrometry method.The sample was extracted by SBSE.After being desorbed，the sample was performed on Hypersil GOLD-1.9 μm，50 mm×2.1 mm（i.d）column.The analysis was carried out in the selected reaction monitoring and external standard method was used for quantification.The calibration curve of the acetamiprid was good linear from 0.005 mg/L to 0.2 mg/L with the correlation coefficient r=0.999 8，the detection limit of this method was 0.005 mg/kg.In different concentrations，the average recoveries of this method were 82.3%-92.2%and the variability coefficient were 7.73%-9.01%.The method is easy，rapid，and can be applied to the determination of acetamiprid in garlic.

stir bar sorptive extraction；liquid chromatography-mass spectrometer；garlic；acetamiprid

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.13.032

山東檢驗檢疫局科研項目（SK201232；SK201426）

倪永付（1983—），男（漢），工程師，碩士，研究方向：食品檢驗。

2015-06-09