雞新城疫-傳染性法氏囊病二聯滅活疫苗對SPF雞和商品肉雞的免疫效果觀察

詹先強　福州大北農生物技術有限公司福州350014

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雞新城疫-傳染性法氏囊病二聯滅活疫苗對SPF雞和商品肉雞的免疫效果觀察

詹先強福州大北農生物技術有限公司福州350014

用雞新城疫-傳染性法氏囊病二聯滅活疫苗（La Sota+HQ株）分別免疫1、7、14日齡SPF雛雞，1日齡免疫組于25日齡采血，法氏囊病中和抗體幾何平均值為15.5log2，攻毒保護10/10；7日齡免疫組于30日齡采血，法氏囊病中和抗體幾何平均值為14.8log2，攻毒保護10/10；14日齡免疫組于35日齡采血，法氏囊病中和抗體幾何平均值為15.4log2，攻毒保護10/10。3組在50日齡時法氏囊病中和抗體幾何平均值依次為16log2、16.1log2、15.9log2，攻毒保護均為10/10。用雞新城疫-傳染性法氏囊病二聯滅活疫苗（La Sota+HQ株）免疫帶有母源抗體的1、7、14日齡商品肉雞，免后25 d血清法氏囊病中和抗體幾何平均值分別為12.4log2、15log2、14.2log2，攻毒保護分別為8/10、10/10、9/10；3組在50日齡時法氏囊病中和抗體幾何平均值依次為16.2log2、15.7log2、15.5log2，攻毒保護均為10/10。

關健詞免疫中和抗體攻毒保護

雞傳染性法氏囊病（Infectious bursal disease，IBD）是雛雞的一種急性、接觸性傳染病。防控該病通常采用滅活疫苗（種雞被動免疫）和活毒疫苗。雛雞免疫活毒苗，常受母源抗體干擾而導致免疫失敗，或因毒力過強造成免疫抑制。近年來，河南農業大學禽病研究所對IBD病毒液培養工藝進行了大量研究［1］，改用傳代細胞和生物反應器培養病毒（均已獲發明專利），使滅活疫苗中抗原含量大大提高。福州大北農生物技術有限公司購買河南農業大學技術后，采用上述專利技術制備出雞新城疫-傳染性法氏囊病二聯滅活疫苗（La Sota+HQ株，商品名新法寶，以下簡稱新法寶），本試驗目的在于探討1、7、14日齡SPF雞和商品肉雞免疫新法寶后雞傳染性法氏囊病的抗體動態和攻毒保護，為新法寶的推廣和應用提供科學依據。

1　材料及方法

1.1試驗用疫苗新法寶，福州大北農生物技術有限公司（以下簡稱福州大北農）生產，生產批號2014001，有效期至20150603。

1.2試驗用雞

1.2.1SPF雞試驗組SPF種蛋購自北京梅里亞維通試驗動物有限公司，自行孵化出雛后置隔離器內飼養至所需日齡。小雞出殼后隨機分組，3組免疫組，每組20羽，另設40羽作為對照組。分組完成后將每羽雛雞用翅標進行編號。第1組20羽于1日齡免疫，第2組20羽于7日齡免疫，第3組20羽于14日齡免疫。3組免疫組每羽雞均頸部皮下注射新法寶0.2 mL；另40羽不免疫，作為對照。上述各組雞按組別在不同隔離器內喂養，除免前采血外，1日齡免疫組25日齡時采血測抗體和攻毒，7日齡免疫組30日齡時采血測抗體和攻毒，14日齡免疫組35日齡時采血測抗體和攻毒。3組均于50日齡時再次采血測抗體和攻毒。

1.2.2商品白羽肉雞試驗組1日齡商品白羽肉雞100羽，購自福建森寶雞場，購回后在隔離器中飼養。將雛雞隨機分組，3組免疫組每組20羽，另設40羽作為對照組。分組完成后將每羽雛雞用翅標進行編號。其中第1組20羽于1日齡免疫；第2組20羽于7日齡免疫；第3組20羽于14日齡免疫。3組免疫組每羽雞均頸部皮下注射新法寶0.2 mL；另40羽不免疫，作為對照。上述各組雞按組別在不同隔離器內喂養，除免前采血外，第1組（1日齡免疫組）25日齡時采血測抗體和攻毒，第2組（7日齡免疫組）30日齡時采血測抗體和攻毒，第3組（14日齡免疫組）35日齡時采血測抗體和攻毒，3組均于50日齡時再次采血測抗體和攻毒。

