硅油并發性白內障和年齡相關性白內障晶狀體上皮細胞中凋亡因子的表達差異

呂海燕，湯詠梅，韓艷玲，張鄖芳，成拾明

?

·臨床研究·

硅油并發性白內障和年齡相關性白內障晶狀體上皮細胞中凋亡因子的表達差異

呂海燕，湯詠梅，韓艷玲，張鄖芳，成拾明

Department of Ophthalmology,Taihe Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine, Shiyan 442000, Hubei Province, China

Correspondence to:Shi-Ming Cheng. Department of Ophthalmology, Taihe Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine, Shiyan 442000, Hubei Province, China. Ming_13693256307@126.com

Abstract

?AIM: To analyze the expression of apoptosis factor in cataract and age-related cataract lens epithelial cells.

?METHODS: A total of 50 cases (50 eyes) of concurrent silicone oil cataract patients as study group and the same period of 50 cases (50 eyes) of age-related cataract patients as control group were selected in our hospital during Mar. 2014 to Mar. 2016. In the determination of two groups of patients had been accurately grasped the specific content of the research program and signed informed consent book of the lens epithelial cells apoptosis factor expression. They were measured and compared.

?RESULTS: Study group of Bcl-2 protein expression positive rate was 92%. Bax protein expression positive rate was 100%. The expression of caspase-3 protein expression positive rate was 100%. Compared with the control group, the expression of bcl-2 expression positive rate of 80%. Bax protein expression positive rate of 84%. Caspase-3 protein expression positive rate of 82%. Difference between the two groups were statistically significant (P<0.05).

?CONCLUSION: Concurrent silicone oil cataract lens epithelial cells apoptosis factor expression is significantly higher than that of age-related cataract. A clinical lens epithelial cells apoptosis factors of full participation in the silicone oil cataract extraction in the development and progression is prompted.

目的：分析硅油并發性白內障和年齡相關性白內障晶狀體上皮細胞中凋亡因子的表達差異。

方法：將我院2014-03/2016-03收治的硅油并發性白內障患者50例50眼作為研究組，另選同期收治年齡相關性白內障患者50例50眼作為對照組，兩組患者均已如實掌握此次研究方案具體內容并簽署知情同意書后對其晶狀體上皮細胞中凋亡因子的表達進行測定和比較。

結果：研究組Bcl-2蛋白表達陽性率92%、Bax蛋白表達陽性率100%、Caspase-3蛋白表達陽性率100%，而同期對照組Bcl-2蛋白表達陽性率80%、Bax蛋白表達陽性率84%、Caspase-3蛋白表達陽性率82%，組間差異具有統計學意義(P<0.05)。

結論：硅油并發性白內障晶狀體上皮細胞中凋亡因子的表達顯著高于年齡相關性白內障，提示晶狀體上皮細胞中部分凋亡因子全程參與硅油并發性白內障的發生發展過程。

硅油并發性白內障；年齡相關性白內障；晶狀體上皮細胞；凋亡因子

引用：呂海燕，湯詠梅，韓艷玲，等.硅油并發性白內障和年齡相關性白內障晶狀體上皮細胞中凋亡因子的表達差異.國際眼科雜志2016;16(9):1668-1670

0引言

硅油具有理化性質穩定、生物耐受性好等特征而暫時替代玻璃體用于復雜性視網膜脫離治療工作中。然而，隨著應用頻率的不斷提高，硅油并發性白內障成為一個不可回避的現實問題。近些年來，醫學技術的快速發展使得細胞凋亡(apoptosis)成為生命科學研究的重要領域，由于其可以降解細胞內至關重要的蛋白而導致細胞形態學、生物化學改變，尤其是晶狀體上皮細胞的凋亡，在多種白內障發生發展中扮演著至關重要的角色，為硅油并發性白內障發病機制的研究提供了全新方向及思路[1]。本次研究針對

表1　兩組Bcl-2蛋白表達陽性率比較 眼(%)

表2　兩組Bax蛋白表達陽性率比較 眼(%)

