高效液相色譜法測定葡萄酒中多種糖醇

劉琳，郝鵬飛，張麗，張雪琰，呂寧，徐琴，王建華（.山東檢驗檢疫局技術中心，山東青島6600；.臨沂檢驗檢疫局綜合技術服務中心，山東臨沂76034）

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高效液相色譜法測定葡萄酒中多種糖醇

劉琳1，郝鵬飛1，張麗2，張雪琰1，呂寧1，徐琴1，王建華1
（1.山東檢驗檢疫局技術中心，山東青島266002；2.臨沂檢驗檢疫局綜合技術服務中心，山東臨沂276034）

建立葡萄酒中多種糖醇的高效液相色譜檢測方法。采用色譜柱WatersXbridgeAmide（3.5μm，4.6mm×250mm），流動相為丙酮-水［77∶23（體積比），并在每1 000 mL丙酮-水流動相中加入三乙胺0.23 mL］，用示差折光檢測器進行檢測。丙三醇、木糖醇、山梨糖醇、麥芽糖醇的線性范圍為0.084 mg/mL～100 mg/mL，最低檢出限為0.016 mg/mL～0.282 mg/mL，3種葡萄酒樣品中4種糖醇的回收率為75.682%～115.476%，相對標準偏差為0.022～3.682，該方法應用于葡萄酒中糖醇的檢測快速、準確、高效。

高效液相色譜法；示差折光檢測器；麥芽糖醇；糖醇；葡萄酒

麥芽糖醇、木糖醇、山梨糖醇、丙三醇這幾種常見的糖醇經常應用或是存在于我們日常的食品中。糖醇是糖的加氫還原產物，擁有甜度低、熱量低等特點，是一類新型的甜味劑，經常被應用于低糖食品，糖尿病人保健食品以及低能量低糖功能性食品。

葡萄酒是一種營養豐富的飲料，富含人體所需的維他命、糖及微量元素，具有促進血液循環、降低血脂、軟化血管等功效。隨著人們生活水品的提高，葡萄酒這種以前相對高端小受眾的商品逐漸走上了平常百姓的日常餐桌。在中國，人們受喝酒習俗及口味的影響，紅酒的銷售量很大，人們紅酒的攝入量也很大，而且中國人對干紅、干白葡萄酒這類傳統的葡萄酒其酸澀口味喜愛度不是特別高，更喜愛含糖量較高、口感較甜的半甜、甜型葡萄酒類，由于對甜度的追求使部分葡萄酒生產者在葡萄酒加工中添加甜味劑。所以為了判定葡萄酒的優劣，既具有有益的營養物質又具有調節口味作用的糖醇在紅酒的檢測中就越來越多，作為新型甜味劑類的糖醇檢測也越來越被重視。

國內糖醇的研究多集中在配制乳，發酵乳等檢測方面，對葡萄酒中的糖醇檢測涉及很少，所以本試驗研究一種測定葡萄酒中多種糖醇的檢測方法。

1　材料與方法

1.1試劑、標準品與樣品

麥芽糖醇、木糖醇、山梨糖醇、丙三醇，純度均＞99%；丙酮（色譜純）；三乙胺（優級純）；乙酸鋅（分析純）；亞鐵氰化鉀（分析純）；試驗用水Millipore超純水。

干白葡萄酒、干紅葡萄酒、甜型葡萄酒以及起泡酒等本試驗用酒均為市售商品。

1.2儀器與設備

高效液相色譜儀1100（配示差折光檢測器）：美國Agilent公司；液相色譜柱WatersXbridgeAmide（3.5μm，4.6 mm×250 mm）：美國Waters公司；MILLI-Q純水儀：MilliPore公司；MS 3 basic混勻器：美國IKA公司；KQ-100E超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；PL602-S天平：Mettler-Toledo公司；CR22GⅢ離心機：日本HITACHI；移液槍（10-100 μL，20-200 μL，100-1000 μL，5000 μL）：Eppendorf公司；0.22 μm濾膜：德國Membrana公司；22%乙酸鋅（純度99.0%）：天津市化學試劑三廠；10.6%亞鐵氰化鉀（純度99.5%）：醫藥集團上海化學試劑公司。