1.3檢驗用材料雞傳染性法氏囊病ELISA抗體試劑盒，生產廠家IDEXX，批號：MAR-2014；雞傳染性法氏囊病（HQ株）抗原，基礎種子由河南農業大學禽病研究所提供，福州大北農生產，批號為BS2015001；攻毒用強毒為法氏囊病病毒BC6-85株，購自中國獸醫藥品監察所，批號為200208。

1.4抗體測定方法法氏囊病中和抗體（以下中和抗體均指法氏囊病中和抗體）檢測方法為法氏囊病微量中和試驗，按2010版《中華人民共和國獸藥典》附錄中和試驗進行［2］，在96孔微量細胞培養板上操作，采用固定抗原稀釋血清的β微量法，抗原用200個TCID50；雞傳染性法氏囊病ELISA抗體按試劑盒說明書要求操作。

1.5攻毒試驗按中華人民共和國農業部公告第326號效力檢驗雞傳染性法氏囊病部分的攻毒法進行。第1組在25日齡，第2組在25日齡，第3組在30日齡及第1、2、3組在第50日齡時進行攻毒；攻毒時各免疫組隨機選取10羽，連同挑對照組雞10羽，經口接種雞傳染性法氏囊病病毒BC6-85強毒株，每羽0.2 mL（含2×104BID50），72 h后全部剖殺，檢查各組法氏囊病的病變，在對照組雞至少9/10有病變的情況下判定各免疫組的保護率。每組在攻毒前采血。

表1　 SPF雞與商品肉雞免疫新法寶后的抗體動態

2　結果

2.1SPF雞試驗組抗體動態與攻毒保護4組雞免前中和抗體均為0。第1組（1日齡免疫組）25日齡時中和抗體幾何平均值為15.5 log2，對照組（第4組）中和抗體為0；免疫組攻毒保護10/10，對照組攻毒保護0/10。第2組（7日齡免疫組）30日齡時中和抗體幾何平均值為14.8 log2，對照組中和抗體為0；免疫組攻毒保護10/10，對照組攻毒保護0/10。第3組（14日齡免疫組）35日齡時中和抗體幾何平均值為15.4 log2，對照組中和抗體為0；免疫組攻毒保護10/10，對照組攻毒保護0/10。50日齡時3個免疫組中和抗體幾何平均值依次為16.0 log2、16.1 log2、15.9 log2，對照組中和抗體為0；攻毒保護3個免疫組均為10/10，對照組攻毒保護均為0/10。結果見表1-表2。

2.2商品肉雞試驗組抗體動態與攻毒保護白羽肉雞免疫前帶有較高的母源抗體，4組雞免前中和抗體幾何平均值為11.0 log2～12.6 log2。第1組（1日齡免疫組）25日齡時中和抗體幾何平均值為12.4 log2，對照組中和抗體幾何平均值為5.5log2；免疫組攻毒保護8/10，對照組攻毒保護0/10。第2組（7日齡免疫組）30日齡時中和抗體幾何平均值為15.0 log2，對照組中和抗體幾何平均值為3.7log2；免疫組攻毒保護10/10，對照組攻毒保護1/10。第3組（14日齡免疫組）35日齡時中和抗體幾何平均值為14.2 log2，對照組中和抗體幾何平均值為4.1log2；免疫組攻毒保護9/10，對照組攻毒保護1/9。50日齡時3個免疫組中和抗體幾何平均值依次為16.2 log2、15.7 log2、15.5 log2，3個免疫組攻毒保護均為10/ 10，對照組攻毒保護為1/10。結果見表1-表2。

表2　 SPF雞與商品肉雞免疫新法寶后的攻毒保護

3　討論

1）試驗結果表明，SPF雞試驗組在1、7、14日齡免疫新法寶后抗體迅速上升，免后25 d中和抗體幾何平均值分別為15.5 log2、14.8 log2、15.4 log2，攻毒保護均為10/10，而未免疫的SPF對照雞攻毒保護為0/10；免疫組50日齡時中和抗體幾何平均值更高（15.9 log2～16.1 log2），攻毒全部10/10保護，對照組攻毒保護為0/10。帶有母源抗體的商品肉仔雞在1、7、14日齡免疫新法寶后25日齡中和抗體幾何平均值分別為12.4 log2、15.0 log2、14.2 log2，攻毒保護依次為8/10、10/10、9/10，而未免疫的對照雞中和抗體幾何平均值下降至5.5 log2～3.7 log2，攻毒保護為0/10～1/9。3組免疫雞在50日齡時中和抗體幾何平均值更高（16.2 log2～15.5 log2），攻毒全部10/10保護。試驗結果顯示，新法寶對無母源抗體的雛雞很快產生法氏囊病的主動免疫，對帶有母源抗體的商品肉雞能迅速突破母源抗體干擾，兩者均可在免疫后3～4周產生主動免疫抗體，抵抗法氏囊病強毒感染。