表3　兩組Caspase-3蛋白表達陽性率比較 眼(%)

硅油并發性白內障和年齡相關性白內障晶狀體上皮細胞中凋亡因子的表達差異展開分析，報告如下。

1對象和方法

1.1對象將我院2014-03/2016-03收治的硅油并發性白內障患者50例50眼作為研究組，其中男33例33眼，女17例17眼；年齡52～68(平均60.25±1.30)歲；左眼32例,右眼18例。另選同期年齡相關性白內障患者50例50眼作為對照組，其中男32例32眼,女18例18眼；年齡51～68(平均60.18±1.27)歲；左眼33例,右眼17例。所有白內障診斷符合美國眼科學會(American Academy of Ophthalmology，AAO)診斷標準：(1)徹照法檢查發現晶狀體周圍或者是后極部存在點狀暗影；(2)裂隙燈顯微鏡檢查可見晶狀體周邊或后極部有點狀混濁，皮質尚透明，亦或是晶狀體后極出現水瘢樣改變[2]。納入標準：(1)經臨床綜合診斷確診為硅油并發性白內障/年齡相關性白內障者；(2)臨床依從性好者；(3)無其他眼底部合并癥，視神經嚴重損傷者。排除標準:(1)代謝性或外傷性因素所致白內障者；(2)合并眼部或者是全身性疾病者；(3)不同意此次研究方案或未簽署知情同意書者。兩組患者一般資料比較無統計學意義。

1.2方法將采集到的晶狀體前囊膜迅速放置在含有40g/L多聚甲醛的離心管中固定后,放入4℃冰箱中保存待檢[3]。將待檢測晶狀體樣本放入96孔板并進行打孔，時間為15min，之后以150r/min反復清洗3次共15min后放入100g/L養血清之中[4]。配置Bcl-2蛋白、Bax蛋白、Caspase-3蛋白抗體，稀釋液為磷酸鹽緩沖溶液，稀釋濃度為1∶100。配置熒光二抗溶液和細胞核染色液，稀釋液均為磷酸鹽緩沖溶液，濃度比分別為1∶200和1∶800，室溫放置時間分別為1.5h和10min[4]。將晶狀體前囊膜樣本進行熒光染色并計算陽性細胞數量。觀察指標晶狀體上皮細胞中凋亡因子Bcl-2蛋白、Bax蛋白、Caspase-3蛋白表達各自陽性率。

陽性判定標準： 采用美國貝克曼庫爾特公司生產的UniCel DxI 800全自動化學發光免疫分析儀對各表達陽性率進行計算，選取4個具有代表性的視野，在500倍視野下計算陽性細胞占比，取其平均值作為最終測定結果并將其分為以下五個級別：無表達(無陽性細胞存在)為0、低表達(陽性細胞占比<25%)為1+、中度表達(陽性細胞占比25%～50%)為2+、高表達(陽性細胞占比50%～75%)為3+、極高表達(陽性細胞占比>75%)為4+[5]。

統計學分析：采用SPSS 17.0統計軟件進行處理，計數資料采用率表示，用卡方檢驗，如果總樣本量小于40或最小理論頻數小于1，則采用Fisher確切概率法檢驗，P<0.05表示差異具有統計學意義。

2結果

2.1兩組Bcl-2蛋白表達陽性率比較研究組Bcl-2蛋白表達陽性率92%，顯著高于同期對照組80%，差異有統計學意義(P<0.05),見表1。

2.2兩組Bax蛋白表達陽性率比較研究組、對照組Bax蛋白表達陽性率分別為100%、84%，差異有統計學意義(P<0.05), 見表2。

2.3兩組Caspase-3蛋白表達陽性率比較研究組Caspase-3蛋白表達陽性率100%，而同期對照組Caspase-3蛋白表達陽性率82%，差異有統計學意義(P<0.05), 見表3。

