卡巴他賽注射液細菌內毒素檢查法的研究

田文娟，李淑敏，段春艷，王以云

(山東新時代藥業有限公司，山東 臨沂 273400)

卡巴他賽注射液細菌內毒素檢查法的研究

田文娟，李淑敏，段春艷，王以云

(山東新時代藥業有限公司，山東 臨沂 273400)

為建立卡巴他賽注射液的細菌內毒素檢查方法。參照《中國藥典》2010年版二部附錄細菌內毒素檢查法--凝膠法進行試驗。結果表明將卡巴賽注射液用其注射用溶劑振搖混勻后，稀釋40倍時對細菌內毒素檢查無干擾作用。所以卡巴他賽注射液可采用細菌內毒素檢查法--凝膠法進行細菌內毒素檢測。

卡巴他賽注射液；細菌內毒素檢查；干擾試驗

卡巴他賽是第三代紫衫烷類藥物，藥物通過與微管蛋白結合，促進微管組裝，抑制細胞進入有絲分裂期而抑制癌細胞增殖，適用于與潑尼松聯用治療既往用含多烯紫杉醇治療方案激素難治的轉移性前列腺癌患者[]。本試驗參照《中國藥典》2010年版二部附錄細菌內毒素檢查法(XIE)進行了干擾試驗[2]，為該產品建立簡便、快捷、檢測靈敏度高的細菌內毒素檢查方法提供依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

旋渦混合儀，型號：XW-80A，生產單位：上海醫科大學儀器廠；電熱恒溫干燥箱，型號：GZX-9246MBE，生產單位：上海博迅實業有限公司醫療設備廠；恒溫水浴鍋，型號：HH-8，生產單位：上海梅香儀器有限公司。

1.2 供試品

卡巴他賽注射液，生產廠家為山東新時代藥業有限公司；批號為207150401、207150402、207150403；卡巴他賽注射液規格為60mg:1.5mL，注射用溶劑規格為4.5mL。

1.3 試劑

細菌內毒素檢查用水(廠家：湛江安度斯生物有限公司，批號：1405261)，鱟試劑(廠家: 福州新北生化工業有限公司，批號：13111012，標示靈敏度：0.25EU·mL-1；廠家：湛江安度斯生物有限公司，批號：1409231, 標示靈敏度0.25EU·mL-1; 廠家：福州新北生化工業有限公司，批號：14041412，標示靈敏度：0.125EU·mL-1；廠家：湛江安度斯生物有限公司，批號：1405261, 標示靈敏度0.125EU·mL-1)，細菌內毒素工作標準品(廠家：中國食品藥品檢定研究院，批號：150601-201176，效價：100EUo 支-1)。

2 方法與結果

2.1 最大有效稀釋倍數

取一瓶卡巴他賽注射液加注射用溶劑4.5 mL(一瓶)振搖混勻后，根據公式MVD= L·C/λ計算最大有效稀釋倍數 ，其中L為細菌內毒素限值，依據卡巴他賽注射液臨床使用標準，L=0.5 EU·mg-1；C為供試品溶液的濃度，C=60mg· (1.5mL+4.5mL)-1=10mg·mL-1；λ為鱟試劑的標示靈敏度。當市售鱟試劑的最高靈敏度為0.03 EU·mL-1時，MVD=(0.5EU·mg-1×10mg·mL-1)/0.03EU·mL-1=160,即此時卡巴他賽注射液的最大有效稀釋倍數為160倍。

2.2 干擾預試驗

2.2.1 鱟試劑的靈敏度復核

按《中國藥典》2010年版二部附錄細菌內毒素檢查法對兩個廠家的標示靈敏度λ為0.25 EUomL-1的鱟試劑進行靈敏度復核，鱟試劑靈敏度的測試值為λc。當λc在0.5λ～2λ(包括0.5λ和2λ)時，方可用于供試品的細菌內毒素檢測，并以標示靈敏度為該批鱟試劑的靈敏度。結果見表1。

表1 鱟試劑靈敏度復核結果

2.2.2 干擾預試驗

卡巴他賽注射液的最大有效稀釋倍數為160倍，取供試品一瓶加注射用溶劑4.5 mL(一瓶)振搖混勻作為原液，然后用細菌內毒素檢查用水進行一系列倍數的稀釋，將10倍，20倍，40倍，80倍，160倍的供試品稀釋溶液作為供試品溶液組(不含內毒素標準溶液的供試品稀釋液)；分別用以上濃度的供試品稀釋溶液作為溶劑將細菌內毒素工作標準品進行稀釋，制成均含2λ內毒素標準溶液且供試品稀釋倍數為10倍，20倍，40倍，80倍，160倍的的稀釋溶液作為供試品陽性對照組，用以上兩個廠家靈敏度為0.25 EU o mL-1的鱟試劑進行干擾預試驗，每個濃度平行做兩管，同時做陰性對照和陽性對照，實驗結果見表2。