1.3色譜條件

色譜柱：Waters Xbridge Amide（3.5 μm，4.6 mm× 250 mm）；流動相：單流動相（丙酮∶水=77∶23，每1 000 mL流動相加入0.230 mL三乙胺）等度洗脫；柱溫：70℃；流速：0.8 mL/min；進樣量：10 μL。

總之，應用型民辦本科高校已成為我國高等教育的重要組成部分，為確保人才培養質量和滿足當今社會對應用型人才的需求，應用型民辦本科高校必須建設一支強有力的“雙師型”教師隊伍，“雙師型”教師隊伍的建設有利于推動應用型民辦本科高校的深入發展。目前，應提高“雙師型”教師的工作積極性，建立健全應用型民辦本科高校教師獎勵機制，以“幕課”的形式對青年教師進行培訓，多渠道籌集“雙師型”教師隊伍建設資金。只有這樣才能為“雙師型”教師的培養營造良好的成長氛圍，從而為社會提供更多具有高素質的應用型人才。

1.4標準溶液配置

分別取適量麥芽糖醇、木糖醇、山梨糖醇、丙三醇標準品，配成標準儲備液，待用。

標準儲備液濃度及標準系列溶液濃度如表1。

表1　標準儲備液濃度及標準系列溶液濃度Table 1　Concentration of standard stock solution and standard series

1.5樣品前處理

稱取均勻的待測樣品10.0 g（精確至1.0 mg）放入100 mL容量瓶中，加水30 mL稀釋溶解，分別緩慢加入22%乙酸鋅溶液2.5mL和10.6%亞鐵氰化鉀溶液2.5 mL，混勻，靜置至室溫，再加入水定容至100 mL，混勻后，離心機離心，取上清液，用0.22 μm針頭濾膜過濾待測。

另：對起泡酒類需用超聲波清洗器消泡后稱取待測。

2　結果與討論

2.1色譜柱的選擇

Agela NH2為糖類分析傳統的氨基柱，在日常的分析中可以發現，隨著分析量的加大，尤其是在分析組分較復雜的樣品，例如葡萄酒類時，此類氨基柱樣品分離度下降很明顯，且木糖醇與山梨糖醇不能完全分離。選擇WatersXbridgeAmide（3.5μm，4.6mm×250mm）色譜柱，木糖醇與山梨糖醇完全分離，如圖1。

圖1　流動相未加三乙胺時4種糖醇色譜圖Fig.1　Four types of sugar alcohols chromatogram used mobile phase without triethylamine

且分離度下降比較緩慢，系統較易平衡，所以選擇Waters Xbridge Amide（3.5 μm，4.6 mm×250 mm）色譜柱。丙酮∶水=77∶23，每1 000 mL流動相加入0.230 mL三乙胺為流動相。

2.2流動相的選擇

本試驗選取乙腈水和丙酮水兩種流動相進行比較。糖類分析傳統的氨基柱，應用乙腈水為流動相，但是在分析多組分糖類及糖醇時，由于部分檢測物結構和分子量上的相似，所以不能完全分離。選擇丙酮∶水= 77∶23為流動相，流動相偏正相，糖醇分離度加大，但是對于木糖醇與山梨糖醇還是不能完全分離，如圖1，所以加入三乙胺，進一步加大分離度，分別在1000mL流動相中加入0.100、0.200、0.230、0.300mL三乙胺進行分析，加入三乙胺分離效果圖，如圖2。

圖2　加入三乙胺分離效果圖Fig.2　Triethylamine separation rendering phase without triethylamine

試驗得出隨著三乙胺加入量的加大，糖醇的分離度加大，木糖醇與山梨糖醇可以完全分離，但是三乙胺加入到0.230 mL以后，隨著加入量的加大分離度沒有明顯的變化，所以選擇每1 000 mL流動相加入0.230 mL三乙胺。加入三乙胺后葡萄酒添加色譜圖如圖3。

圖3　干紅葡萄酒添加色譜圖Fig.3　The red wine with adding stardard chromatogram

最終確定丙酮∶水=77∶23，每1000mL流動相加入0.230mL三乙胺為流動相，4種糖醇色譜圖，如圖4，干白葡萄酒色譜圖如圖5，干紅葡萄酒色譜圖如圖6，甜白葡萄酒色譜圖如圖7。