2）活毒疫苗免疫受母源抗體干擾，因病毒抗原與母源抗體結合影響病毒復制，可不產生抗體反應，導致免疫失敗。如采用高毒力的法氏囊病活苗，則雖可突破母源抗體，但往往引起法氏囊的損傷，造成免疫抑制，且污染養殖環境。試驗顯示用新法寶免疫SPF雞后，抗體持續上升，而免疫有母源抗體的商品肉雞，抗體先稍下降而后持續上升，顯示滅活苗免疫也受母源抗體干擾［3-5］。新法寶是采用新的工藝制備法氏囊病抗原病毒液，改原代細胞培養為傳代細胞培養，改轉瓶培養為生物反應器培養，疫苗中的雞傳染性法氏囊病病毒抗原含量由法定標準規定的106.8TCID50/0.1mL提高至108.5TCID50/0.1mL。抗原效價提高使免疫效力大大提高，從而可克服母源抗體干擾，在免疫后3～4周迅速產生有效的免疫保護。

3）縮短免疫空白期，產生更快、更高、更持久的有效免疫是防控疫病的關鍵。用法氏囊病滅活疫苗或聯苗代替活毒疫苗（或復合疫苗）主動免疫雛雞可避免因活毒苗受母源抗體干擾造成的免疫失敗或因毒力過強造成的免疫抑制，亦可減少環境中法氏囊病病毒污染和頻繁免疫對雞群的應激。因此，宣傳和推廣新型、高效滅活疫苗有很大的實用價值，有望逐步控制和消滅雞傳染性法氏囊病。

［1］王澤霖,王川慶,趙軍,等.用新型、高效滅活疫苗控制和消滅雞傳染性法氏囊病［C］.中國畜牧獸醫學會2014年學術年會暨中國畜牧獸醫學會禽病學分會第九次全國會員代表大會論文集（廣州）,2014：25-26.

［2］中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典2010版：第三部［S］.北京：中國農業出版社,2010.

［3］王澤霖李永濤.母源抗體對H 9滅活疫苗免疫的干擾［C］.中國畜牧獸醫學會2014年學術年會暨中國畜牧獸醫學會禽病學分會第九次全國會員代表大會論文集（廣州）, 2014：159.

［4］張評滸,唐應華,趙永忠,等.H 5N 2與H 5N 1禽流感油乳劑滅活疫苗免疫鵝對H5N 1流行株攻毒的保護效力及母源抗體對免疫效力的干擾［J］.中國獸醫學報,2005,26（3）：268-274.

［5］Riks Maas,Sigrid Rosema,Diana Van Zoelen,et al.Maternal immunity against avian influenza H5N 1in chickens：limited protection and interference with vaccine efficacy［J］.Avian Pathology,2011,40（1）：87-92.

The immune effect of duplex inactivated vaccines of new castle disease and in fectious bursal disease on SPF chicken and commercial broiler

Zhan Xianqiang
（Fuzhou Dabeinong Biotech Co.Ltd.，Fuzhou 350014）

1，7，14 days of age SPF chicken are respectively vaccinated with a new，efficient inactivated vaccine of infectious bursal disease，and group 1 of chicken immune at 1 day-age，blood collecting at 25 days-age，the neutralizing antibody is up to15.5log2，poison attack protection reaches 10/10；group 2 of chicken immune at 7 days-age，blood collecting at 30 days-age，the neutralizing antibody is up to 14.8log2，poison attack protection reaches 10/10；group 3 of chicken immune at14 days-age，blood collecting at 35 days-age，the neutralizing antibody is up to 15.4log2，poison attack protection reaches 10/10.At 50 days-age of three groups chicken's neutralizing antibody are respectively up to16log2，16.1log2 and15.9log2，and poison attack protection all reaches 10/10.A new，efficient inactivated vaccine immune 1，7，14 days old commercial broilers with maternal antibody，after 25 days，sera-neutralizing antibodies are respectively up to 12.4log2，15log2 and 14.2log2，poison attack protection respectively reach 8/10，10/10 and 9/10；Three groups commercial broilers at the age of 50 days，their neutralizing antibody titers are respectively up to16.2log2，15.7log2，15.5log2，and poison attack protection reaches all 10/10。

Immune Neutralizing antibody Protective efficiency

A

1003-4331（2016）03-0017-03

國家星火計劃項目“雞新城疫、傳染性法氏囊病二聯滅活疫苗產業化示范”（S2015C400020）資助。

詹先強（1980-），男，本科，獸醫師。從事獸用生物

制品質量控制與管理工作。