表2 卡巴他賽注射液干擾預試驗結果

卡巴他賽注射液的干擾試驗預實驗中陰性對照組為陰性，陽性對照組為陽性，實驗有效，表中結果說明其最小不干擾稀釋倍數為20倍，綜合考慮為保證試驗的可行性，采用40倍的供試品稀釋液進行干擾試驗。

2.3 干擾試驗

按《中國藥典》2010年版二部附錄細菌內毒素檢查法，用兩個廠家標示靈敏度λ為0.125 EU·mL-1的鱟試劑進行干擾試驗。用40倍的供試品稀釋液作溶劑將細菌內毒素工作標準品制成含內毒素濃度為0.25、0.125、0.06、0.03 EU·mL-1的供試品溶液，同時用細菌內毒素檢查用水將細菌內毒素工作標準品制成濃度為0.25、0.125、0.06、0.03 EU·mL-1的內毒素標準溶液，同時做陰性對照，根據公式E= antilg(∑X/4)分別計算出內毒素標準溶液和含供試品的內毒素溶液的反應終點濃度的幾何平均值(Et 和Es)，試驗結果見表3。

表3 卡巴他賽注射液干擾試驗結果

從以上干擾試驗結果可得出：內毒素標準溶液的反應終點濃度的幾何平均值Es均在0.5λ～2.0λ之間，含供試品的內毒素溶液的反應終點濃度的幾何平均值Et 均在0.5 Es ～2.0 Es 之間(包括0.5 Es和2.0 Es)，表明供試品稀釋40倍時，對鱟試劑與細菌內毒素反應無干擾作用。

2.4 供試品細菌內毒素檢測結果

將3批供試品分別進行40倍稀釋，用靈敏度0.125 EU·mL-1的鱟試劑，按《中國藥典》2010年版二部附錄細菌內毒素檢查法，進行細菌內毒素檢查，結果見表4。3批供試品細菌內毒素均符合規定，即內毒素含量小于0.5 EU·mg-1。

表4 卡巴他賽注射液細菌內毒素檢查結果

3 討論

細菌內毒素隨注射劑進入人體血液所導致的"熱原反應"是注射劑臨床應用中發生率較高的不良反應，細菌內毒素檢測是注射液制劑質量檢查的重要項目。本文按《中國藥典》2010版二部附錄XIE“細菌內毒素檢查法--凝膠法”進行細菌內毒素檢查法研究，結果表明卡巴他賽注射液加注射用溶劑振搖混勻后，稀釋40倍時對細菌內毒素檢查無干擾作用，可在大于或等于此稀釋倍數下采用“凝膠法”進行卡巴他賽注射液的細菌內毒素檢查，從而控制供試品的內毒素含量在限值范圍內，保證產品質量，確保患者用藥安全。

[1] 劉 琪，劉 明，朱 剛，等.轉移性去勢抵抗性前列腺癌藥物治療進展[J].現代泌尿外科雜志,2014,19(9):625-627.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典[S].二部，2010：附錄99-102.

(本文文獻格式：田文娟，李淑敏，段春艷.卡巴他賽注射液細菌內毒素檢查法的研究[J].山東化工，2016，45(04)：48-49,51.)

Study on Bacterial Endotoxin Test in Cabazitaxel Injection

Tian Wenjuan, Li Shumin, Duan Chunyan，Wang Yiyun

(Shandong New Time Pharmaceutical Co.,Ltd. , Linyi 273400，China)

Objective： To establish an endotoxin test method for cabazitaxel injection. Methods Experiments were conducted according to the bacterial endotoxin testing method in Chinese Pharmacopoeia 2010 edition(Volume II). Results： When diluted 40 times with specialized solvent, cabazitaxel has no interferential effect on the gelation reaction of endotoxin. Conclusion ：The established endotoxin testing method can be used in the quality control of cabazitaxel injection.

cabazitaxel injection; endotoxin test method; disturbance test

2016-01-17

R927.1

A

1008-021X(2016)04-0048-02