圖4　4種糖醇色譜圖Fig.4　Four types of sugar alcohols chromatogram

圖5　干白葡萄酒色譜圖Fig.5　The white wine chromatogram

圖6　干紅葡萄酒色譜圖Fig.6　The red wine chromatogram

圖7　甜白葡萄酒色譜圖Fig.7　The sweet wine chromatogram

2.3線性范圍、檢出限、精密度和重現性

以2.1、2.2選擇的色譜條件進行檢測得出干白葡萄酒、干紅葡萄酒、甜白葡萄酒中糖醇檢出情況，如表2。

表2　葡萄酒中糖醇的含量Table 2　The content of sugar alcohol in wine　mg/g

由圖5看出，葡萄酒譜圖基線比較平穩，糖醇可以被完全分離，因為不同糖醇的檢測信號響應有差別，所以檢出限有比較大的差別，表3為葡萄酒中4種糖醇線性方程。

由表3可以得出，4種糖醇相關系數均在0.99以上，線性較好，線性范圍為0.084 mg/mL～100mg/mL，最低檢出限為0.016 mg/mL～0.282 mg/mL，線性范圍比較大，且靈敏度較高。

干紅葡萄酒添加色譜圖，如圖5，對3種葡萄酒中4種糖醇進行添加回收驗證，如表4。

表3　葡萄酒中4種糖醇線性Table 3　The linears of 4 types of sugar alcohols in wine

表4　3種葡萄酒中4種糖醇回收率Table 4　The Recoveries of 4 Types of Sugar alcohols in 3 Types of Wine

由表4可以看出，3種葡萄酒中4種糖醇的3種不同濃度回收率均在75.682%～115.476%之間，回收率較好。

3種葡萄酒在3種不同濃度下4種糖醇的精密度如表5所示。

表5　3類葡萄酒中4種糖醇精密度（n=6）Table 5　The precision of 4 types of sugar alcohols in 3 types of wine（n=6）

由表5可以看出，此方法的相對標準偏差為0.022～3.682之間，精密度比較高，重現性比較好。

3　結論

本試驗主要是通過對3種常見的葡萄酒（干白葡萄酒、干紅葡萄酒、甜白葡萄酒）基質進行試驗研究，通過色譜柱、流動相選擇等方法，建立了能夠適合葡萄酒基質的色譜條件，從而對葡萄酒建立系統和完整的高效液相色譜檢測方法。丙三醇、木糖醇、山梨糖醇、麥芽糖醇的線性范圍為0.084 mg/mL～100 mg/mL，最低檢出限為0.016 mg/mL～0.282 mg/mL，3種葡萄酒樣品中4種糖醇的回收率為75.682%～115.476%，相對標準偏差為0.022～3.682，結果表明：此方法的精密度，重復性良好。

［1］中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會.GB/T 22221-2008食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的測定高效液相色譜法［S］.北京:中國標準出版社，2008

［2］中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局.GB/T 18932.22-2003蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖含量的測定方法液相色譜示差折光檢測法［S］.北京:中國標準出版社，2003

［3］曹英華，賈麗，錢春燕，等.蒸發光散射液相色譜測定無糖酸奶中糖醇［J］.食品研究與開發，2011，32（2）:117-120

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Determination of Multiple Sugar Alcohols in Wine by HPLC

LIU Lin1，HAO Peng-fei1，ZHANG Li2，ZHANG Xue-yan1，Lü Ning1，XU Qin1，WANG Jian-hua1
（1.Technology Center for Shandong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Qingdao 266002，Shandong，China；2.Comprehensive Technical Service Center for Linyi Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Linyi 276034，Shandong，China）

A method was established to determine multiple sugar alcohol in wine by HPLC.Use colume of Wa ters Xbridge Amide（3.5 μm，4.6 mm×250 mm），Mobile phase was acetone water（77∶23，volume ratio，0.230 mL triethylamine per 1 000 mL acetone water）by RID.The linear range of glycerol，xylitol，sorbitol，maltitol were 0.084 mg/L-100 mg/L.Limit of minium detection were 0.016 mg/mL-0.282 mg/mL.The sample recoveries were 75.682%-115.476%，relative standard precisionswere 0.022-3.682.The method wasrapid，accurate，efficient.

HPLC；RID；maltitol；sugar alcohols；wine

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.13.035

劉琳（1982—），女（漢），工程師，碩士研究生，研究方向：食品分析化學。

2015-09-30