低離子強度鹽溶液在微柱凝集法交叉配血實驗中的應用及影響

鄧冬梅，王遠杰，馮俊程，劉友迎（遂寧市中心醫院，四川629000）

低離子強度鹽溶液在微柱凝集法交叉配血實驗中的應用及影響

鄧冬梅，王遠杰，馮俊程，劉友迎（遂寧市中心醫院，四川629000）

目的探討低離子強度鹽溶液微柱凝集法交叉配血實驗的應用及影響因素。方法利用生理鹽水、低離子溶液分別對2 189例受血者和2 189例供血者進行凝集配血試驗。用低離子強度鹽溶液配制紅細胞進行交叉配血陽性54例（2.5%），陰性2 135例（97.5%）；用生理鹽水陽性32例（1.1%），陰性2 167例（98.9%），對每組結果進行統計學處理。結果2種介質在紅細胞懸液交叉配血的結果比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論低離子強度鹽溶液用于微柱凝集法交叉配血實驗的敏感性增高，特異性增強，結果穩定，適于臨床輸血前交叉配血實驗的血清學檢測。

離子；溶液；凝集反應；血型鑒定和交叉配血；血型抗原/免疫學

血清學交叉配血是輸血治療前重要的實驗項目，以保證臨床用血的安全性和有效性。微柱凝集試驗技術是一種免疫學檢測新方法。近年來，微柱凝集技術在國外已普遍使用，國內部分地區也逐漸開始應用。由于交叉配血試驗大多手工操作，影響因素較多。在日常工作中，紅細胞懸液是用生理鹽水還是低離子強度鹽溶液配制似乎并未引起足夠重視，其對微柱凝集法試驗結果的影響，未太多報道。作者收集2 189例患者和供血者的血液標本通過低離子強度鹽溶液和生理鹽水配制紅細胞懸液進行微柱凝集法交叉配血，探討2種方法微柱凝集法交叉配血的影響。

1　資料與方法

1.1資料

1.1.1檢測對象選取2014年6月至2014年12月本院住院與門診申請輸血和手術備血患者（2 189例）。受血者血樣是輸血前3 d內。

1.1.2檢測試劑微柱凝集卡（IgG、C3d檢測卡，血型鑒定卡）為美國強生公司產品；低離子強度鹽溶液為江陰力博醫藥生物技術有限公司產品；生理鹽水為科倫藥業股份有限公司產品。

1.1.3主要儀器血型工作站為美國強生公司產品。

1.2方法取患者與供血者紅細胞，分別用低離子強度鹽溶液與生理鹽水配成3%～5%的紅細胞懸液。主側管加受血者的血清40 μL和供血者3%～5%的紅細胞懸液40 μL。次側管中加供血者的血清40 μL和受血者3%～5%的紅細胞懸液40 μL置37℃孵育10 min，用專用離心機離心5 min，觀察結果。EDTA-K2抗凝血2.0～3.0mL，3 000 r/min離心5 min，分離血漿。取供血者（2 189例）紅細胞成分血袋辮子制作血樣，用干凈竹簽去除血凝塊，3 000 r/min離心5 min，分離血漿。分別記錄2種方法的交叉配血結果。

1.3統計學處理應用SPSS13.0統計軟件進行統計學分析，計數資料以率或百分比表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結　果

2.1兩種介質紅細胞懸液交叉配血結果陽性率比較2 189份標本用低離子強度鹽溶液配制紅細胞懸液，微柱凝集法交叉配血，檢測出現54例陽性反應，生理鹽水配制紅細胞檢測出現32例陽性反應，2種介質紅細胞懸液交叉配血結果統陽性率比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.2兩種介質紅細胞懸液交叉配血反應強度比較在微柱凝膠卡的反應凝集強度用生理鹽水配制紅細胞懸液和低離子強度鹽溶液配制的紅細胞懸液相比敏感性明顯較低，尤其在（+++）～（++++）的凝集反應強度下，低離子強度鹽溶液法占74%，同比鹽水法25%檢測敏感性升高49%，提高了反應強度，增加了檢測的準確性。2種介質紅細胞懸液交叉配血反應強度比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表1　兩種介質紅細胞懸液交叉配血結果比較（n）

表2　兩種介質紅細胞懸液交叉配血反應強度比較［n（%）］

3　討　論

低離子強度鹽溶液主要是由葡萄糖，氯化鈉，抗凝劑，抗菌藥物及防腐劑等組成。由于低離子強度鹽溶液有降低介子的離子強度，減少紅細胞周圍的電子云，提供試驗所需最佳反應的離子強度，增加抗原抗體之間的引力，使抗原抗體反應加強，更加容易出現凝集。陽性率增加1.4%，提高了檢測結果的準確性。兩種實驗結果都是次側配血不和居多，其中低離子強度鹽溶液檢測法51例，生理鹽水檢測法30例。原因是患者紅細胞被自身抗體致敏，直接抗人球蛋白試驗陽性［1］，是次側不和的主要原因［2］。主要見于自身免疫性溶血性貧血、淋巴細胞性白血病、多發性骨髓瘤（MM）、骨髓異常增生綜合征（MDS）、陣發性睡眠性血紅蛋白尿（PNH）患者。主側陽性不合者為血型不規則抗體［3］引起的凝集。

檢測結果顯示，配制紅細胞懸液時用低離子強度鹽溶液作介質，其敏感性明顯高于用生理鹽水作介質。我們認為低離子強度鹽溶液用于微柱凝集交叉配血有很多優點：（1）低離子強度溶液配制紅細胞懸液，可增強抗原抗體的結合，縮短孵育時間，提高輸血相關實驗的檢測效率［4］。（2）提高不規則抗體檢出率，尤其是弱抗體或低濃度抗體的檢出率，提升患者輸血安全性；（3）提高微柱凝集法加叉配血實驗［5］敏感性，且結果穩定；（4）在嬰兒的ABO血型鑒定［6］，新生兒溶血病［7］，ABO反定檢測［8］等方面應用也有較好效果。但某些少見的抗體如抗-k（k1）并非適合在低離子強度溶液反應體系下測定，這或許是因為Kell系統的抗體與某些自身免疫性溶血性貧血（AIHA）有關，而微柱凝集實驗技術不適合于直接抗人球蛋白實驗陽性的紅細胞樣本［9］。值得注意的是，低離子強度鹽溶液并不適合使用于作紅細胞儲存溶液，紅細胞在低離子強度鹽溶液儲存超過12 h后，會耗損部分抗原。低離子強度溶液也并不適用于配制的ABO反定型紅細胞［10］，也會耗損部分抗原。在配制紅細胞懸液時尚需注意低離子強度鹽溶液和血液的體積及比例，以便獲得最佳離子強度，改變體積和比例可能會影響間接抗人球蛋白實驗的敏感性和（或）特異性。適當的方法保存低離子強度鹽溶液，也是確保交叉配血試驗結果可靠的重要手段［11］。

總之，在實際在臨床的輸血過程中，影響因素很多且無法避免。首先應嚴格按照實驗步驟和結果判定說明的步驟和方法進行，以確保實驗的準確性。同時應運用為微柱凝集法，凝聚胺法和生理鹽水法多種方法聯合配血，有助于最大限度減少輸血反應的發生，保證臨床輸血安全。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2016.03.039

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1009-5519（2016）03-0424-02

（2015-09-10）