3討論

硅油并發性白內障是目前硅油填充治療過程中最為常見的并發癥類型，既往研究認為該病癥的發病機制與氧化應激反應、紫外線照射、糖尿病等因素具有直接關聯性，但是并未得到國內外醫學界的一致認可[6]。隨著近些年來醫學研究的深入開展，晶狀體上皮細胞凋亡逐漸引起了臨床的高度關注，并且被認定為非先天性白內障發生與發展的細胞學基礎[7]。B淋巴細胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)是生命科學研究中最受到重視的基因之一，Bcl-2蛋白以及Bax蛋白為該家族重要的表達形式，扮演著細胞凋亡調節因子的角色[8]。而Caspase-3蛋白則是半胱氨酸蛋白酶(Cysteine aspartic acid specific protease)家族中細胞進入程序性死亡的特異性標志物，廣泛分布于眼部組織之中且由于Caspase-3蛋白具有執行剪切細胞結構蛋白的能力，直接導致晶狀體上皮細胞發生凋亡，成為了該細胞凋亡進程中至關重要的終末執行酶[9]。通過對凋亡因子的表達進行測定，可以解釋多種白內障疾病的發病機制，為后天性白內障的預防、治療及預后評估提供強有力的幫助，具有重要的研究價值[10]。

本次研究中分別選取了硅油并發性白內障以及年齡相關性白內障作為對比對象，對其Bcl-2蛋白表達、Bax蛋白表達、Caspase-3蛋白表達各自陽性率之間的差異進行比較和分析，結果發現，Bcl-2蛋白表達陽性率92%、Bax蛋白表達陽性率100%、Caspase-3蛋白表達陽性率100%，而同期對照組Bcl-2蛋白表達陽性率80%、Bax蛋白表達陽性率84%、Caspase-3蛋白表達陽性率82%，二者之間相比較，研究組各項數值均高于對照組且組間差異具有統計學意義(P<0.05)，尤其是研究組Bax蛋白表達和Caspase-3蛋白表達以中度表達及高表達為主，對照組則是以低表達和中度表達為主，提示臨床上述三種晶狀體上皮細胞中凋亡因子不僅在硅油并發性白內障、年齡相關性白內障發生發展之中扮演著重要的角色，同時進一步豐富了目前尚不明確的硅油并發性白內障發病機制的研究內容，能夠為臨床預防及治療硅油并發性白內障工作開展提供強有力的幫助。

綜上所述，硅油并發性白內障晶狀體上皮細胞中凋亡因子的表達顯著高于年齡相關性白內障，提示臨床晶狀體上皮細胞中部分凋亡因子全程參與硅油并發性白內障的發生發展進程。

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2 Subhasree B, Suren R,De Adèle A,etal. α6 Integrin transactivates insulin-like growth factor receptor-1 (IGF-1R) to regulate caspase-3-mediated lens epithelial cell differentiation initiation.JBiologicalChemistry2014;289(7):3842-3855

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4梅芳，李紅梅，馮勝輝，等.重組人表皮生長因子滴眼液對白內障超生乳化手術角膜內皮細胞的影響.實用臨床醫藥雜志2013;17(13):159-161

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Expression of apoptosis factor in the lens epithelial cells of the patients with silicone oil complicated cataract and age-related cataract

Hai-Yan Lü, Yong-Mei Tang,Yan-Ling Han, Yun-Fang Zhang, Shi-Ming Cheng

2016-06-09Accepted：2016-08-05

?silicone oil complicated cataract; age related cataract; lens epithelial cell; apoptosis factor

(442000)中國湖北省十堰市太和醫院 湖北醫藥學院附屬醫院眼科

呂海燕,本科，主管護師，研究方向：眼科護理學。

成拾明，碩士，主治醫師，研究方向：葡萄膜疾病、屈光手術.Ming_13693256307@126.com

2016-06-09

2016-08-05

Lü HY, Tang YM, Han YL,etal. Expression of apoptosis factor in the lens epithelial cells of the patients with silicone oil complicated cataract and age-related cataract.GuojiYankeZazhi(IntEyeSci) 2016;16(9):1668-1670

10.3980/j.issn.1672-5123.2016.9.17